1、ICS 67.040 C 53 B 中华人民共和国国家标准GB/T 5009. 29一2003代替GB/T5009.29-1996 食品中山梨酸、苯甲酸的测定Determination of sorbic acid and benzioc acid in foods 2003-08-11发布2004-01心1实施中华人民共和国卫生变发布中国国家标准化管理委员百GB/T 5009.29-2003 前言本标准代替GB/T5009. 29-1996(食品中山梨酸、苯甲酸的测定方法儿本标准与GB/T5009. 29一1996相比主要修改如下g修改了标准的中文名称，标准中文名称改为食品中山梨酸、苯甲酸的
2、测定以一一按照GB/T20001. 4-2001(标准编写规则第4部分g化学分析方法对原标准的结构进行了修改。本标准由中华人民共和国卫生部提出并归口。本标准第一法由卫生部食品卫生监督检验所负责起草。本标准第二法由天津食品卫生监督检验所、辽宁省食品卫生监督检验所、武汉市卫生防疫站、浙江省卫生防疫站、四川省卫生防疫站负责起草。本标准第三法由卫生部食品卫生监督检验所负责起草。本标准于1985年首次发布.1996年第一次修订，本次为第二次修订。232 食品中山梨酸、苯甲酸的测定1 范围本标准规定了酱油、水果汁、果酱等食品中山梨酸、苯甲酸含量的测定方法。本标准适用于酱油、水果汁、果酱等食品中山梨酸、苯甲
3、酸含量的测定。GB/T 5009.29-2003 最低检出浓度g气相色谱法最低检出量为1阅，用于色谱分析的试样为1g时，最低检出浓度为1mg/kg, 第-法气相色谱法2 原理试样酸化后，用乙隧提取山梨酸、苯甲酸，用附氢火焰离子化检测器的气相色谱仪进行分离测定，与标准系列比较定量。3 试剂3.1 乙酶2不含过氧化物。3.2 石汹隧s沸程30C60C。3.3 盐酸。3.4 元水硫酸锅。3.5 盐酸0+1).取100mL盐酸，加水稀释至200mL。3.6 氯化纳酸性溶液(40g/L).于氯化销溶液(40g/Ll中加少量盐酸。+1)酸化。3.7 山梨酸、苯甲酸标准溶液准确称取山梨酸、苯甲酸各0.200
4、0 g，置于100mL容量瓶中，用石油隧-乙隧(3+1)混合溶剂溶解后并稀释至刻度。此溶液每毫升相当于2.0mg山梨酸或苯甲酸。3.8 山梨酸、苯甲酸标准使用液z吸取适量的山梨酸、苯甲酸标准溶液，以石油隧乙酷(3+1)混合溶剂稀哩尹毫升相当于50、100、150、200、250月山梨酸或苯甲酸。4 仪器气相色谱仪z具有氢火焰离子化检测器。5 分析步骤5.1 试样提取称取2.50g事先混合均匀的试样，置于25mL带塞量筒中，加0.5mL盐酸。+1)酸化，用15、10 mL乙隧提取两次，每次振摇1min，将上层乙隧提取液吸入另一个25mL带塞量筒中，合并乙隧提取液。用3mL氯化纳酸性溶液(40g/
5、L)洗涤两次，静止15min，用滴管将乙隧层通过无水硫酸销滤人25 mL容量瓶中。加乙隧至刻度，混匀。准确吸取5mL乙酷提取液于5mL带塞刻度试管中，置40C水浴上挥干，加入2mL石油酷乙隧(3十1)混合溶剂溶解残渣，备用。233 GB/T 5009.29-2003 5.2 色谱参考条件5.2.1 色谱柱g玻璃柱，内径3mm，长2m，内装涂以5%DEGS十1%磷酸固定液的60目80目Chromosorb W A W. 5.2.2 气流速度z载气为氯气，50mL/min(氮气和空气、氧气之比按各仪器型号不同选择各自的最佳比例条件).5.2.3 温度s进样口230C;检测器230C;柱温170C。
6、5.3 测定进样2L标准系列中各浓度标准使用液于气相色谱仪中，可测得不同浓度山梨酸、苯甲酸的峰高，以浓度为横坐标，相应的峰高值为纵坐标，绘制标准曲线。同时进样2L试样溶液，测得峰高与标准曲线比较定量。5.4 结果计算试样中山梨酸或苯甲酸的含量按式(1)进行计算。式中zx = A X 1000 =一一-mX立XX100025 V j X一一一试样中山梨酸或苯甲酸的含量，单位为毫克每千克(mg/kg);A 测定用试样液中山梨酸或苯甲酸的质量，单位为微克(g);Vj 加入石油酿乙隧(3+1)混合溶剂的体积，单位为毫升(mL);V，一测定时进样的体积，单位为微升(L);m一一试样的质量，单位为克(g)
7、; 5 测定时吸取乙磁提取液的体积，单位为毫升(mL);25一试样乙隧提取液的总体积，单位为毫升(mL)。由测得苯甲酸的量乘以1.18，即为试样中苯甲酸销的含量。计算结果保留两位有效数字。5.5 精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。5.6 其他山梨酸和苯甲酸的气相色谱图见图1。山梨酸保留时间2min53 s;苯甲酸保留时间6min 8 So 234 .( 1 ) GB/T 5009.29-2003 僵黯击SEM晴图1第二法高效液相色谱法6 原理试样加温除去二氧化碳和乙醇，调pH至近中性，过滤后进高效液相色谱仪，经反相色谱分离后，根据保留时间和峰面积进
8、行定性和定量。7 试剂方法中所用试剂，除另有规定外，均为分析纯试剂，水为蒸馆水或同等纯度水，溶液为水溶液。7.1 甲醇经滤膜(0.5m)过滤。7.2 稀氨水0+1)，氨水加水等体积混合。7.3 乙酸镀溶液(0.02mol/L) ，称取1.54 g乙酸镀，加水至1000 mL.溶解，经0.45m滤膜过滤。7.4 碳酸氢销溶液(20g/L) ，称取2g碳酸氢纳(优级纯).加水至100mL.振摇溶解。7.5 苯甲酸标准储备溶液2准确称取0.1000g苯甲酸，加碳酸氢销溶液(20g/Ll 5 mL.加热溶解，移入100mL容量瓶中，加水定容至100mL.苯甲酸含量为1mg/mL.作为储备溶液。7.6
9、山梨酸标准储备溶液s准确称取0.1000 g山梨酸，加碳酸氢锅溶液(20g/L)5 mL.加热溶解，移入100mL容量瓶中，加水定容至100mL.山梨酸含量为1mg/mL.作为储备溶液。7.7 苯甲酸、山梨酸标准混合使用溶液z取苯甲酸、山梨酸标准储备溶液各10.0mL.放入100mL容量瓶中，加水至刻度。此溶液含苯甲酸、山梨酸各0.1mg/mL.经0.45m滤膜过滤(同时测定糖精纳时可加GB/T5009. 28-2003中3.4糖精锦标准储备溶液)。235 GB/T 5009.29-2003 8 仪器高效液相色谱仪(带紫外检测器)。9 分析步9.1 试样处理9.1.1 汽水s称取5.00 g1
10、0. 0 g试样，放入小烧杯中，微温搅拌除去二氧化碳，用氨水0+1)调pH约7。加水定容至10mL20 mL，经滤膜(HA0.45m)过滤。9.1.2 果汁类g称取5.00 glO. 0 g试样，用氨水0+1)调pH约7，加水定容至适当体积，离心沉淀，上清液经0.45m滤膜过滤。9. 1. 3 配制酒类z称取10.0g试样，放入小烧杯中，水浴加热除去乙醇，用氨水0+1)调pH约7，加水定容至适当体积，经0.45m滤膜过滤。9.2 离效液相色谱参考条件9.2.1 柱，YWG-C84.6 mmX250 mm，10m不锈钢柱。9.2.2 流动相2甲醇s乙酸钱溶液(0.02mol/L) (5 I 9日
11、。9.2.3 流速，1mL/min. 9.2.4 进样量，10L.9.2.5 检测器2紫外检测器，230nm波长，0.2AUFS.根据保留时间定性，外标峰面积法定量。9.3 结果计算试样中苯甲酸或山梨酸的含量按式(2)进行计算。式中sX 一年10旦LmX告X1000 X一一试样中苯甲酸或山梨酸的含量，单位为克每千克(g/kg)，A一一进样体积中苯甲酸或山梨酸的质量，单位为毫克(mg)，V2一一进样体积，单位为毫升(mL)，V , 试样稀释液总体积，单位为毫升(mL)，m 试样质量，单位为克(g)。计算结果保留两位有效数字。9.4 精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术
12、平均值的10%。9.5 其他同GB/T5009. 28-2003的5.6.注2本方法可同时测定糖精铺囚10 原理第三法薄层色谱法.( 2 ) 试样酸化后，用乙隧提取苯甲酸、山梨酸。将试样提取液浓缩，点于聚戳胶薄层板上，展开。显色后，根据薄层板上苯甲酸、山梨酸的比移值。与标准比较定性，并可进行概略定量。236 GB/T 5009.29-2003 11 试剂11. 1 异丙醇。11. 2 正丁醇。11. 3 石油隧z沸程30C-60C。11. 4 乙越不含过氧化物。11. 5 氨水。11. 6 无水乙醇。11. 7 聚酷胶粉，200目。11.8 盐酸。十1)，取100mL盐酸，加水稀释至200mL
13、。11. 9 氯化纳酸性溶液(40g/L):于氯化锅溶液(40g/L)中加少量盐酸。+1)酸化。11.10 展开剂如下:11. 10. 1 正丁醇+氨水+无水乙醇(7十1十2)。11. 10.2 异丙醇+氨水十元水乙醇(7十1+2)。11. 11 山梨酸标准溶液z准确称取0.2000g山梨酸，用少量乙醇溶解后移人100mL容量瓶中，并稀释至刻度，此溶液每毫升相当于2.0mg山梨酸。11. 12 苯甲酸标准溶液:1准确称取0.2000g苯甲酸，用少量乙醇溶解后移入100mL容量瓶中，并稀释至刻度，此溶液每毫升相当于2.0mg苯甲酸。11. 13 显色lfiJ:澳甲盼紫-乙醇(50%)溶液(0.4
14、g/L) ，用氢氧化销溶液(4g/L)调至pH二8012 仪器12.1 吹风机。12.2 层析缸。12.3 玻璃板:10 cmX 18 cm o 12.4 微量注射器:10L，100L。12.5 喷雾器。13 分析步骤13.1 试样提取称取2.50g事先混合均匀的试样，置于25mL带塞量筒中，加0.5mL盐酸。+1)酸化，用15、10 mL乙酶提取两次，每次振摇1min，将上层黯提取液吸入另一个25mL带塞量筒中，合并乙隧提取液。用3mL氯化销酸性榕液(40g/L)洗涤两次，静止15min，用滴管将乙隧层通过无水硫酸销滤入25 mL容量瓶中。加乙腿至刻度，混匀。吸取10.0mL乙隧提取液分两次
15、置于10mL带塞离心管中，在约40C的水浴上挥干，加入0.10mL乙醇溶解残渣，备用。13.2 测定13.2.1 聚酌胶粉板的制备z称取1.6g聚酷胶粉，加0.4g可溶性淀粉，加约15mL水，研磨3min_ 5 min，立即倒入涂布器内制成10cmX 18 cm、厚度0.3mm的薄层板两块，室温干燥后，于80C干燥1 h，取出，置于干燥器中保存。13.2.2 点样z在薄层板下端2cm的基线上，用微量注射器点lL、2L试样液，同时各点lL、2L山梨酸、苯甲酸标准溶液。13.2.3 展开与显色2将点样后的薄层板放入预先盛有展开剂01.10. 1或11.10. 2)的展开槽内，展开槽周围贴有滤纸，待
16、溶剂前沿上展至10cm，取出挥干，喷显色剂，斑点成黄色，背景为蓝色。试样中所含山梨酸、苯甲酸的量与标准斑点比较定量(山梨酸、苯甲酸的比移值依次为0.82、0.73)。237 GB/T 5009.29-2003 13.3 结果计算试样中苯甲酸或山梨酸的含量按式(3)进行计算。式中=X _A X 1000 10. V , mX一一二X1000 25 V , X 试样中苯甲酸或山梨酸的含量，单位为克每千克(g/kg); A 测定用试样液中苯甲酸或山梨酸的质量，单位为毫克(mg); V , 加人乙醇的体积，单位为毫升(mL);V2一一测定时点样的体积，单位为毫升(mL);m一一试样质量，单位为克(g)
17、;10-一测定时吸取乙酷提取液的体积，单位为毫升(mL);25 试样乙隧提取液总体积，单位为毫升(mL)。注g本方法还可以同时测定果酱、果汁中的糖精。禁用防腐剂定性试验14 咽酸、翻砂14.1 试剂14. 1. 1 盐酸。十1)，量取盐酸100mL，加水稀释至200mL. 14. 1. 2 碳酸纳溶液(40g/L)。14. 1. 3 氢氧化纳溶液(4g/L)，称取2g氢氧化俐，溶于水并稀释至500mL。.( 3 ) 14. 1. 4 姜黄试纸=称取20g姜黄粉末，用冷水浸渍4次，每次各100mL.除去水溶性物质后，残渣在100C干燥，加100mL乙醇，浸渍数日，过滤。取1cmX8 cm滤纸条，
18、浸人溶液中，取出，于空气中干燥，贮于玻璃瓶中。14.2 分析步骤14.2.1 试样处理称取3g5 g固体试样，加碳酸销溶液(40g/L)充分湿润后，于小火上烘干、炭化后再置高温炉中灰化。量取10mL20 mL液体试样，加碳酸纳溶液(40g/L)至呈碱性后，置水浴上蒸干、炭化后再置高温炉中灰化。14.2.2 定性试验14.2.2.1 姜黄试纸法2取一部分灰分，滴加少量水与盐酸0+1)至微酸性，边滴边搅拌，使残渣溶解，微温后过滤。将姜黄试纸浸人滤液中，取出试纸置表面皿上，于60C70，干燥，如有蹦酸、棚砂存在时，试纸显红色或橙红色，在其变色部分熏以氨即转为绿黑色。14.2.2.2 焰色反应取灰分置
19、于站锅中，加硫酸数滴及乙醇数滴，直接点火，棚酸或硕砂存在时，火焰呈绿色。15 水杨酸15.1 试剂15. 1. 1 三氯化铁溶液(10g/L)。15. 1. 2 亚硝酸饵溶液(100g/L)。15. 1. 3 乙酸(50%)。15. 1. 4 硫酸铜溶液(100g/L) ，称取10g硫酸铜(CuSO，5H，Ol，加水溶解至100mL. 238 GB/T 5009.29一200315.2 分析步骤15.2.1 试样提取按GB/r5009. 28-2003中9.1操作，将乙隧提取液蒸干后，残渣备用。15.2.2 定性试瞌15.2.2.1 三氯化铁法残渣加l滴2滴三氯化铁溶液(10g/L).水杨酸存在时显紫墓色。15.2.2.2 确证试验g溶解残渣于少量热水中，冷后加4滴5滴亚硝酸饵溶液(100g/L). 4滴5滴乙酸(50%)及1滴硫酸铜溶液(100g/L).混匀，煮沸0.5h.放置片刻，水杨酸存在时呈血红色(苯甲酸不显色)。239
