1、ICS 67.040 C 53 中华人民共和国国家标准食品中硫肢素(维生GB/T 5009.84-2003 代替GB/T12390-1990 B, )的测定Determination of thiamine (vitamin B1) in foods 2003-08-11发布中华人民共和国卫生部中国国家标准化管理委员会2004-01-01实施发布609 GB/T 5009.84-2003 前言本标准对应于AOAC45. 1. 07(食物中硫胶素的荧光测定法)(1995年版)。本标准与AOAC45. 1. 07的一致性程度为非等效。本标准代替GB/T12390一1990(食物中硫胶素(维生素B，
2、)的测定方法儿本标准与GB/T12390-1990相比主要修改如下:修改了标准的中文名称，标准中文名称改为食品中硫胶素(维生素B，)的测定讥按GB/T20001. 4-2001(标准编写规则第4部分:化学分析方法对原标准的结构进行了修改。本标准由中华人民共和国卫生部提出并归口。本标准起草单位z中国预防医学科学院营养与食品卫生研究所。本标准主要起草人2王光亚、张宏伟、杨晓莉、门建华、杨月欣。原标准于1990年首次发布，本次为第一次修订。610 GB/T 5009.84-2003 食品中硫肢素(维生素B1)的测定1 范围本标准规定了各类食品中硫胶素的测定方法。本标准适用于各类食品中硫胶素的测定。本
3、方法检出限为0.05吨，线性范围为O.2glO问。2 原理硫胶素在碱性铁氧化御溶液中被氧化成唾田野色素，在紫外线照射下，略略色素发出荧光。在给定的条件下，以及没有其他荧光物质干扰时，此荧光之强度与唾略色素量成正比，即与溶液中硫胶素量成正比。如试样中含杂质过多，应经过离子交换剂处理，使硫胶素与杂质分离，然后以所得溶液作测定。3试剂3. 1 正丁醇=需经重蒸馆后使用。3.2 元水硫酸锅。3.3 淀粉酶和蛋白酶。3.4 O. 1 mol/L盐酸，8.5mL浓盐酸(相对密度1.19或1.20)用水稀释至1000 mLo 3.5 O. 3 mol/L盐酸，25.5mL浓盐酸用水稀释至1000 mLo 3
4、.6 2 mol/L乙酸纳溶液，164g元水乙酸纳溶于水中稀释至1000mL 3. 7 氯化饵溶液(250g/L) , 250 g氯化饵溶于水中稀释至1000 mL。3.8 酸性氯化饵溶液(250g/L) , 8. 5 mL浓盐酸用25%氯化何溶液稀释至1000 mL。3.9 氢氧化销溶液(150g/L) ,1 5 g氢氧化纳溶于水中稀释至100mL。3. 10 1 %铁氟化梆溶液。og/Ll,1 g铁氧化饵溶于水中稀释至100mL.放于棕色瓶内保存。3. 11 碱性铁氟化伺溶液:取4mL 10 g/L铁氧化伺溶液，用150g/L氢氧化制溶液稀释至60mL。用时现配，避光使用。3. 12 乙酸
5、溶液，30mL冰乙酸用水稀释至1000 mL。3. 13 活性人造浮石.称取200g 40目60目的人造浮石，以10倍于其容积的热乙酸溶液(3.12)搅洗2次，每次10min;再用5倍于其容积的250g/L热氯化何溶液(3.7)搅洗15min;然后再用稀乙酸溶液(3. 12)搅洗10min;最后用热蒸馆水洗至没有氯离子。于蒸馆水中保存。3. 14硫胶素标准储备液(0.1 mg/mL)，准确称取100mg经氯化钙干燥24h的硫胶素，溶于0.01 mol/L盐酸中，并稀释至1000 mL。于冰箱中避光保存。3. 15 硫胶素标准中间液(10g/mLl，将硫胶素标准储备液用0.01mol/L盐酸稀释
6、10倍，于冰箱中避光保存。3. 16 硫胶素标准使用液(0.1g/mL)z将硫胶素标准中间液用水稀释100倍，用时现配。3. 17 澳甲盼绿溶液(0.4g/Ll，称取0.1g澳甲盼绿，置于小研钵中，加人1.4 mL O. 1 mol/L氢氧化纳溶液研磨片刻，再加入少许水继续研磨至完全溶解，用水稀释至250mL。4 仪器4. 1 电热恒温培养箱。4.2 荧光分光光度计。4. 3 MaizelGerson反应瓶如图1所示。611 GB/T 5009.84-2003 4.4盐基交换管如图2所示。1.5cm Emw 4cm 贮液槽2.5cm O.8cm 吏换柱lc立n50-T 毛细曹主图1Maizel
7、-Gerson反应瓶圄2盐基交换管5 分析步骤5. 1 试样制备5. 1. 1 试样准备试样采集后用匀浆机打成匀浆于低温冰箱中冷冻保存，用时将其解冻后混匀使用。干燥试样要将其尽量粉碎后备用。5. 1. 2 提取5. 1. 2. 1 准确称取一定量试样(估计其硫胶素含量约为10问30吨，一般称取2g10 g试样)，置于100 mL三角瓶中，加入50mL O. 1 mol/L或0.3mol/L盐酸使其溶解，放入高压锅中加热水解，121c 30 min，凉后取出。5. 1. 2.2 用2mol/L乙酸销调其pH值为4.5(以0.4g/L澳甲酣绿为外指示剂)。5. 1. 2. 3 按每克试样加入20m
8、g淀粉酶和40mg蛋白酶的比例加入淀粉酶和蛋白酶。于45C50C温箱过夜保温(约16h)。5. 1. 2. 4 凉至室温，定容至100mL，然后混匀过滤，即为提取液。5. 1. 3 净化5. 1. 3.1 用少许脱脂棉铺于盐基交换管的交换柱底部，加水将棉纤维中气泡排出，再加约1g活性人造浮石使之达到交换柱的二分之一高度。保持盐基交换管中液面始终高于活性人造浮石。5.1.3.2 用移液管加入提取液20mL60 mL(使通过活性人造浮石的硫胶素总量约为25g)。5. 1. 3. 3 加入约10mL热蒸馆水冲洗交换柱，弃去洗液。如此重复三次。5. 1. 3. 4 加入20mL 250 g/L酸性氯化
9、梆(温度为900C左右)，收集此液于25mL刻度试管内，凉至室温，用250g/L酸性氯化梆定容至25mL，即为试样净化液。5. 1. 3. 5 重复上述操作，将20mL硫胶素标准使用液加入盐基交换管以代替试样提取液，即得到标准净化液。5. 1. 4 氧化5.1.4.1 将5mL试样净化液分别加人A、B两个反应瓶。5. 1. 4. 2 在避光条件下将3mL 150 g/L氢氧化纳加入反应瓶A，将3mL碱性铁氧化何溶液加入反应瓶B，振摇约15S，然后加入10mL正T醇;将A、B两个反应瓶同时用力振摇1.5 mino 5. 1. 4. 3 重复上述操作，用标准净化液代替试样净化液。5. 1. 4.
10、4 静置分层后吸去下层碱性溶液，加入2g3g无水硫酸纳使溶液脱水。5.2型tl定5. 2. 1 荧光测定条件.激发波长365nm;发射波长435nm;激发波狭缝5nm;发射波狭缝5nrno 612 GB/T 5009.84-2003 5.2.2 依次测定下列荧光强度za) 试样空白荧光强度(试样反应瓶A); b) 标准空白荧光强度(标准反应瓶A); c) 试样荧光强度(试样反应瓶B); d) 标准荧光强度(标准反应瓶凶。6 结果计算 V叫一民 V二 U U X 式中X 试样中硫胶素含量.单位为毫克每百克(mg/100g); U一一试样荧光强度;Ub一一一试样空白荧光强度$s-一标准荧光强度;Sb一一标准空白荧光强度;c 硫胶素标准使用液浓度，单位为微克每毫升(g/mL); V 用于净化的硫胶素标准使用液体积，单位为毫升(mL); V1 试样水解后定容之体积，单位为毫升(mL); V2一一试样用于净化的提取液体积，单位为毫升(mL); m一一试样质量，单位为克(g); 100 试样含量由微克每克(g/g)换算成毫克每百克(mg/100g)的系数。1 000 计算结果保留两位有效数字。7 精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。613
