1、ICS 67.040 C 53 中华人民共和国国家标准食品中环己氨磺GB/T 5009.97-2003 代替GB(T13112-1991 铀的测定Determination of sodium cyclamate in foods 2003-08-11发布中华人民共和国卫生部中国国家标准化管理委员会2004-01-01实施发布687 GB/T 5009.97-2003 688 前言本标准代替GB/T13112-1991(食品中环己基氨基磺酸纳的测定方法儿本标准与GB/T13112一1991相比主要修改如下2一一修改了标准中文名称，标准中文名称改为食品中环己基氨基磺酸俐的测定以一一按GB/T20
2、001. 4一2001(标准编写规则第4部分z化学分析方法对原标准的结构进行了修改。本标准由中华人民共和国卫生部提出并归口。本标准由广州市卫生防疫站、广东省卫生防疫站、卫生部食品卫生监督检验所负责起草。本标准第一、二法主要起草人2张暖民、江月碧、吕澳生、粱立文、刘燕霞。本标准第三法主要起草人z杨祖英、崔宏、蒋罗章、焦淑婷、易再明。原标准于1991年首次发布，本次为第一次修订。GB/T 5009.97-2003 食品中环己基氨基磺酸铀的测定1 范固本标准规定了食品中环己基氨基磺酸销的三种测定方法气相色谱法、比色法、薄层层析法。本标准气相色谱法及比色法适用于饮料、凉果等食品中环己基氨基磺酸纳的测定
3、，薄层层析法适用于饮料、果汁、果酱、糕点中环己基氨基磺酸纳的含量测定。本标准检出限为4吨。第一法气相色谱法2 原理在硫酸介质中环己基氨基磺酸销与亚硝酸反应，生成环己醇亚硝酸酶，利用气相色谱法进行定性和定量。3试J3. 1 正己炕。3.2 氯化锅。3.3 层析硅胶(或海砂。3.4 50 g/L亚硝酸销溶液。3.5 100 g/L硫酸溶液。3.6 环己基氨基磺酸纳标准溶液(含环己基氨基磺酸锅.98%) :精确称取1.000 0 g环己基氨基磺酸钩，加人水榕解并定容至100mL.此溶液每毫升含环己基氨基磺酸锅10mg。4 仪器4. 1 气相色谱仪2附氢火焰离子化检测器。4.2 旋涡混合器。4.3 离
4、心机。4.4 10L微量注射器。4.5 色谱条件4.5. 1 色谱柱z长2m.内径3mm，U形不锈钢柱。4.5.2 固定相:Chromosorb W A W DMCS 80目-100目，涂以10%SE-30.4.5.3 测定条件柱温:80C ;汽化温度:150C ;检测温度，150C。流速=氮气40mL/min;氢气30mL/min;空气300mL/min。5 试样处埋5. 1 液体试样z摇匀后直接称取。含二氧化碳的试样先加热除去，含酒精的试样加40g/L氢氧化销溶液调至碱性，于沸水浴中加热除去，制成试样。5.2 固体试样:凉果、蜜钱类试样将其剪碎制成试祥。689 GB/T 5009.97一2
5、0036 分析步骤6. 1 试样制备6. 1. 1 液体试样z称取20.0g试样于100mL带塞比色管，置冰浴中。6. 1. 2 固体试样z称取2.0g已剪碎的试样于研钵中，加少许层析硅胶(或海砂)研磨至呈干粉状，经漏斗倒入100mL容量瓶中，加水冲洗研钵，并将洗液一并转移至容量瓶中。加水至刻度，不时摇动，1h 后过滤，即得试样，准确吸取20mL于100mL带塞比色管，置冰浴中。6.2 测定6. 2. 1 标准曲线的制备:准确吸取1.00 mL环己基氨基磺酸纳标准溶液于100mL带塞比色管中，加水20mL。置冰浴中，加人5mL 50 g/L亚硝酸纳溶液，5mL 100 g/L硫酸溶液，摇匀，在
6、冰浴中放置30 min，并经常摇动，然后准确加入10mL正己烧，5g氯化锅，摇匀后置旋涡海合器上振动1min(或振摇80次)，待静止分层后吸出己统层于10mL带塞离心管中进行离心分离，每毫升己烧提取液相当1 mg环己基氨基磺酸俐，将标准提取液进样1L5L于气相色谱仪中，根据响应值绘制标准曲线。6.2.2 试样管按6.2. 1自加入5mL 50 g/L亚硝酸锅溶液起依法操作，然后将试料同样进样lL5L，测得响应值，从标准曲线图中查出相应含量。7 结果计算见式(1)。m, X lO X100o 10m, X二=一一一一( 1 ) m X V X 1 000 m X V 式中sX 试样中环己基氨基磺
7、酸纳的含量，单位为克每千克(g/kg); m 试样质量，单位为克(g); V 迸样体积，单位为微升L); 10 正己烧加入量，单位为毫升(mL); m , 测定用试样中环己基氨基磺酸铀的质量，单位为微克(Ig)。计算结果保留两位有效数字。日精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。第二法比色法9 原理在硫酸介质中环己基氨基磺酸纳与亚硝酸纳反应，生成环己醇亚硝酸酶，与磺胶重氮化后再与盐酸荼乙二胶偶合生成红色染料，在550nm波长测其吸光度，与标准比较定量a10试剂10. 1 三氯甲烧。10.2 甲醇。10.3透析ifJl，称取O.5 g二氯化柔和12.5 g
8、氯化销于烧杯中，以O.01 mol/L盐酸溶液定容至100 mL。10.4 10 g/L亚硝酸锅溶液。690 GB/T 5009.97-2003 10.5 100 g/L硫酸溶液。10.6 100 g/L尿素溶液(临用时新配或冰箱保存)。10.7 100 g/L盐酸溶液。10.8 10日/L磺胶溶液2称取1g磺胶溶于10%盐酸溶液中，最后定容至100mL, 10.9 1 g/L盐酸茶乙二胶溶液。10. 10 环己基氨基磺酸纳标准溶液2精确称取O.100 0 g环己基氨基磺酸锅，加水浴解，最后定容至100 mL.此溶液每毫升含环已基氨基磺酸销1mg，临用时将环己基氨基磺酸纳标准溶液稀释10倍。此
9、液每毫升含环己基氨基磺酸销0.1mg, 1 1 仪器1 1. 1 分光光度计。11. 2 旋涡混合器。11. 3 离心机。11. 4 透析纸。12 试样处理同第5章。13 分析步骤13. 1 提取13. 1. 1 液体试样2称取10.0 g试样于透析纸中，加10mL透析剂，将透析纸口扎紧。放人盛有100 mL水的200mL广口瓶内，加盖，透析20h24 h得透析液。13. 1. 2 固体试样2准确吸取10.0mL经6.1. 2处理后的试样提取液于透析纸中，以下操作按13.1.1 项下进行。13.2 测定13. 2. 1 取2支50mL带塞比色管，分别加入10mL透析液和10mL标准液，子。3C
10、冰浴中，加入1 mLlO g/L亚硝酸纳溶液.1mL 100 g/L硫酸溶液，摇匀后放入冰水中不时摇动，放置1h.取出后加15 mL三氯甲饶，置旋涡混合器上振动1mn静置后吸去上层液。再加15mL水，振动1min，静止后吸去上层液，加10mL 100 g/L尿素溶液.2mL 100 g/L盐酸溶液，再振动5mn，静宣后吸去上层液，加15mL水，振动1min，静置后吸去上层液，分别准确吸出5mL三氯甲烧于2支25mL比色管中。另取一支25mL比色管加入5mL三氯甲烧作参比管。于各管中加入15mL甲醇.1mL 10 g/L磺胶，置冰水中15mi口，取出，恢复常温后加入1mL 1 g/L盐酸禁乙二胶
11、溶液，加甲醇至刻度，在15C30C下放置20min -30 min，用1cm比色杯于波长550nm处测定吸光度，测得吸光度A及A，。13.2.2 另取2支50mL带塞比色管，分别加入10mL水和10mL透析液，除不加10g/L亚硝酸饷外，其他按13.2.1项下进行，测得吸光度A，o及儿。14 结果计算见式(2)。式中zA - Ao , 100 + 10 1 , 1 000 x=一一-一一X-T - X X:-一(2 ) m A, - A, V 1 000 I 000 x一一试样中环己基氨基磺酸纳的含量，单位为克每千克(g/kg); m一一一试样质量，单位为克(g);691 GB/T 5009.
12、97-2003 V 透析液用量，单位为毫升(mL); C一一标准管浓度，单位为微克每毫升(g/mL); A，-标准液吸光度;A, 水的吸光度pA 试样透析液吸光度;A。不加亚硝酸铀的试样透析液吸光度。计算结果保留两位有效数字。15 精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。第三法薄层层析法16 原理试样经酸化后，用乙隧提取，将试样提取液浓缩，点于聚酷胶薄层板上，展开，经显色后，根据薄层板上环己基氨基磺酸铀的比移值及显色斑深浅，与标准比较进行定性、概略定量。17 试剂17. 1 异丙醇。17.2 正丁醇。17.3 石油隧.沸程30C-60C。17.4 乙隧(
13、不含过氧化物)。17.5 氢氧化胶。17.6 元水乙醇。17.7 氯化销。17. 8 硫酸纳.17.9 6 mol/L盐酸z取50mL盐酸加到少量水中，再用水稀释至100mL, 17. 10 聚酷胶粉(尼龙的，200目。17. 11 环己基氨基磺酸标准溶液z精密称取0.0200 g环己基氨基磺酸，用少量无水乙醇溶解后移入10 mL容量瓶中，并稀释到刻度，此溶液每毫升相当于2mg环己基氨基磺酸，二周后重新配制(环己基氨基磺酸的熔点，169C-170C)。17. 12 展开剂17.12.1 正丁醇浓氨水元水乙醇(20+1+1)。17. 12.2异丙醇浓氨水元水乙醇(20+1+1)。17. 13 显
14、色剂s称取0.040g澳甲盼紫溶于100mL 50%乙醇溶液，用1.2mLO.4%氢氧化销溶液调至pH80 18 仪器18. 1 吹风机。18.2 层析缸。18.3 玻璃板，5cmX20 Cffi o 18. 4 微量注射器z10L。18.5 玻璃喷雾器。692 GB/T 5009.97-2003 19 分析步19. 1 试样提取19. 1. 1 饮料、果酱z称取2.5g(mL)已经混合均匀的试样(汽水需加热去除二氧化碳)，置于25mL带塞量筒中，加氯化纳至饱和(约1g)，加O.5 mL 6 mol/L盐酸酸化，用15、10mL乙醒提取两次，每次振摇1min，静止分层，用滴管将上层乙隧提取液通
15、过元水硫酸销滤入25mL容量瓶中，用少量乙酷洗元水硫酸锅，加乙酶至J度，混匀。吸取10.0 mL乙酿提取液分两次置于10mL带塞离心管中，在约40C水浴上挥发至于，加入0.1mL元水乙醇溶解残渣，备用。19.1.2 糕点称取2.5g糕点试样，研碎，置于25mL带塞量筒中，用石油隧提取3次，每次20mL，每次振摇3min，弃去石油酶，让试样挥干后(在通风橱中不断搅拌试样，以除去石油酶)，加人0.5mL 6 mol/L盐酸酸化，再加约1g氯化俐，以下按19.1.1自用15、10mL乙酷提取两次起依法操作。19.2 测定19.2. 1 聚l!l胶粉板的制备z称取4g聚酸胶粉，加1.0g可溶性淀粉，加
16、约14mL水研磨均匀合适为止，立即倒入涂布器内制成面积为5cmX20 cm，厚度为0.3mm的薄层板6块，室温干燥后，于80C干燥1h，取出，置于干燥器中保存、备用。19.2.2 点样=薄层板下端2cm的基线上，用微量注射器于板中间点4L试样液，两侧各点2L、3L环己基氮基磺酸标准液。19. 2. 3 展开与显色=将点样后的薄层板放人预先盛有展开剂(17.12.1或17.12.2)的展开槽内，展开槽周围贴有滤纸，待溶剂前沿上展至10cm以上时，取出在空气中挥干，喷显色剂其斑点呈黄色，背景为蓝色.试样中环己基氨基磺酸的量与标准斑点深浅比较定量(用17.12.2展开剂时，环己基氨基磺酸的比移值约为
17、0.47，山梨酸。73，苯甲酸O.61，糖精O.31)。20 结果计算见式(3)。式中zX m, X 1 000 X 1. 12 2.8m, X V , 一一10 . . V内mXV, mX : X一二X1 000 . , 25 V , x-一一试样中环己基氨基磺酸销的含量.单位为克每千克(或克每升)g/kg(或g/L)J, m 试样点相当于环己基氨基磺酸的质量，单位为毫克(mg), m 一一试样质量，单位为克(g)，V, 加入元水乙醇的体积，单位为毫升(mL), V , 测定时点样的体积，单位为毫升(mU，101-测定时吸取乙隧提取液的体积，单位为毫升(mL), 25 试样乙酶提取液总体积，单位为毫升(mL), 1. 12一一1.00 g环己基氨基磺酸相当环己基氨基磺酸销的质量，单位为克(g)。计算结果保留两位有效数字。21 精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的28%。本标准可以同时测定山梨酸、苯甲酸、糖精等成分。 ( 3 ) 693
