1、GB 619586 1 适用范围 本标准适用于果品、蔬菜及其加工制品中还原型抗坏血酸的测定（不含二价铁、二价锡、一价铜、二氧化硫、亚硫酸盐或硫代硫酸盐），不适用于深色样品。 2 测定原理 染料2，6-二氯靛酚的颜色反应表现两种特性，一是取决于其氧化还原状态，氧化态为深蓝色，还原态变为无色；二是受其介质的酸度影响，在碱性溶液中呈深蓝色，在酸性介质中呈浅红色。 用蓝色的碱性染料标准溶液，对含维生素C的酸性浸出液进行氧化还原滴定，染料被还原为无色，当到达 滴定终点时，多余的染料在酸性介质中则表现为浅红色，由染料用量计算样品中还原型抗坏血酸的含量。 3 仪器设备 a.高速组织捣碎机：800012000
2、r/min。 b.分析天平。 c.滴定管：25ml、10ml。 d.容量瓶：100ml。 e.锥形瓶：100ml、50ml。 f.吸管：10ml、5ml、2ml、1ml。 g.烧杯：250ml、50ml。 h.漏斗。 4 试剂（凡未加说明者均为分析纯） 4.1 浸提剂 4.1.1 偏磷酸：2溶液（ W/V）*偏磷酸不稳定，切勿加热。 4.1.2 草酸：2溶液（ W/V）。 4.2 抗坏血酸标准溶液（1mg/ml）：称取100mg（准确至0.1mg）抗坏血酸*，溶于浸提剂中并稀至100ml。现配现用。 *一般抗坏血酸纯度为99.5以上，可不标定。如试剂发黄，则弃去不用用。若要检查其纯度，可按附录
3、B方法标定。 4.3 2，6-二氯靛酚（2，6-二氯靛酚吲哚酚钠盐）溶液：称取碳酸氢钠52mg溶解在200ml热页码，1/4GB 6195862006-3-28file:/C:InetpubwwwrootdatagbcC619500R.htm蒸馏水中，然后称取2，6-二氯靛酚50mg溶解在上述碳酸氢钠溶液中。冷却定容至250ml，过滤至棕色瓶内，保存在冰箱中。每次使用前，用标准抗坏血酸标定其滴定度。即吸取1ml抗坏血酸标准溶液于50ml锥形瓶中，加入10ml浸提剂，揺匀，用2，6-二氯靛酚溶液滴定至溶液呈粉红色15s不褪色为止。同时，另取10ml浸提剂做空白试验。 滴定度按式（1）计算： 4.
4、4 白陶土（或称高岭土）：对维生素C无吸附性。 5 测定步骤 5.1 样液制备：称取具有代表性样品的可食部分100g，放入组织捣碎机中，加100ml浸提剂，迅速捣成匀浆。称1040g浆状样品，用浸提剂将样品移入100ml容量瓶，并稀释至刻度，摇匀过滤。若滤液有色，可按每克样品加0.4g白陶土脱色后再过滤。 5.2 滴定：吸取10ml滤液放入50ml锥形瓶中，用已标定过的2，6-二氯靛酚溶液滴定，直至溶液呈粉红色15s不褪色为止。同时做空白试验。 6 结果计算 6.1 计算公式： 维生素C按式（2）计算： 6.2 平行测定的结果，用算术平均值表示，取三位有效数字，含量低的保留小数点后两位数字。
5、6.3 平行测定结果的相对相差，在维生素C含量大于20mg/100g时，不得超过2，小于20mg/100g时，不得超过5。 附 录 A 滴定度 T（mg/ml）= C V/（ V1-V2）（1）式中： T 每毫升2，6-二氯靛酚溶液相当于抗坏血酸的毫克数；C抗坏血酸的浓度，mg/ml；V吸取抗坏血酸的体积，ml；V1滴定抗坏血酸溶液所用2，6-二氯靛酚溶液的体积，ml；V2滴定空白所用2，6-二氯靛酚溶液的体积，ml。维生素 C（mg/100g）=（ V-V0） T A/W100（2）式中： V滴定样液时消耗染料溶液的体积，ml；V0滴定空白时消耗染料溶液的体积，ml；T2，6-二氯靛酚染料滴
6、定度，mg/ml；A稀释倍数；W样品重量，g。页码，2/4GB 6195862006-3-28file:/C:InetpubwwwrootdatagbcC619500R.htm二甲苯-二氯靛酚比色法 （补充件） A.1 适用范围 测定深色样品中还原型抗坏血酸。 A.2 测定原理 用定量的2，6-二氯靛酚染料与试样中的维生素C进行氧化还原反应，多余的染料在酸性环境中呈红色，用二甲苯萃取后比色，在一定范围内，吸光度与染料浓度呈线性相关，由剩余染料浓度用差减法计算维生素C含量。 A.3 仪器设备 A.3.1 分光光度计或比色计。 A.3.2 具塞试管：50ml。 A.4 试剂（皆为分析纯） A.4.
7、1 偏磷酸：2溶液（ W/V）。 A.4.2 乙酸钠缓冲溶液（pH4.0）500ml50（ W/V）的乙酸钠溶液与500ml冰乙酸混合。 A.4.3 2，6-二氯靛酚溶液：参照4.3条。 A.4.4 二甲苯。 A.5 测定步骤 A.5.1 标准曲线的绘制：用6只50ml具塞试管加入5ml2偏磷酸和5mlpH4.0的乙酸钠缓冲液，然后依次加入0.0，0.1，0.3，0.6，0.9，1.2及1.5ml2，6-二氯靛酚溶液，用力摇动5s，再向各试管中加入10ml二甲苯，再激烈摇动20s，静置分层后与试样管同时比色（无染料的试液作空白），以吸光度为纵坐标，2，6-二氯靛酚的毫升数为横坐标绘制标准曲线。
8、 A.5.2 吸取5ml2偏磷酸样品浸出液（参照5.1条）于50ml具塞试管中，加5mlpH4.0的乙酸钠缓冲液和2ml染料溶液，激烈摇动5s，立即加入10ml二甲苯，再激烈摇动20s，待静置分层后，从二甲苯层中小心吸取一份，放入1cm比色杯中于500nm波长下进行比色。记录吸光度 A，在标准曲线上查出二甲苯层中2，6-二氯靛酚的毫升数。整个操作应在30min内完成。 A.6 计算公式 维生素C（mg/100g）=（2- V） T A/W100 式中： 2所用2，6-二氯靛酚染料的体积，ml；V查得2，6-二氯靛酚溶液的体积，ml；A稀释倍数；T染料滴定度，mg/ml；页码，3/4GB 619
9、5862006-3-28file:/C:InetpubwwwrootdatagbcC619500R.htm附 录 B 抗坏血酸纯度检验法 （补充件） B.1 称取100mg（准确至0.1mg）抗坏血酸待测样品，用2偏磷酸或2草酸溶液溶解稀释至100ml。 B.2 吸取抗坏血酸溶液1ml于盛10ml2偏磷酸或2草酸溶液的锥形瓶中，加入6碘化钾溶液0.5ml和1淀粉溶液五滴，摇匀。用1.6710-4M碘酸钾标准溶液滴定，终点为极淡蓝色。B.3 计算公式 B.3.1 抗坏血酸浓度按式（B1）计算： B.3.2 抗坏血酸纯度（）按式（B2）计算：W样品重量，g。抗坏血酸浓度= V10.088/ V2（B1）式中： V1滴定时消耗1.6710-4M碘酸钾标准溶液的体积，ml；V2所取抗坏血酸溶液的体积，ml；0.0881ml1.6710-4M碘酸钾溶液相当于抗坏血酸的重量，mg；抗坏血酸纯度（）=（ C V/W）100（B2）式中： C所标定抗坏血酸的浓度，mg/ml；V抗坏血酸溶液总体积，ml；W抗坏血酸重量，mg。页码，4/4GB 6195862006-3-28file:/C:InetpubwwwrootdatagbcC619500R.htm
