1、ICS 67040X 04 囝雷中华人民共和国国家标准GBT 969522008代替GBT 969521988肉与肉制品 脂肪酸测定Meat and meat products-Determination of fatty acids(ISO 5508：1990，Animal and vegetable fats and oilsAnalysis by gas chromatography of methyl esters of fatty acids，ISO 5509：2000，Animal and vegetable fats and oilsPreparation of methyl e
2、sters of fatty acids，MOD)2008-08-28发布 2009-030 1实施丰瞀鹳鬻瓣警糌瞥篓发布中国国家标准化管理委员会及111刖 舌GBT 969522008GBT 9695由以下部分组成：GBT 96951肉与肉制品游离脂肪含量测定；GBT 96952肉与肉制品脂肪酸测定；GBT 96953肉与肉制品铁含量测定；GBT 96954肉与肉制品总磷含量测定；GBT 96955肉与肉制品pH测定；GBT 96956肉制品胭脂红着色剂测定；GBT 96957肉与肉制品 总脂肪含量测定；GBT 96958肉与肉制品氯化物含量测定；GBT 96959肉与肉制品聚磷酸盐测定；G
3、BT 969510肉与肉制品 六六六、滴滴涕残留量测定；GBT 969511肉与肉制品 氮含量测定；GBT 969513肉与肉制品 钙含量测定；GBT 969514肉制品 淀粉含量测定；一一GBT 969515肉与肉制品 水分含量测定；GBT 969517肉与肉制品 葡萄糖酸一8一内酯含量的测定；GBT 969518肉与肉制品 灰分测定；GBT 969519肉与肉制品取样方法；GBT 969520肉与肉制品 锌的测定GBT 969521肉与肉制品镁含量测定；GBT 969522肉与肉制品铜含量测定；GBT 969523肉与肉制品 羟脯氨酸含量测定；GBT 969524肉与肉制品胆固醇含量测定；
4、GBT 969525肉与肉制品 维生素PP含量测定；GBT 969526肉与肉制品维生素A含量测定；GBT 969527肉与肉制品 维生素B-含量测定；GBT 969528肉与肉制品维生素B：含量测定；GBT 969529肉制品维生素C含量测定；GBT 969530肉与肉制品 维生素E含量测定；GBT 96953l肉制品总糖含量测定。本部分为GBT 9695的第2部分。本部分修改采用ISO 5508：1990(动植物油脂脂肪酸甲酯的气相色谱分析法(英文版)和ISO 5509：2000动植物油脂脂肪酸甲酯的制备(英文版)。本部分与ISO 5508：1990和ISO 5509：2000相比主要技术
5、性修改如下：将ISO 5509：2000作为本部分脂肪酸甲酯的制备方法，ISO 5508：1990作为本部分的脂肪酸甲酯的气相色谱分析方法；增加规范性引用文件GBT 6682 2008；试剂中对水的要求修改为“应符合GBT 6682 2008中三级水的要求”；IGBT 969522008删除ISO 5509：2000中的364，该方法不适用于气相色谱法；删除ISO 5509：2000第4章，该方法不常用，且试剂在国内不方便购买；删除ISO 5509：2000第5章，该方法不适用于游离脂肪酸的测定，适用范围窄；对ISO 5508：1990中色谱条件进行修改，使之适用于现代仪器。按照GBT 11
6、2000标准化工作导则第i部分：标准的结构和编写规则和GBT 200014-2001标准编写规则第4部分：化学分析方法对ISO 5508：1990和ISO 5509：2000进行主要编辑性修改如下：删除IsO 5508和ISO 5509的前言；用小数点“”代替ISO 5508和ISO 5509中作为小数点的“，”；用GBT 6682-2008代替IsO 3696；为计算公式增加了编号。本部分代替GBT 969521988肉与肉制品脂肪酸测定。本部分与GBT 969521988相比主要修改如下：按照GBT 112000和GBT 2000142001进行了结构调整和文字修改；按照GBT 11200
7、0，删除英文名称中的“Method for”；第2章增加了“GBT 6682-2008”规范性引用文件；第4章将“所用试剂均为分析纯，水为蒸馏水或相当纯度的水”修改为“如无特别说明，所用试剂均为分析纯”，增加了部分溶液的配制方法，增加了条款“41 水：应符合GBT 66822008中三级水的要求”；第4章用“异辛烷”代替“庚烷”；第5章删除了“微处理机或积分仪”；第7章用“称取脂肪适量”代替“称取脂肪约350 mg”；第7章用毛细管色谱柱代替填充柱，并对相应的色谱条件进行修改；第7章增加了“回流速度控制在每30 s60 s一滴”；增加了712的注2和注3；增加了“试验报告”一章。本部分由中国商
8、业联合会提出。本部分由全国肉禽蛋制品标准化技术委员会归口。本部分起草单位：深圳市计量质量检测研究院、中国商业联合会商业标准中心。本部分主要起草人：罗美中、李碧芳、郑彦婕、杨万颖、陈素娟、曾泳艇、靳晓蕾。本部分所代替标准的历次版本发布情况为：GBT 969521988。肉与肉制品脂肪酸测定GBT 9695220081范围GBT 9695的本部分规定了对按照GBT 96951得到的脂类制备脂肪酸甲酯的方法以及脂肪酸甲酯混合物成分用气相色谱进行定性定量测定的方法。本部分适用于肉和肉制品中脂肪酸的测定。本部分不适用于测定聚合的脂肪酸。2规范性引用文件下列文件中的条款通过OBT 9695的本部分的引用而
9、成为本部分的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本部分，然而，鼓励根据本部分达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本部分。GBT 6682-2008分析实验室用水规格和试验方法(ISO 3696：1987，MOD)GBT 96951 肉与肉制品游离脂肪含量测定(GBT 96951 2008，ISO 1444：1996，IDT)3原理游离脂肪在三氟化硼催化下，进行甘油脂的皂化和游离脂肪酸的酯化，然后用气相色谱进行分析用面积归一化法测定其组成。4试剂如无特别说明，所用试剂均为分析纯。41水：应符合GB
10、T 6682 2008中三级水的要求。42氢氧化钠甲醇溶液(o5 molL)：将2 g氢氧化钠溶于100 mL含水量不超过05(质量分数)的甲醇中。该溶液存放时间较长时，可能形成少量白色的碳酸钠沉淀，但不会影响甲酯的制备。43三氟化硼甲醇溶液：1215(质量分数)。44异辛烷(2，2，4-三甲基戊烷)：色谱纯。注：异辛烷易燃易爆，在空气中的爆炸极限为1160(体积分数)。吸人有毒，使用时应采用防护措施以防吸入。45无水硫酸钠。46饱和氯化钠溶液。47氢气：纯度不小于999，无有机杂质。48氮气：完全干燥，纯度不小于99999。49空气：无有机杂质。410参照标准物：纯脂肪酸甲酯的混合物或已知油
11、脂组成的甲酯，其组成与待分析脂类相似。注：各种试剂和溶剂在进行气相色谱分析时不得产生干扰脂肪酸甲酯峰的信号。在进行色谱分析时，一些反应物可能会在谱图上产生一些干扰峰，特别是在长期的储存中，三氟化硼甲醇溶液可能会在色谱图的Cz。：脂肪酸区域内产生干扰峰。因此，每批新试剂或溶剂都应制备纯油酸甲酯并进行色谱分析。如有额外峰出现，则该试剂应当弃之。】GBT 9695220085仪器和设备51实验室常用设备。52气相色谱仪，配备FID检测器。6试样按GBT 96951的规定，制备试样。7分析步骤71脂肪酸甲醋的制备三氟化硼有毒，下列操作应在通风橱里进行，玻璃仪器用后，应立即用水冲洗。711试样称取称取脂
12、肪适量。根据称取脂肪量的多少按表1选择烧瓶及试剂。表1脂肪量mg 烧瓶mL 氢氧化钠甲醇溶液mL 三氟化硼甲醇溶液mL 异辛烷mL100250 50 4 5 13250500 50 6 7 25500750 100 8 9 487501 000 100 10 12 710712皂化将样品置于烧瓶中，加入适量氢氧化钠甲醇溶液(42)及脱脂沸石。将冷凝管固定于烧瓶上，水浴回流，至油滴消失。回流速度控制在每30 s60 s一滴，通常需5 min10 min。采用移液管或自动加液器从冷凝管上部加入适量的三氟化硼甲醇溶液(43)于沸腾的溶液中。注1：在含有两个以上双键的脂肪酸存在时，建议在回流前导入氮气
13、数分钟，排掉烧瓶中的空气。注2：当油类(如蓖麻油)可溶解于甲醇中，将观察不到油滴。因此溶液透明并不表示反应已完成。注3：如果不皂化物数量较大，可能会影响以后的分析。此时，可用蒸馏水稀释皂化液，并用乙醚、己烷或石油醚萃取除去不皂化物，然后将溶液酸化并分离脂肪酸。713 甲酯异辛烷溶液的制备接712继续煮沸3 rain。含有长链脂肪酸的油脂(例如鱼油)，继续煮沸30 min。经冷凝管上部加入适量的异辛烷(44)停止加热，移去冷凝管。不等烧瓶冷却，立即加入20 mL饱和氯化钠溶液(46)。盖上瓶盖，用力振摇至少15 s继续加入饱和氯化钠溶液(46)至烧瓶颈部。吸取上层异辛烷溶液1 mL2 mL于试管
14、中，加适量无水硫酸钠(45)脱水，可直接取一定量注入气相色谱仪中。714脂肪酸甲酯的贮存制备样品应尽快分析。不能尽快分析时，可将脂肪酯的异辛烷溶液在惰性气体保护下短期冷藏贮存在冰箱中。较长时间贮存时，可加入一定浓度而不影响分析的抗氧化剂防止甲酯的自动氧化。例如：005 gL的2，6一二叔丁基对甲酚(BHT)溶液。含丁酸的甲酯只能贮存于密封的安瓿瓶里，应采取特殊的保护措施，以避免灌装和密封安瓿瓶期间的蒸发损耗。72色谱条件721色谱柱：innowax弹性石英毛细管柱(30 mX025 mmX025 pm)，或相当者。722载气(48)：恒流10 mLmin。2723柱温：程序升温，应将所有组分洗
15、脱。724进样口温度：200。725检测器温度：等于或高于柱温。726进样量：01 pL1 pL，如果检测痕量组分试样量可以增大(至10倍)。727空气流速(49)：350 mLmin。728氢气流速(47)：30 mLmin。73定性分析相同的操作条件下，以保留时间定性。74定量分析面积归一化法。8分析结果的计算GBT 96952200881计算通过测定相应峰面积对所有成分峰面积总和的百分数来计算给定组分i的含量，用甲酯的质量分数表示，公式见式(1)：x一轰。o式中：X。甲酯的质量分数，；A成分i的峰面积；A。全部成分峰面积之和。注：一般情况下，由峰面积比计算的结果可以被认为代表质量分数。当
16、该假设不成立时，参阅82。82校正因子计算在某些情况下，特别是存在碳原子数少于8的脂肪酸或有二级基团的脂肪酸，或者需要高精确度时，应使用校正因子将峰面积的百分数转换成组分的质量分数。校正因子是在与试样相同的操作条件下，通过分析已知组成的参照标准物来测定。对于此种参照标准物，成分i的质量分数可由式(2)求出：Xz一轰100式中：五参照标准物成分i的质量分数，；m。参照标准物中组分i的质量；m，参照标准物中各组分的总质量。按式(3)由参照标准物的色谱图计算组分i的百分比(面积面积)xa一轰-o。式中：墨参照标准物成分i的面积分数，；A成分i的峰面积；At全部成分峰面积之和。则校正因子K。可按(4)
17、进行计算：K，一并甓GBT 969522008通常，校正因子是以对棕榈酸的校正因子K。的相对值来表示的，故此相对校正因子K。可换算为式(5)：K：，=等因此，试样tl每种组分i的含量表示为甲酯的质量分数，见式(6) 墨一揣X10。式中：墨甲酯的质量分数，。计算结果保留至小数点后一位。9精密度同一分析者用同一仪器对同一试样连续进行两次测定的误差，对于含量大于5(质量分数)的组分，相对偏差应不大于3，绝对误差应不超过1(质量分数)；对于含量小于5的组分，绝对误差应不大于02(质量分数)。10试验报告试验报告应说明：与识别样品有关的必需信息；取样方法；依据本部分所使用的方法；未在本部分规定或被视为可选的所有操作，以及可能影响测试结果的其他事件；获得的结果；如果检验了重复性，列出最终结果。
