1、ICS 67040X 04 园亘中华人民共和国国家标准GBT 9695252008代替GBT 9695251990肉与肉制品 维生素PP含量测定Meat and meat products-Determination of vitamin PP content2008-06-25发布 2009-01-01实施丰瞀徽紫瓣警麟瞥星发布中国国家标准化管理委员会仅19刖 吾GBT 9695252008GBT 9695由以下部分组成：GBT 96951肉与肉制品游离脂肪含量的测定；GBT 96952肉与肉制品脂肪酸测定；GBT 96953肉与肉制品铁含量测定；GBT 96954肉与肉制品总磷含量测定；G
2、BT 96955肉与肉制品pH测定；GBT 96956肉制品胭脂红着色剂测定；GBT 96957肉与肉制品 总脂肪含量测定；GBT 96958肉与肉制品氯化物含量测定；GBT 96959肉与肉制品 聚磷酸盐测定；GBT 969510肉与肉制品 六六六、滴滴涕残留量测定；GBT 969511肉与肉制品 氮含量测定；一一GBT 969513肉与肉制品 钙含量测定；一GBT 969514肉制品 淀粉含量测定；GBT 969515肉与肉制品水分含量测定；GBT 969517肉与肉制品 葡糖酸一争内酯含量的测定；GBT 969518肉与肉制品 灰分测定；一OBT 969519肉与肉制品 取样方法；一GB
3、T969520肉与肉制品 锌的测定；GBT 969521肉与肉制品镁含量测定；GBT 969522肉与肉制品铜含量测定；GBT 969523肉与肉制品 L(一)一羟脯氨酸含量测定；GBT 969524肉与肉制品 胆固醇含量测定；GBT 969525肉与肉制品维生素PP含量测定；GBT 969526肉与肉制品 维生素A含量测定；GBT 969527肉与肉制品 维生素B。含量测定；GBT 969528肉与肉制品 维生素Bz含量测定；GBT 969529肉制品维生素C含量测定；GBT 969530肉与肉制品 维生素E含量测定；GBT 969531肉制品总糖含量测定。本部分为GBT 9695的第25部
4、分。本部分代替GBT 9695251990肉与肉制品维生素PP含量测定。本部分与GBT 969525 1990相比主要变化如下：按照GBT 11 2000标准化工作导则 第1部分：标准的结构和编写规则和GBT 200014 2001标准编写规则 第4部分：化学分析方法进行了结构调整和文字修改；增加了规范性引用文件；增加了微生物法，作为第一法；分光光度法作为第二法。IGBT 969525-2008本部分由全国食品工业标准化技术委员会肉禽蛋制品分技术委员会提出并归1：3。本部分起草单位：中国商业联合会商业标准中心、国家加工食品质量监督检验中心(广州)、广州市产品质量监督检验所。本部分主要起草人：罗
5、海英、郭新东、罗曼妮、黄金凤、黄宇锋、罗晓茵、吴玉銮。本部分所代替标准的历次版本发布情况为：GBT 9695251990。肉与肉制品 维生素PP含量测定GBT 969525-20081范围GBT 9695的本部分规定了肉和肉制品中维生素PP含量的微生物测定方法。本部分适用于肉和肉制品中维生素PP含量的测定。2规范性引用文件下列文件中的条款通过GBT 9695的本部分的引用而成为本部分的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本部分，然而，鼓励根据本部分达成协议的各方研究是否可使用引用文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本部分。GB
6、T 6682-1992分析实验室用水规格和试验方法(neq ISO 3696：1987)3术语和定义下列术语和定义适用于GBT 9695的本部分。3，1肉与肉制品中维生素PP的含量vitamin PP content of meat and meat products在本部分规定的条件下，测定的尼克酸(烟酸)和尼克酰胺(烟酰胺)的总量。第一法微生物法4原理烟酸是植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)生长所必需的维生素。在一定条件下，植物乳杆菌的生长情况及其代谢物与培养基中烟酸的含量成正比。将试样溶液加到只缺少烟酸的培养基里培养，测定培养液对一定波长的光的透光率或吸光度，用
7、烟酸标准溶液得出的微生物生长量与烟酸含量的标准曲线来计算试样中烟酸的含量。5试剂和材料如无特别说明，所用试剂均为分析纯。注：琼脂培养基和烟酸测定用培养基可购买符合测试要求用的成品。51水符合GBT 6682-1992规定的三级水。52氢氧化钠溶液c(NaOH)=04 molL称取32 g氢氧化钠，用水溶解，并稀释至i00 mL。5，3盐酸溶液c(HCI)=02 molL量取2 mL盐酸，用水稀释至120 mL，混匀。54生理盐水称取9 ff氯化钠，溶于1 000 mL水中。每次使用时分别倒人6支8支10 mL试管中，每支约加10 mL，塞好棉塞，于高压蒸汽灭菌器内121灭菌15 min，备用。
8、GBT 969525200855乙醇溶液1+3(体积比)量取250 mL乙醇，加入750 mL水，混匀。56菌种植物乳酸杆菌(Lactobacillus plantarum)。57乳酸杆菌琼脂培养基光解胨15 g，葡萄糖10 g，番茄汁100 mL，磷酸二氢钾2 g，聚山梨糖单油酸酯l g，琼脂10 g，加蒸馏水至1 000 mL，pH 68土02(25)。58乳酸杆菌肉汤培养基光解胨15 g，葡萄糖10 g，番茄汁100 mL，磷酸二氢钾2 g，聚山梨糖单油酸酯1 g，加蒸馏水至1 000 mL，pH 68土o2(25)。59烟酸测定用培养基维生素测定用Casamino Acids 12 g
9、，葡萄糖40 g，乙酸钠20 g，L-胱氨酸04 g，DL-色氨酸02 g，盐酸腺嘌呤20 mg，盐酸鸟嘌呤20 mg，尿嘧淀20 mg，盐酸硫胺素200 pg，泛酸钙200zg，盐酸吡哆醇400 pg，核黄素400 pg，p氨基苯甲酸100 pg，生物素08 Pg，磷酸氢二钾1 g，磷酸二氢钾1 g，硫酸镁04 g，氯化钠20 mg，硫酸亚铁20 mg，硫酸锰20 mg。加蒸馏水至1 000 mL，pH 67土02(25)。510烟酸标准储备液(c=01 mgmL)称取005 g(准确至0001 g)已干燥恒量并贮存于五氧化二磷干燥器中的烟酸标准品，用乙醇溶液(55)溶解并定容至500mL，
10、混匀，于冰箱中贮存。此溶液每毫升相当于100 pg烟酸。511 烟酸标准中间液(c=1 IlgmL)吸取100mL烟酸标准储备液(510)，置于100mL容量瓶中，用乙醇溶液(55)定容，混匀，于冰箱中贮存。此溶液每毫升相当于l Pg烟酸。512烟酸标准使用液(c=100 n空mL)吸取500mL烟酸标准中间液(511)，置于50mL容量瓶中，用水定容，混匀。此溶液每毫升相当于100 ng烟酸。6仪器和设备实验室常规仪器及下列仪器。61 机械设备：用于试样的均质化。包括高速旋转的切割机，或多孔板的孔径不超过4 mm的绞肉机。62干燥箱。63恒温培养箱。64离心机：转速可达2 500 rrain
11、。65 pH计。66磁力搅拌器。67旋涡混合器。68高压蒸汽灭菌器。69分光光度计。610分析天平：可准确称重至0001 g。7取样本部分不规定取样方法。取样方法参见GBT 969519。实验室所收到的样品应具有代表性且在运输和储藏过程中没受损或发生变化。至少取有代表性的样品200 g。2GBT 96952520088试样制备使用适当的机械设备(61)将试样均质。注意避免试样的温度超过25。若使用绞肉机，试样至少通过该仪器两次。将试样装入密封的容器里，防止变质和成分变化。试样应尽快进行分析，均质化后最迟不超过24 h。9分析步骤91菌种液的制备将植物乳酸杆菌(56)贮备菌种穿刺接种于乳酸杆菌琼
12、脂培养基(57)内，于37培养20 h24 h。贮存于28冰箱中。从琼脂培养基移取部分菌种于灭菌的10 mL乳酸杆菌肉汤培养基(5，8)中，于37培养20 h24 h。在无菌条件下离心该培养液10 rain(2 500 rmin)，倾去上清液。加入已灭菌的生理盐水(54)，于旋涡混合器上快速混合均匀，离心10 min(2 500 rmin)，倾去上清液。重复清洗操作两次。加入10 mL已灭菌生理盐水(54)，于旋涡混合器上快速混合均匀，吸取一定体积的菌液，加至10mL已灭菌生理盐水(54)中，于旋涡混合器上快速混合均匀，使菌种形成混悬液，备用。92试样处理称取5 g试样(准确至0，001 g)
13、于250 mL棕色三角瓶中，加入02 molL盐酸溶液(53)100 mL，置于磁力搅拌器(68)上搅拌混合样品，于121灭菌30 rain，冷却。充分搅拌，直至颗粒分散。于搅拌的同时用04 molL氢氧化钠溶液(52)调节溶液的pH值为4。446，转移至250 mL棕色容量瓶中，用水洗涤三角瓶3次，洗液并入容量瓶中，用水定容。过滤，弃去最初的25 mL30 mL滤液。根据试样中维生素PP的含量，吸取一定量的滤液，用水稀释至适宜的浓度(以不超出标准工作液系列的浓度为宜)，混匀，备用。93试样培养液的制备按表1依次加入水、试样溶液(g2)和烟酸测定用培养基(59)于试管中。一式三份。表1试样培养
14、液的配制试管号成 分1 2 3 4蒸馏水mL 4 3 2 l试样溶液mL 1 2 3 4烟酸测定用培养基mL 5 5 5 5注；于测定前配制烟酸测定用培养基，配制后放置不要超过6 h，需避光处理，避免空气污染。94标准工作液的制备按表2依次加入水、烟酸标准使用液(512)和烟酸测定用培养基(59)于试管中。一式三份。表2标准工作液的配制试管号项 目1 2 3 4 5 6 7蒸馏水mL 50 50 40 30 20 10 00标准使用液mL oo 0o 1 0 20 3o 4O 5o烟酸测定用培养基mL 50 50 50 50 50 50 50标准工作液的浓度(pgmL) 0 O 001 002
15、 003 O04 0053GBT 969525200895灭菌将各试管于121灭菌10 rain，取出后快速均匀地冷却至室温。96接种在无菌条件下接种所有试管，除标准工作液的1号试管外，其余试管均滴加适量的菌种液(91)，使测定时标准工作液3号试管内的溶液于600 111TI处的吸光度约为02。盖上盖，充分振荡混合所有管。97培养将所有试管于37恒温培养24 h。10测定培养液(97)于121灭菌5 min，取出后快速均匀地冷却，于旋涡混合器上混合均匀。于分光光度计波长600 nm处，以未接种空白标准工作液为参比，将已接种空白标准工作液的吸光度调为零，测定其余管内溶液的吸光度。以标准工作液的浓
16、度为横坐标、相应的吸光度(三次测定的平均值)为纵坐标绘制标准曲线。由测试溶液各水平的吸光度，从标准曲线上查出溶液中维生素PP的浓度值。11计算试样中维生素PP的含量按式(1)计算：cVf1 000”一i又丌旆丽丽式中：一 试样中维生素PP的含量，单位为毫克每千克(mgkg)；c 从标准曲线上查得的试样溶液中维生素PP的浓度，单位为纳克每毫升(ngmL)；V试样溶液第一次定容的体积(92)，单位为毫升(mL)；，试样溶液稀释的倍数；m试样的质量，单位为克(g)。结果保留至小数点后第一位。每一份试样溶液(92)均可得到四个水平的测定值，计算所得值的平均值。舍弃超过平均值15的数值。重新计算平均值，
17、重新检验是否有超过此平均值士15的数值，舍弃超过此平均值士15的数值。如果剩余管数少于所测定的四个水平稀释液的管数的三分之二，用于计算样品浓度的数据是不充分的，应重新进行测定。如果剩余管数不少于所测定的四个水平稀释液的管数的三分之二，则可根据平均值计算其样品中的含量。12试验报告试验报告应说明：所有与识别样品有关的必需信息；取样方法；依据本部分所采用的方法；本部分未规定或未列为可选的所有操作，以及可能影响测试结果的其他因素；测试结果；如果检验了重复性，列出最终结果。4第二法比色法GBT 969525200813原理维生素PP经氢氧化钙溶液提取，与溴化氰结合，在对氨基苯乙酮作用下，生成黄色化合物
18、，在420 nm波长处测定吸光度，标准曲线法定量。14试剂和材料如无特别说明，所用试剂均为分析纯。141水：符合GBT 66821992规定的三级水。142乙醇。143戊醇。144盐酸溶液f(HCl)一6 molL：量取25 mL盐酸(p20*119 gmL)，用水稀释至50 mL。145硫酸溶液c(H2SO。)一5molL：量取135mL硫酸(P20184 gmL)，用水稀释至50mL。146硫酸溶液f(H。SO。)一1 molL：量取27 mL硫酸(p20-I84 gmL)，用水稀释至50 mL。147氢氧化钙溶液cCa(OH)：=1 molL：称取37 g氢氧化钙，用水溶解并稀释至50
19、mL。148硫酸锌：饱和溶液。称取12 g硫酸锌，在室温下用水溶解并稀释至20 mL，如有沉淀须过滤。149氢氧化钠溶液c(NaOH)一3 molL：称取6 g氢氧化钠，用水溶解并稀释至50 mL。1410氢氧化钠溶液c(NaOH)一1 molL：称取2 g氢氧化钠，用水溶解并稀释至50 mL。1411 10溴化氰：称取2 g溴化氰，用水溶解并稀释至20 mL。注：溴化氰是剧毒试剂，应戴上手套在通风橱里配制。1412 2对氨基苯乙酮：称取对氨基苯乙酮1 g，用少量盐酸溶解，用水稀释至50 mL。1413酚酞指示剂(c一10 gmL)：称取05 g酚酞，用乙醇(142)溶解并稀释至50 mL。1
20、414烟酸标准储备液(F1 mgmL)：称取已干燥恒量并贮存于五氧化二磷干燥器中的烟酸标准品01 g(准确至0001 g)，用5 molL硫酸(145)1 mL溶解，转移至100 mL容量瓶中，定容。在4冰箱内保存。1415烟酸标准工作液：吸取烟酸标准储备液(1414)025 mL、050 mL、100 mL、200 mL、250 mL，分别置于100 mL容量瓶中，用水定容，混匀。此标准工作液系列中烟酸的浓度分别为25 pgmL、5 vgmL、10 pgmL、20 r,gmL、25 pgmL。15仪器和设备实验室常规仪器及下列仪器。151机械设备：用于试样的均质化。包括高速旋转的切割机，或多
21、孔板的孔径不超过4 mm的绞肉机。152恒温水浴锅。153分光光度计。154分析天平：可准确称重至0001 g。16取样同第7章。17试样制备同第8章。5GBT 969525200818分析步骤181提取称取试样2 g(准确至0001 g)于三角瓶中，加入1 molL氢氧化钙溶液(147)10 mL，水40 mL，混匀后，在沸水浴上提取90 min。取出，冷却后移人100 mL(V，)容量瓶中，用水定容。混匀过滤，滤液备用。182 中和吸取滤液2500 mL(V：)于50 mL(U)容量瓶中，加酚酞指示剂(1413)两滴，用6 molL盐酸(144)中和至红色刚刚褪去。加入饱和硫酸锌溶液(14
22、8)2 mL及几滴戊醇(143)，用3 molL氢氧化钠溶液(149)和1 molL氢氧化钠溶液(1410)调至粉红色。滴加1 molL硫酸溶液(146)，使粉红色刚好褪去。用水定容，混匀，放置10 min后过滤，滤液备用。183测定分别吸取烟酸标准工作液(1415)100 mL(U)于具塞试管中，加水4 mL。吸取试样溶液(182)500 mL(V。)于具塞试管中。于上述各试管中加入10溴化氰溶液(1411)2 mL，摇匀。将各试管置于6070水浴中保温15min后，迅速冷却。加入2对氨基苯乙酮溶液(1412)1mL，摇匀，在暗处放置15 rain。在420 nm波长处测定吸光度。184标准
23、曲线的绘制以标准工作液的浓度为横坐标、相应的吸光度为纵坐标绘制标准曲线。19计算试样中维生素PP的含量按式(2)计算cV3V1V41 000”一i叉瓦又丽丽百一式中：ur试样中维生素PP的含量，单位为毫克每千克(mgkg)；c从标准曲线上查得的待测试样溶液中维生素PP的浓度，单位为微克每毫升(pgmL)v。试样溶液第二次定容的体积(182)，单位为毫升(mL)；y。试样溶液第一次定容的体积(182)，单位为毫升(mL)；U显色用标准工作液的体积(183)，单位为毫升(mL)；m试样的质量，单位为克(g)；v：中和用试样溶液的体积(182)，单位为毫升(mL)；y。显色用试样溶液的体积(183)，单位为毫升(mL)。结果保留至小数点后一位。20试验报告同第12章。(2)参考文献1GBT 969519肉与肉制品取样方法GBT 9695252008
