1、ICS 67040X 04 圆垦中华人民共和国国家标准GBT 9695272008代替GBT 969527 1991肉与肉制品 维生素B，含量测定Meat and meat products-Determination of vitamin Bt content20080828发布 2009-030 1实施宰瞀鹊鬻瓣警矬瞥鐾发布中国国家标准化管理委员会仅1”刖 吾GBT 969527-2008GBT 9695由以下部分组成：GBT 96951肉与肉制品游离脂肪含量测定；GBT 96952肉与肉制品脂肪酸测定；GBT 96953肉与肉制品铁含量测定；GBT 96954肉与肉制品 总磷含量测定；G
2、BT 96955肉与肉制品pH测定；GBT 96956肉制品胭脂红着色剂测定；GBT 96957肉与肉制品总脂肪含量测定；GBT 96958肉与肉制品 氯化物含量测定；GBT 96959肉与肉制品 聚磷酸盐测定；GBT 969510肉与肉制品六六六、滴滴涕残留量测定；GBT 969511肉与肉制品 氮含量测定；GBT 969513肉与肉制品 钙含量测定；GBT 969514肉制品淀粉含量测定；GBT 969515肉与肉制品水分含量测定；GBT 969517肉与肉制品葡萄糖酸一秘内酯含量的测定；GBT 969518肉与肉制品 灰分测定；GBT 969519肉与肉制品取样方法；GBT 969520
3、肉与肉制品锌的测定；GBT 969521肉与肉制品镁含量测定；GBT 969522肉与肉制品 铜含量测定；GBT 969523肉与肉制品 羟脯氨酸含量测定；GBT 969524肉与肉制品 胆固醇含量测定；GBT 969525肉与肉制品维生素PP含量测定；GBT 969526肉与肉制品 维生素A含量测定；GBT 969527肉与肉制品 维生素B-含量测定；GBT 969528肉与肉制品维生素B。含量测定；GBT 969529肉制品维生素C含量测定；GBT 969530肉与肉制品 维生素E含量测定；GBT 96953l肉制品 总糖含量测定。本部分为GBT 9695的第27部分。本部分代替GBT 9
4、69527 1991肉与肉制品维生素B-含量测定。本部分与GBT 9695271991相比主要修改如下：按照GBT 11 2000标准化工作导则 第1部分：标准的结构和编写规则和GBT 200014 2001标准编写规则 第4部分：化学分析方法进行了结构调整和文字修改；用高效液相色谱法作为第一法、比色法作为第二法测定肉与肉制品中维生素B的含量；试剂、仪器设备、分析步骤、结果计算作相应的改动；1GBT 9695272008将“试样”一章分为“取样”和“试样制备”两章；用“lo精密度”及其内容代替“9允许差”及其内容；增加了“试验报告”一章。本部分的附录A为资料性附录。本部分由全国肉禽蛋制品标准化
5、技术委员会提出并归1：3。本部分起草单位：中国商业联合会商业标准中心、国家加工食品质量监督检验中心(广州)、广州市产品质量监督检验所。本部分主要起草人：蔡依军、郑艳明、杜志峰、郭新东、罗海英、吴玉銮、靳晓蕾。本部分所代替标准的历次版本发布情况为：GBT 969527 1991。肉与肉制品维生素B，含量测定1范围GBT 9695的本部分规定了肉与肉制品中维生素B。含量的测定方法。本部分适用于肉与肉制品中维生素B，含量的测定。2规范性引用文件GBT 9695272008下列文件中的条款通过GBT 9695的本部分的引用而成为本部分的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)
6、或修订版均不适用于本部分，然而，鼓励根据本部分达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本部分。GBT 6682-2008分析实验室用水规格和试验方法(ISO 3696：1987，MOD)第一法高效液相色谱法3原理试样经酸水解、酶解后，游离的维生素B，(硫胺素)在碱性铁氰化钾作用下被定量氧化成具有蓝色荧光的噻嘧色素，用异丁醇萃取，过滤后用高效液相色谱仪测定。以保留时间定性，外标法定量。4试剂和材料如无特别说明，所用试剂均为分析纯。41水：符合GBT 6682-2008规定的一级水。42冰乙酸。43异丁醇。44氯化钾或氯化钠。45甲醇：色谱纯或经重蒸
7、。46 乙酸钠溶液(c=2 molL)：称取27。2 g三水乙酸钠，溶于水中，用水稀释至00 mL。47盐酸溶液(co1 molL)：吸取21 mL盐酸(P2。119 gmL)，用水稀释至250 mL，混匀。48高峰氏淀粉酶(TakaDiastase)溶液(c一100 gL)：称取10 g高峰氏淀粉酶，溶于水中，用水稀释至100 rnL。临用前配制。49氢氧化钠溶液(f一150 gL)：称取15 g氢氧化钠，溶于水中，用水稀释至100 mL。410铁氰化钾溶液(c一10 gL)：称取01 g铁氰化钾，溶于水中，用水稀释至10 mL。41 1 氧化剂：10 gL铁氰化钾溶液(410)1 mL，用
8、氢氧化钠溶液(49)稀释至100 mL。临用前配制。412乙醇溶液1+4(体积比)：量取200 mL乙醇，加入至800 mL水中，混匀。413酸性乙醇：用盐酸溶液(47)调节乙醇溶液(412)pH值为3443。414乙酸钠溶液f一005 molL(pH一45)1：称取34 g三水乙酸钠，溶于水中，用水稀释至500 mL，冰乙酸(42)调pH值为45。415精密pH试纸：范围05-50。】GBT 9695272008416维生素B1标准溶液4161标准贮备液(c一100 bcgmL)：称取500 mg维生素B1标准品于500 mL棕色容量瓶中，用酸性乙醇(413)溶解并定容，于4下保存。4162
9、标准工作液(c一10,ugmL)：吸取标准贮备液(4161)100 mL，用酸性乙醇(413)定容至100 mL棕色容量瓶中。5仪器和设备实验室常规仪器及下列仪器。51机械设备：用于试样的均质化。包括高速旋转的切割机，或多孔板的孔径不超过4 mm的绞肉机。52培养箱或水浴：可控温度于4550。53高效液相色谱仪：带荧光检测器。6取样实验室所收到的样品应具有代表性且在运输和储藏过程中无受损或发生变化。取样方法参见GBT 969519。取有代表性的样品200 g。7试样制备使用适当的均质设备(51)将试样均质。注意避免试样的温度超过25。若使用绞肉机，试样至少通过该设备两次。将试样装入密封的容器里
10、，防止变质和成分变化。试样应在均质化后24 h内尽快分析。8分析步骤81水解称取4 g6 g试样(准确至0001 g)，置于150 mL具塞锥形瓶中，加入盐酸溶液(47)50 mL，摇匀，于沸水浴中水解30 min。取出，冷却至室温。82酶解用乙酸钠溶液(46)调节试样水解液(81)，使pH为4o45，用pH试纸(415)检查。加入高峰氏淀粉酶溶液(48)5 mL，混匀，在4550培养箱或水浴(52)中保温3 h。取出冷却后用盐酸溶液(47)调整pH约为35，用pH试纸(415)检查。将溶液全部转移至100 mL容量瓶中，用水定容。混匀，用滤纸过滤，取滤液备用。83氯化取一支50 mL具塞比色
11、管，加入15 g氯化钾或氯化钠(44)，再加入500 mL试样溶液(82)。加人300mL氧化剂(411)，立即旋摇试管，混匀，随即加入1000mL异丁醇(43)萃取，塞上塞子振摇90 s，静置分层。异丁醇层经045,um滤膜过滤，滤液待测。84维生素Bl标准工作液的处理吸取200 mL维生素B1标准工作液(4162)，置于150 mL具塞锥形瓶中，按8183进行水解、酶解、氧化。异丁醇层经045 pm滤膜过滤，滤液待测。85 测定851液相色谱参考条件a)色谱柱：C18柱(150 mmX46 mm，5 pm)，或相当者；b)流动相：甲醇+O05 molL乙酸钠溶液(pH一45)一35+65(
12、体积比)；c)流速：10 mLmin；2GBT 9695272008d)柱温：30；e)检测波长：激发波长为365 nm，发射波长为435 nmf)进样量：20 pL。852液相色谱测定根据试样溶液中维生素B。的含量情况，选定峰面积相近的标准工作液。标准工作液和试样溶液中维生素B，的响应值均应在仪器检测线性范围内。标准工作液和试样溶液等体积间隔进样测定。根据保留时间定性，外标法定量。标准色谱图参见附录A。86平行试验按8185，对同一试样进行平行试验测定。87空白试验除不加入试样外，均按8185进行测定。9计算按式(1)计算试样中维生素Bt的含量。 x一悉X100式中：x试样中维生素B。的含量
13、，单位为毫克每百克(mg100 g)c标准工作液中维生素B1的浓度，单位为微克每毫升(ttgmL)；A试样中维生素B。的峰面积；v吸取维生素B。标准工作液进行前处理的体积，单位为毫升(mL)A，标准工作液中维生素B。的峰面积；m试样质量，单位为克(g)。计算结果应扣除空白，结果准确至001 mg100 g。10精密度同一分析者在同一实验室、采用相同的方法和相同的仪器、在短时间间隔内对同一样品独立测定两次。两次测试结果的绝对差值不得超过算术平均值的20。11试验报告试验报告应说明：所有与识别样品有关的必需信息；取样方法；依据本部分所采用的方法；本部分未规定或未列为可选的所有操作，以及可能影响测试
14、结果的其他因素；测试结果；如果检验了重复性，列出最终结果。第二法比色法12原理试样经酸水解、酶解后，游离的维生素B。(硫胺素)在碱性铁氰化钾作用下定量氧化成具有蓝色荧光的噻嘧色素。在激发波长365 nm、发射波长435 nm处测定其荧光强度，荧光强度与噻嘧色素含量成正比，以此计算维生素B1的含量。3GBT 969527200813试剂如无特别标明，所用试剂均为分析纯。131水：符合GBT 6682-2008规定的三级水。132无水硫酸钠。133氯化钾溶液(c一250 gL)：称取50 g氯化钾，溶于水中，用水稀释至200 mL。134酸性氯化钾溶液：每升氯化钾溶液(133)中加入85 mL浓盐
15、酸(P2。一119 gmL)。135人造沸石：市售品须经活化处理。1351活化方法：将粒度为40目60目的人造沸石置于烧杯中，加约5倍量的热水搅拌，静置后倾出上清液。重复此操作，直至上清液透明。加入5倍量的3乙酸溶液搅拌浸泡10 min，静置后倾去上清液，重复此操作3次。加人约5倍量热的酸性氯化钾溶液(134)，在沸水浴中加热25 min，弃去上清液，加3乙酸溶液洗涤两次后，用水反复洗至无氯离子为止(用硝酸银溶液检查)。将处理好的人造沸石浸没于水中保存，也可于80存放备用。1352 回收率的测定：吸取200 mL维生素B，标准工作液(4162)于100 mL容量瓶中，用水稀释至刻度。吸取250
16、0mL稀释液两份，其中一份按173175进行净化、氧化和测定，另一份按174175进行氧化和测定。净化的回收率应大于85。136其他试剂：同424，4、46413和415416。14仪器和设备实验室常规仪器及下列仪器。141荧光分光光度计。142人造沸石玻璃层析柱：将脱脂棉置于玻璃层析柱中，倾入悬浮于水中的人造沸石(135)，高度约为10 cm(约用15 g人造沸石)，洗下贮液槽壁上的人造沸石颗粒。在吸附过程中液面要始终高于沸石表面，防止柱内有气泡。层析柱可控制流速为1 mLmin。143其他仪器和设备：同5152。15取样同第6章。16试样制备同第7章。17分析步骤171水解同81。172酶
17、解同82。173净化吸取酶解滤液2500 mL，注人人造沸石玻璃层析柱(142)，控制层析柱流速约为1 mLmin，弃去流出液。用15 mL近沸热水分3次洗涤层析柱，弃去流出液。用25 mL 6080热的酸性氯化钾溶液(134)分5次洗脱维生素B1，收集于25 mL容量瓶中，冷却后用酸性氯化钾溶液(134)定容。混匀备用。4GBT 9695272008174氧化取两支50 mL具塞比色管，各加入15 g氯化钾或氯化钠(44)，加入500 mL净化后的试样溶液。一支试管中加入30mL氧化剂(411)，立即旋摇试管，混匀，随即加入1000mL异丁醇(43)萃取，塞上塞子振摇90 s，静置分层。另一
18、支试管作为空白对照，加人30 mL氢氧化钠溶液(49)，旋摇混匀，随即加入1000 mL异丁醇(43)萃取，静置分层。异丁醇层用无水硫酸钠(132)脱水。175测定调节荧光激发波长为365 nm，发射波长为435 nm，狭缝为5 mm。取异丁醇萃取液(174)，置于比色皿中，测定氧化样品管和空白样品管中溶液的荧光强度。176标准溶液的处理和测定吸取200 mL维生素B。标准工作液，于150 mL具塞锥形瓶中，按171174进行水解、酶解、净化、氧化、测定。18计算试样中维生素B。的含量按式(2)计算： X=Fl-酉o志1。(2)式中：x试样中维生素B-的含量，单位为毫克每百克(mg100 g)
19、；I氧化样品管中异丁醇溶液的荧光强度；L空白样品管中异丁醇溶液的荧光强度；Q氧化标准管中异丁醇溶液的荧光强度；Q0空白标准管中异丁醇溶液的荧光强度；202oo mL 10 pgmL维生素B。标准工作液含维生素B。的量，单位为微克(pg)；m试样质量，单位为克(g)。计算结果准确至001 mg100 g。19精密度同第10章。20试验报告同第11章。GBT 9695272008附录A(资料性附录)维生素B1标准溶液的液相色谱图0 0 10 2 0 3 0 4 0 50 6 0 70 min图A1维生素B1标准溶液的液相色谱图尹。止一维、1一州珊藿；瑚o参考文献r1GBT 969519 肉与肉制品取样方法GBT 969527-2008
