1、ICS 67.050 x 04 NY 中华人民共和国农业行业标准NY/T 802一2004乳与乳制品中淀粉的测定酶一比色法Method for determination of starch in raw milk and dairy food Enzyme - colorimetric method 2004-04-16发布2004-06-01实施中华人民共和国农业部发布NY /T 802-2004 前言本标准由中华人民共和国农业部提出。本标准起草单位:农业部乳品质量监督检验测试中心、农业部食品质量监督检验测试中心(上海)、农业部食品质量监督检验测试中心(佳木斯)和农业部食品质量监督检验测试
2、中心(石河子)。本标准主要起草人:王金华、张宗城、刘宁、薛刚、钱莉、王南云、罗小玲、朱建新、牛兆红。I 范围乳与乳制品中淀粉的测定酶一比色法本标准规定了用酶一比色法测定乳与乳制品中淀粉的方法。本标准适用于乳与乳制品中淀粉的测定。本标准方法检出限为0.1阅。2 规范性引用文件NY /T 802-2004 下列文件中的条款通过本标准的引用而成本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB 6682 分析实验室用水规格和试验方法
3、3 原理淀粉在淀粉葡萄糖昔酶(AGS)催化下，水解为葡萄糖。葡萄糖氧化酶(D)在有氧条件下，催化氧化葡萄糖，生成葡萄糖酸和过氧化氢。受过氧化物酶(POD)催化，过氧化氢与4-氨基安替毗琳和苯酣生成红色酿亚胶。在505nm波长测定酿亚胶的吸光度与标准系列比较定量。4 试剂(Ct;HlOOS)n + nH20主豆豆nCt;H1206 Ct;H1206+乌旦去Ct;HlO06+H2乌H2乌十Ct;HsOH+ CUH13N30旦主Ct;HsNO+H20以下酶制剂为生化纯，化学试剂为分析纯，用水应符合GB6682中一级水的规格或相当纯度的水。4.1 淀粉葡萄糖曹酶(amyl吨lucosid描e)溶液称取
4、1.920g一水拧攘酸(Ct;HsH20)、7.415g二水拧攘酸三铀(Ct;HsNa32H20)和相当于100 u(活力单位)质量的淀粉葡萄糖昔酶，加水溶于100mL容量瓶中，定容，pH4.6。在4C左右保存，有效期1个月。4.2 葡萄糖氧化酶(glucoseoxidase)一过氧化物酶(蝶根，peroxidase)溶液称取1.300g元水磷酸二氢押(KH2P04)、4.739g十二水磷酸氢二铀(Na2HP04. 12H20) ，相当400u(活力单位)质量的葡萄糖氧化酶和1000 u(活力单位)质量的过氧化物酶，加水榕于100mL容量瓶中定容，pH7.0，在4C左右保存，有效期1个月。4.
5、3 0.001 54 mollL 4-氨基安替毗琳溶液称取0.0313g4氨基安替毗琳(CuH13N30)洛于100mL水中04.4 0.022 mollL苯酣溶液称取0.0207g苯酣(Ct;HsOH)榕于100mL水中04.5 二甲基亚砚(CH3hSO 4.6 6 mollL盐酸溶液1 NY /T 802-2004 将12mollL盐酸(HCl)与等体积水混合，摇匀。4.7 6 mollL氢氧化铀溶液称取24g氢氧化铀(NaOH)，溶于100mL水中，摇匀。4.8 淀粉标准溶液称取经1C:t2C干燥2h的可溶性淀粉(C;HlOOs)J0.200 g，精确至o.01g，榕于少量60c水中，冷
6、却后定容至100mL，摇匀。将此溶液用水稀释VlO.VlOO.O即200p.g/mL淀粉标准溶液。5 仪器5. , 恒温水浴锅精确至1C。5.2 可见光分光光度计505 nm。5.3 酸度计5.4 微量移液器精度0.01mL。6 试料的制备用100mL三角瓶称取样品0.5g1.5 g，精确至0.0001g，加人20mL二甲基亚枫和6mollL盐酸溶液5mL，于60C:t 1 c恒温水浴锅恒温30min(每隔5min摇动一次)。冷却至室温后，用6mollL 氢氧化铀溶液和酸度计调整pH至4.6。将溶液转移到250mL容量瓶中，用水定容，摇匀后用快速滤纸过滤。弃去最初滤液30mL，即为试料。试料中
7、淀粉含量高于1000周/mL时，可适当增加定容体积。7 分析步骤7. , 标准曲线的绘制用微量移液器吸取O.OOmL、0.20mL、0.40mL、0.60mL、0.80mL、1.00mL淀粉标准溶液，分别置于10mL容量瓶中，各加入1mL淀粉葡萄糖昔酶溶液，摇匀，于60c土1C恒温水浴锅中恒温20min;冷却至室温，加人1.5mL葡萄糖氧化酶一过氧化物酶溶液、1.5mL 4-氨基安替毗琳溶液和1.5mL苯酣榕液，摇匀，在36c土1C恒温水浴锅中恒温40min;冷却至室温，用水定容，摇匀。用1cm比色皿，以淀粉标准溶液含量为0.00mL的试剂溶液调整分光光度计的零点，在波长505nm处测定各容量
8、瓶中溶液的吸光度。以淀粉含量为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。7.2 试料的测定用微量移液器吸取0.20mL2.00 mL试料(依试料中淀粉的含量而定)，置于10mL容量瓶中。以下按7.1从各加人1mL淀粉葡萄糖昔酶溶液，用1cm比色皿步骤操作;但须用等量试料调整分光光度计的零点。测出试料吸光度后，在标准曲线上查出对应的淀粉含量。8 结果计算样品中淀粉的含量按式(1)计算。CX V 1 X(%)=且m X V2 X 10000 、E，EA ，、. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 式中:
9、X一一样品中淀粉的含量，单位为百分率(%); 2 C一一标准曲线上查出的试液中淀粉含量，单位为微克(g);m一样品的质量，单位为克(g); V1一一试料的定容体积，单位为毫升(mL);V2一一测定时吸取试料的体积，单位为毫升(mL)。计算结果精确至小数点后两位。9 允许差相对相差5%。NY /T 802-2004 3 叮gNlg-hz中华人民共和国农业行业标准事L与乳制晶中淀粉的测定酶一比色法NY /T 802-2004 争导中国农业出版社出版(北京市朝阳区麦子店街18号楼)(邮政编码:100026 网址:) 中国农业出版社印刷厂印刷新华书店北京发行所发行各地新华书店经销9争* 势* * 印张0.5字数5千字2004年7月北京第1次印刷印数:1-2000册定价:6.00元开本880mmx 1230mm 1116 2004年7月第1版书号:15109 350 版权专有侵权必究举报电话:(010) 65005894 NY /T 802-2004
