1、中华人民共和国国家标准牙科复合树脂充填材料GB 11749-89 Resin based dental filling materials 本标准参照采用国际标准I回4049-1978牙科复合树脂充填材料和ISO/TR7405-1984齿科材料生物评价。1 主题内容与适用范围本标准规定了牙科复合树脂充填材料的性能及其试验方法。本标准适用于化学固化和光凶化的牙科复合树脂类充填材料。2 51用标准GB 191 包装储运图示标志GB 2828 逐批检查计数抽样程序及抽样表（适用于连续批的检查GB 2829 周期检查计数抽样程序及抽样表适用于生产过程稳定性的检查GB 6387 齿科材料名词术语ZB C
2、 33 018 氧化铸丁番自报告水门汀3 术语3. 1 困化时间在规定的条件节，从调和开始至硬化所需的时间。3.2 固化深度在规定的外部能源作用F，材料硬化层的厚度。3.3 比色板制造，提供的，用以检查剧化后材料的颜色和色调。3.4 化学叫化材料在引发剂和促进剂作用下丽固化。3.5 光团化材料在光能作用下丽固化。3.6 恒定质量24 h内质量损失不超过O.2 mg o 3. 7 细胞毒性试验在培养皿中进行细胞培养，使细胞生长成融合单层。将试验材料与细胞单层直接接触，观察对细胞1，的影响，以便评价试验材料对细胞的毒性作用。3.8 E试伤寒沙门氏杆菌回复突变试验（Ames试验）又称鼠伤寒沙门氏菌哺
3、乳动物微控体酶试验，一种检测化学物致突变性能的试验。美网加州大学生化教授BNAmes等人创究并建立起来的。所以又简称Ames试验a3.9 致敏反应是种对物质产生免疫学传递的反应。对人类来说，这种反应可能是骚痒、红t挝、丘彦、小姐、国家技术监督局198910 20批准1990 07 01实施lUS GB 149-89 大炮或这些症状的综合反应，对动物种系来说，这种反应可能不同，仅能看到红斑和水肿。4 分类I型化学国化H型光团化5 技术要求5. 1 牙科复合树脂充填材料应符合本标准的要求，并按规定程序所批准的文件制造。5.2 生物适应性5. 2. 1 无牙髓刺激性。5.2.2 无细胞毒性。5.2.
4、3 鼠伤寒沙门氏杆菌回复突变试验无诱变性。5.2.4 兀致敏毒性。5.3 物理机械性能5. 3. 1 一般性能按照比色板生产的材料，国化后应符合比色扳的色调要求。5.3.2 I型材料工作时间不小于90s。5.3.3 I型材料的l自化时间不大于5min 。5.3.4 H型材料对坏境光线的敏感性H型材料的3个试样在规定的试验光源F照射60s，任何一个试样不得出现初凝05.3.5 E型材料的国化深度不低于2mm。5.3.6 挠曲强度不低于50MPa。5.3.7 吸水值和日溶解值吸水且不大f50g/mm3，溶解值不大于5问mm3 o 5.4 色稳定性二个观察者中不得有4人发觉在规定的条件F照射后，剧化
5、后材料的颜色和色调出现明显的变化。6 试验方法从同一批材料中抽取50g样品进行试验或必要的重复试验。按照制造厂使用说明书的规定和本标准规定的试验条件进行调和制备试样。E型材料应参照制选！使用说明15推荐的光源，以满足材料使用条件。除制造厂特别规定外，全部试样制备和试验应在环填温度23 1，相对湿度大于30%环境中进行。如果材料是贮存在冰箱中，应在试验前取出放罩在环填温度中以使材料的温度为23士1。6. 1 国测直观检验应符合5.3. 1条的规定。6.2 生物适应性检测方法见附录A（补充件）。6.3 I型材料士作时间6. 3. 1 器具如图l所；j，聚乙烯管（A）安装在中央有聚瞅胶I民fil6.
6、Bl .to内装热电偶（D）的不锈钢（或黄铜管（c）通过（B）的孔伸入到（A）管内。真巾管（A)jX8.00.2m m，内径4.00.2mm, 且在厚1.00.2mm。底座（B）对管（A）定位部分的直径为4.0土0.2m m，高2.00.2mmo组装后可在管（A）内制备高6mm，直径为4mm的试样。直径为0.200.0Smm、精度为o.1的热电偶和精度适当的XT记录仪。206 GB 11749腑吧。钊俯4士G.2”。钊【Rdv-RV 费量1工作哥们湾、!jlJ化时间秘主主装窒A骤乙烯蕾B 聚曹先按（ill;践他适宜树料lI旺盛$C一不锈钢戎黄制帘，D一热电偶6.3.2 试验步骤按照制i蛊广说明
7、书调和材料，并将模具移人23士1的环境温度中。在：i阅和开始30s后，将调和l的材料装入模爽的型腔内，并用记录仪记录材料的温度。坏I竟温度维持在23士1。继续记录材料的滋度，豆圣王握主度的峰f在过后。说明IE每部2哥哥示的温度时i郑重量线可惹出，i题和弱的材料在那装入模具对，温度稍有下降量T们并维挎a段时间，然后温度开始上升。温度开始i：升滋味辛苦困化反应开始，提ll工作肘阔的结束。记录从调和开始歪温度开始上升的时间Jill隔均工作时间。以t步骤重复五次。co7 温度. 0 . 6.3.3 试验结果GB 11749一”Tw 图2显示测定工作时间和固化时间的温度时间曲线全少有四次工作时间不小子9
8、0s，方可认为符合5.3.2条的规定。如果有三次戎三次以上工作时间小于90s，则认为不符合5.3.2条的规定。时间归如果只有三次工作时间不小于gos，重复本试验。在第二次试验中，仍有一次或一次以上工作时间小于90s，则认为不符合5.3.2条的规定。6.4 I型材料剧化时间6.4. 1 器具16. 3. 1。6.4.2 试验步骤在试验条件为37士1下重复6.3.2条中规定的试验步骤。记录从调和开始至温度达到最大值的时间ill隔为固化时间。6.4.3 试验结果歪少有四次困化时间不大于5min，方可认为符合5.3.3条的规定。如果奋三次或三次以上固化时间大于5min，认为不符合5.3.3条的规定。如
9、呆只布三次困化时间不大于5min，重复本试验。在第二次试给中，仍有一次或一次以上固化时间大J5 min，则认为不符合5.3. 3条的规定。6.5 H型材料对环境光线的敏感性6. 5. 1 器具6.5.1.1 缸灯或其他等效光源。推荐使用牙科椅或综合治疗台二作灯。6. 5. 1. Z 1 m m厚的载玻片两块。6.5.1.3 照度计。 5. 1. 4 可调式试验台板。6.5.2 试验步骤在暗室内，将照度计放在光源下，调整试验台板使试验台板上的照度为10000 1000 Ix 。将30mg材料放在台板的裁玻片上，照射60 5 s ，用另块载玻片l玉挤材料形成薄层。若材料k有裂缝戎孔隙产生，则认为材
10、料相j凝。上述试!j(再重复两次，记录三次试验结果。208 GB 11749一”6.5.3试验结果三次试验均不出现相J凝，则认为符合5.3.4条的规定。6.6 E型材料的国化深度6. 6. 1 器具6.6.1.1 模具可制备长6mm，直径4mm试样的金属模具。6.6.1.2 厚lmm载玻片两块，其面积能覆盖模具的端口。6.6.1.3 厚为50士30阳n聚乙烯膜片。6.6.1.4 光源，制造厂推荐s6.6.1.5 百分表，精度不低于O.lm m 6.6.1.6 塑料调棒6.6.2 试缝步骤将模具放在下有载玻片的聚乙烯膜片上，按照制造厂说明书将材料充满模具，排除气泡，并稍高出模具，在模具顶端放置另
11、一聚乙烯膜片，上面再盖上载玻片并压挤，去掉多余材料。移去模具顶端的载玻片，光源窗口对准试样，回化深度可达2mm的照射时间进行照射。在照射后180 20s时，从模具中取出试样，用塑料调棒轻轻去掉禾固化的材料，用百分表测量固化部分试样的高度，再重复两次。6.6.3 试验结果记录三次固化深度的平均值，应符合5.3.5条的规定。6. 7 挠曲强度6. 7. 1 器具6.7.1.1 模具如图3所示，内徐少量脱膜剂，易于试样脱膜。町。钊闵图3提曲强度试样模具6.7.1.2 载玻片两块，其面积适于覆盖模具。6. 7. 1.3 模具夹。6. 7. 1.4 37士1的恒温水浴槽。6. 7.1.5 光源，制造厂推
12、荐。2119 .7.1.6 游标卡尺，精度为0.Olm m。由.7.1.7加荷装置GB 1174-” 两个直径为2mm的钢制圆柱中心距为20mm乎行安装在下加荷台上，另一个同样的圆柱安装在上加荷台上，并使其在下加荷台两圆柱中间且互相平行。以对试样构成三点加荷。6. 7.2 试样制备6. 7.2.1 I型材料按照制造厂使用说明书调和材料并立即装入下奇载玻片的模具内。将另一载玻片放在模具顶端，并用夹子轻轻夹紧，使多余材料溢出。移入37恒温水浴槽中，从调和开始计算时间，放置3min 。在调和后15min时去掉夹于取出试样，贮存在37土1蒸饱水中。制备5个试样。6.7.2.2 H型材料按照制造厂使用说
13、明书如同6.7.2.1方法将材料装人模具。光源窗口对准试样某段的中心并抵着载玻片。照射时间在达到制造厂推荐时间后，移动光源窗口对准试样另一段的中心，且需使每次光照部分与前次光照部分有所重叠。照射时间同上。这样依次进行，直到试样各部分均被照射了足够时间。然后，对试样另一面进行同样的操作。将试样连同模具一起放入37恒温水浴槽内浸15min，然后从模具中取出试样放在37蒸饱水中。6.7.3 试验步骤在调和结束后23h45mm时测量试样的尺寸。然后把试样放在上述!Jo荷装置上，以.0.75 0. 25mm I min的速度进行加荷，直至试样断裂，记录下最大的加荷值。6. 7.4 试验结果应用（1 ）式
14、计算烧曲强度式中0一一挠曲强度，MPa1 F一一最大加荷值，N, 3 FL 一一一. ( 1 ) 2BH 2 L一一下加荷台两加荷点同距离，mm B 试样宽度，mm1 H 试样高度，mm。如果4个或5个试样的抗压强度不低于50MPa，则认为符合5.3.6条的规定。如果3个或3个以上试样的抗压强度低于50MPa，则认为不符合5.3.6条的规定。如果只有3个试样的抗压强度不低于50MPa，则应重复上述试验。若在第二次试验中，如果全部试样的抗压强度不低于50M Pa ，则认为符合5.3. 6条的规定，否则不符合5.3. 6条的规定，并不再重复试验。6.8吸水值和溶解值6.8. 1 器具6.8.1.1
15、 模具如图4所示，可制备直径为15 1 m m，厚0.5土O.lm m试样困片。21 IJ GB 1174一”直径为15.00!mm的不辑铜圆柱定位螺钉内径为15.0士0lmm的不辑铜曹试挥图4吸水或溶解试样模具6.8.1.2 薄膜，能透过使材料聚合反应的光线，厚度为50 3。”m，如聚脂。6.8.1.3 载玻片，厚度为2mm。6.8.1.4 内装有无水氯化钙或硅胶的保干器2个。6.8.1.5 光源，制造厂推荐（仅用于E类材料。自.8.1.6 分析天平，精度为0.1m s。6.8.1.7 百分表，精度为0.Olm m。6.8.1.8 模具夹。6.8.2 试样的制备6.8.2.1 I型材料按照制
16、造厂说明书调和材料，并装入模具。装人的材料略高出模具，然后在材料k面放一聚脂薄膜，再将载玻片盖在上面。用模具夹将载玻片和模具夹紧，去掉多余的材料。用此方法制备5个试样。由.8.2.2E型材料按照制造厂说明书调和材料，并以6.8.2.1的方法将材料装人模具。光源窗口抵着载玻片，按照制造！推荐的照射时间对试样进行照射，且需使每次光照部分与前次光照部分厨部重叠，以使试样的各部分均按规定的时间被照射。用此方法制备5个试样。6.8,3 试验步骤6. 8. 8:1 将试样从模具中取出放入37 1保干器中。24h后，再将试样移入23 1保干器中存放1 h。然后，对试样称量精确到O. lm g。重复上述操作直
17、到质量恒定，记为m1。6.8.3.2 将试样浸入37 1的蒸饱水中，7d后用水冲洗，再用棉纸吸干试样表面的水，并在空气中抖动15s。在试样从水中取出1min后称量，记录这一质量，i己为m2 D 6.8.3.3 按照6.8.3.1叙述的方法，使试样质量恒定，记录这一恒定质量，i己为m,D 6.8.3.4 在试样的中心及边缘间隔90。四处测定试样的直径和厚度，并计算其体积，单位为mm。6. 8. 4 试验结果6.8.4.1 吸水值应用（2 ）式计算每个试样的吸水值w I I 式中gw 一一吸水值，地mm3 1 m2一一浸水7d后的质量，悔GB 1174一”w -. m 2 m, v m, 浸7j(
18、7 d后的恒定质量，问V一一试样的体积，mm。如果4个或5个试样的吸水值不大于50问mm，则认为符合5.3. 7条的规定。如果只有2个试样的吸水值不大于5Qg/mm3，则认为不符合5.3. 7条的规定。( 2 ) 如果只有3个试样的吸水值不大于50问mm3，则应重复上述试验。在第二次试验中，如果全部试样吸水值不大于5。”g/mm，则认为符合5.3.7条的规定，否则不符合5.3.7条的规定，并不再重复试验。6.8.4.2 溶解值应用（3 ）式计算每个试样的溶解值w, : w, = 式中：w，溶解值，问mm1 m，一一浸水前的恒定质量，问，m，一一浸水7d后的恒定质量，gI V一一试样的体积，mm
19、3 o m 1 - m v 如果4个或5个试样的溶解值不大于5问mm3，则认为符合5.3.7条的要求。如果只有2个试样的溶解值不大于5问mm，则不认为符合5.3.7条的要求。( 3 ) 如果只有3个试样的溶解值不大于5问mm，则应重复上述试验。在第二次试验中，如果全部试样溶解值不大于5g/mm3，则认为符合5.3. 7条的要求，否则不符合5.3.7条的要求，并不再重复试验。6. 色稳定性6. 1 器具6. . 1. 1 37士1的恒温箱。6. 1. 2 色温为50007000K的缸灯及37 5的恒温系统。队.1. 3 厚度为0.05-0.ZOmm聚四氟乙烯薄膜。6.9.2 以聚四氟乙烯薄膜替代
20、聚脂薄膜分别按6.8.2.1条和6.8.2.2条制备I型和H型试样各两个06.9.3 试验步骤将其中的一个试样在37 1的黑暗环境中贮存7d。另一个试样的一半用铝宿或锡街覆盖，移入37 5的恒温箱内，调整光源、使试样所在处的照度为150000 15 000 I x，照射24h。然后去掉铝销或锡锚，将试样放入37 1 ;c恒温暗室中贮存6d。将两个试样同制造厂提供的比色板进行比较。7 检验规则7. 1 牙科复合充填材料应由制造厂技术检验部门进行检查，合格后方可提交验收。7.2 牙科复合树脂充填材料必须成批提交检查。检查分为逐批检查出J检查）和周期检查（型式试验或例行试验。7.3 逐批检查7. 3
21、. 1 逐批检查按GB2828的规定进行。7.1.2 抽样方案类型采用一次抽样。抽样方案严格性从正常检查抽样方案开始，其缺陷分类、检查项目、检查水平和AQL （合格质量水平按表1的规定。212 GB 1174一”表1缺路分类严重缺撞撞B 较缺骂王c 捻呈辈分樊组I II 检褒项目5.3.4条5. 3. 2、5.3. 3条5. 3. I条检资水平白白lS - I s - 4 AQL 1.5 2.5 4.0 7.罩，S转移去琵则7.8.8.1 牙科复合树指充填材料在进行正常检查时，者在不多于连续五批中有二批经初次检查不包括再次提交检查批不合格，则从下一批检查转移到加严检查。在修正缺陷时，若影响其他
22、试验组，再检查哪峻项目，由质量部门和接收方决定。7.8.3.2 从加严检查到正常检查、从正常检查到放宽检盔、从放宽检查到j正常检查、从加严检查到曾停检查应符合GB2828的规定。7.4 题期检查1.莓，ft F列1需况下亦应进行周巍检查za. 新产品投产前包括老产品和转产产品，b. 连续生产中每年不少于次，c. 间隔一年以上再投产时， 在E设计、工艺或成分有藏大改变肘。1z 周期检查按GB2829的规定进行。7.4.3 烧骂骂检查前应先进行遂批检查，从逐批检查合格的批中捡取草草本进行愿英勇检查，1.唾.4揭露哥检查采取一次抽样、判定7j(乎为题，其检姿军!3、判定数量E幸llRQL（不合格质量
23、水等按表2的规定。表2检量挂J 目检查周期判窟数组RQL 5.3.5条一月一次”坦5(,4 = 0 , R = 1蛐5.3.7条二月一次5. 3. 6、5.4条六月次5. 2条新产品投产前包括老产品和l转产产品，设计、工艺烧成分在重大改变时，连续生产三年8 标志、包装、运输、贮存8. 1 牙科复合树脂充填材料必须包装在具有防光辐射、或不污染且不影响材料性能的容器中，包装容器还应具有在正常搬运或贮存期间不损坏不破裂的性能。8.2 小包装t应有下列标志s 制造厂名称和商标事213 GB 1174-” b. 产品z称，c. 净重，d. 批号，e. 有效日期g8.3 外包装上应有下列标志ga. 制造厂
24、名称、商标和地址，b. 产品名称，c. 重量和数量，d. 毛重，e. 体积，r. 出厂日期，g. “小心轻放”、“防潮”、“防高温”、防强光辐射”等字样或标志。标志应符合GB191 中的有关规定。箱上字样和标志，应保证不因历时较久丽模糊不清。8.4 每20个最小包装件应附有比色板。8.5 每一包装应附有检验合格证，检验合格证上应有下列标志sa. 制造厂名称，b. 检验员代号，c. 色标。8.6 每一包装必须附有使用说明书。使用说明书上至少应有下列内容ga. 树脂基质中主要有机成分，b. 无机填料中粒度范围及其在复合树脂中所占体积的百分比，c. 临床使用简要说明， I型材料的调和比例和调和方法，
25、e. E型材料的光源及在推荐的照射时间下的固化深度，r. I型材料的工作时间和固化时间，g. 推荐采用的垫底材料和洞衬材料及不宜采用的垫底材料和洞衬材料，b. 推荐的抛光器械，I . 贮存条件如s需在冰箱内贮存以及在贮存条件下材料的有效期。214 Al 牙髓试验A 1. 1 目的GB 1174-” 附录A生物适应性（补充件）本试验用来评价牙科复合树脂充填材料的牙髓反应A 1. Z. 试验牙齿临床上完整或无醺洞和无大面积磨损的非人体牙齿。A 1. 8 材料A 1. 8. 1 试验材料被测牙科复合树脂充填材料。A 1. 8. 2 阴性对照材料符合ZBC 33 018的氧化铮丁香自由水门汀。A 1.
26、 a. a 阳性对照材料牙科硅酸盐水门汀。A 1.4 试验步骤对试验动物进行全麻。备洞前去除牙齿表面所有的牙石和软垢，在水喷雾下用锋利的钻针在牙茵的颊面制备完整的V类洞。洞型两边尽量接近牙齿近远中面，洞底到牙髓的距离不大于lmm，并用无菌棉卷和气枪干燥窝洞各壁。试验牙齿和对照牙齿的解剖学位置应尽量相似。A 1. 4. 1 试验材料的充填按照制造厂使用说明书将牙科复合树脂充填材料填入备好的洞内A 1. 4. 2 阴性材料的充填将调和后的氧化铸丁香酷水门汀直接填人已备好的洞内，用银家合金修复窝洞表面。如果该材料在该试验室已有阴性对照结果，则不需每次重复阴性试验A 1.4.8 阳性材料的充填将调和后
27、的牙科硅酸盐水门汀直接填人已备好的洞内。如果该材料在该实验室已有阳性对照结果，则不需每一次重复阳性试验。A 1. 4. 4 试验周期Al.4.4.1 短期周期为7d。将20颗牙分为以下三组z试验材料组.10颗。阴性对照组.5颗。阳性对照组g5颗。Al.4.4.2 中期周期为30d0 将20颗牙分为以下三组s试验材料组I10颗。阴性对照组.5颗。阳性对照组z5颗。A 1.4.4.8 长期215 GB 11749一”周期为80d0 将20颗牙分为以下三组2试验材料组g10颗阴性对照组g5颗。阳性对照组g5颗。注z同试验周期在同一个动物身上进行。A 1. 5 临床观察动物处死之前进行临床体征的观察。
28、A 1. 6 组织预备A 1. 6. 1 固定处死动物后，用骨锯切下包括颊舌侧牙槽骨在内的牙齿，并避免损伤牙根，然后在10%福尔马林中浸泡48h。在生理盐水冷却下用金钢砂片切除充填体边缘的牙齿近远中部分，从而保证固定剂和组织学试剂的充分渗透，切割面是未来石蜡切片的指示面。切除后立即放入10%福尔马林中。A 1. 6. 2 脱钙采用二次脱钙法。A 1. 6. 3 冲洗脱水流动水冲洗试样24h，梯度酒精脱水。A 1. 6. 4 包埋、切片石蜡包埋，连续切片。要求切穿整个牙髓，片子厚度为5m，一张载玻片放35张切片。颗牙齿切三十张。A 1. 6. 5 染色、观察用苏木精伊红染色。光学显微镜观察。A
29、1. 7 结果评定Al.7.1 牙髓反应等级的划分见表A1 ) 以长期试验组结果作为材料对牙髓刺激的是终评价结果。表Al等级i平价012 与阴性对照组牙髓反应相同有反应，但反应程度低于2级与阳性对照组牙髓反应相同Al.7.2 牙髓反应的评定在试验动物中，有一只或一只以上牙髓反应为2级，则认为该材料对牙髓布刺激性。不符合5.2.1条的规定。在试验动物中，有二只或二只以上牙髓反应等级为1级，则认为该材料对牙髓具有刺激性。不符合5.2. 1条的规定。除上述情况外，均认为该材料对牙髓无刺激性。符合5.2. 1条的规定。A2 细胞毒性试验分f过滤法）A 2. 1 目的本试验用来评价牙科复合树脂充填材料的
30、细胞毒性。A 2. 2 试验材料216 GB 1174-89 A 2.2. 1 培养液（基A2.2.1.1 生长培养液Eagles MEM培养被内含10%小牛血清，110iu/L青霉素、lOOmg/L链霉素、lOmmol/L 碳酸氢纳和lOmmol/LHEPES缓冲成分。注，HEPES为N一2一路基乙醋呱嗦乙炕硫酸。A2.2.1.2 琼脂培养基Eagles MEM 2 （表示所有成分为正常浓度的2倍），内含10%小牛血洁，1lOiu/L青霉素、lOOmg/L链霉素、1.5%琼脂和lOmmol/L碳酸氢纳成分。A 2.2.2 细胞株小鼠成纤维细胞（L929），使用时为传代4872h的生长旺盛的细
31、胞。A 2. 2. 3仪器A 2. 2. 8. 1 37含5%二氧化碳的恒温培养箱。A 2.2.3.2 超净工作台。A 2.2.8.3 水浴箱（100）。A 2.2.S.4 直径57mm，孔径。.45m的分子滤膜。A2. 2.8.5 直径60mm的组织培养皿。A 2. 2. 4试剂A 2.2.4. 1 蒸饱水。A 2.2.4.2 唬泊酸脱氢酶活性检测剂z唬躏酸纳0. 06mol/L 磷酸缓冲液。.2mol/L 林格氏液Nitro BT 0.2% A2.2.4.3 磷酸缓冲液（pH=7.22), 4.0mL 4.0mL 2.0mL lOmL 磷酸二氢纳0.2mol/L 28mL 磷酸氯二钩。.2
32、mol/L72mL A 2. 8 试验方法用生长培养被配制310/mL的细胞悬液，将滤膜置于组织培养皿中，移注6mL细胞悬液，在37、含5%二氧化碳培养箱中培养24h.24h后，预热琼脂培养基，待溶解后，降温至40左右，移注5mL于空培养皿内。室温下凝固后，取经24h培养的带有单层细胞的滤膜，覆盖在琼脂培养基麦丽，细胞面向下，将经消毒的直径为7.00. lm m，高2.00.5mm国化后的牙科复合树脂充填材料试样放在滤膜上，每张滤膜可放35片试样，共需10片。阴性对照应采用含单层细胞但无试验材料的滤膜和不含细胞但接触试验材料的滤膜。阳性对照用20%苯盼溶液浸湿的直径为7mm的滤膜或涂有邻苯二甲
33、酸脂的涤纶薄膜。将放有试验材料的阴性对照膜和阳性对照膜的培养皿放人37、含5%.二氧化碳培养箱中培养2h。2 h后，去除试验材料，轻轻地将滤膜与琼脂分开，用碗泊酸脱氧酶活性检测剂接触滤膜，继续在37培养箱中作用3h，然后用蒸细水漂洗滤膜，空气干燥。A 2.4 结果评定肉i检查滤膜，含有单层细胞的阴性对照显示浅蓝色的均一染色，无细胞的阴性对照滤膜显示无任何压迹等异常现象。接触试验材料的滤膜按细胞毒性试验评定方法进行评定（见表A2）。GB 1174-89 表A2级u 现象L平价。123与单层细胞的其他部位比较，染色密度无差异染色密度减少或未染色区域宽度小于7mm未染色区域宽度为7！Imm未染色区域
34、宽度等于或大于12mm无细胞毒性轻度细胞毒性中度细胞毒性明显细胞毒性A 2.5 细胞毒性评定受试样品级别在01级范围内，则认为该材料是安全的。符合5.2.2条的规定。A3 鼠伤寒沙门氏杆菌回复突变试验（Ames试验）A 3. 1 曰的本试验用来评价牙科复合树脂充填材料的诱变性。A 3.2 试验材料A 3. 2. 1 菌株组氨酸营养缺陷型鼠伤寒沙门氏杆菌共四株一一TA 97、TA 98、TA 100、TA 1020 菌株贮存在加有二甲基亚讽的光谱纯新鲜细菌培养液中，其体积比为o.09: 1，混合后分装于小试管或菌种管内，经干冰丙嗣掖（一75）或液氮（196速冻，在80冰箱或196液氮中长期贮存。
35、A 3. 2. 2 培养基制备A 3. 2. 3 受试样品的制备将试验材料按制造厂提供的说明书制备成厚度大于0.5m m而小于l.Omm的薄片为试样。以生理盐水、二甲基亚鼠、二甲基甲航胶、丙嗣、乙醇、四氢峡喃、醋酸乙苗等作为溶媒。按照试样上下面的总面积300mm 2制取lmL浸出液的比例，共制取浸出液20mL。A 3.2.4 代谢活化剂制备A 3. 2. 4. 1 大鼠肝脏诱导选体重200g左右的雄性S-D大鼠。玉米油稀释多氯联苯（PC B )200mg/m L，腹腔一次注射500m g闻，第6d用颈动脉排窒血液法处死，处死前12h禁食不禁水A 3. 2. 4. 2 切除肝脏处死的大鼠经过无菌
36、处理，打开腹腔，用20mL,0.15moJ/L氯化饵溶液（4）进行肝门静脉灌注后，小心分离并将肝脏完整取出，整个过程应在无菌室中进行。A 3. 2. 4. 3 s，制备肝脏称重后，在0.15mo 1/1氧化饵溶液中洗涤数遍，加相当于肝重三倍自甘0.15mol/L氯化饵溶液月剪刀剪碎，放入组织匀浆机中，以4OOOr/m in匀浆2min，将匀浆液放人高速冷冻离心机，以9000g离心lOmin ，其上层液!IPS，。离体以后的肝脏始终保持4以下无菌操作。A 3. 2. 4. 4 S，贮存吸取2mL上层液分装于小试管或安筒中，在密封的条件下，用于冰丙嗣液速冻后，贮存于80 冰箱或液氮容器中。A3.2
37、.4.5 s，鉴定a. 无菌试验，b. 蛋白含量测定（Lowry法，c. 细胞色素p-450il!tl定，218 GB 11749一” 阳性对照剂（忡s，）的生物学视JEoA 8. 2. 4. 6 s，剂量首先使用浓度为20L皿（在s，混合液中实际含有U.04mUmL的S仆。如果是阴性结果，还应使用浓度为5。”LI皿（在s，混合液中实际含有6.lmL/m L自惧，重新试验。A 8.2.4.7 S，混合液a. 标准浓度，8mmol/L氯化镇、33mmol/L氯化钢、5mm ol/L6 磷酸葡萄糖，4m m ol/L, 辅酶E、lOOmmol/L磷酸纳缓冲液归H=7.4）和s,0. 04m L /
38、m L混合液。b. 高浓度z除s，增加至O.lmL /m L混合液外，其余成分同标准浓度。A a.a 试验方法A a.a. 1 菌株培养从冷冻贮存菌株管中刮取细菌置营养肉汤培养基中，经37振荡培养1012h，细菌活菌数可达109个mL。细菌培养液从37取出后，应立即放入冰浴中备用。试验需用当天孵育好的新鲜细菌培养液。飞A a.a;r菌株鉴定Aa.3.2.1 组氨酸需要（his- ) 在底层培养基平皿表面加入O.5m mol/L L一组氨酸。.lmL和O.5m m ol /L D 生物素。.1mLo 用L棒铺开。对照平皿只加生物素不加组氨酸，用白金耳浸细胞培养液，在对照平皿和含有组氨酸生物素的平
39、皿表面分别平行划线。四株细菌可划在同一个乎皿上，经37孵育过夜后，检查生长情况，对照平皿上不应长菌。A 3.8.2.2 结晶紫敏感（rfa)分别将每种细菌培养液。.lm L加到452mL TY!层培养基试管内，混均后倾倒于营养琼脂培养基平皿表面，使其均匀分布。待固化后，取直径为6mm无菌滤纸阻片浸1mg/m L结晶紫溶液lOL放到平皿中央，经37孵育12h后，围绕圆纸片出现抑菌圈直径大约14mm），表示对结晶紫敏感Aa.a.2.a 紫外线敏感（uvrB) 用自金耳浸细菌培养液，在营养琼脂培养基乎皿表面乎行划线，四株细菌可划在同一平皿上。用一张纸板盖上划线菌株的一半，在距离33cm处用15W紫外
40、线杀菌灯照射乎皿8s，经37孵育过夜后，对紫外线敏感菌株只在未照射过的一半平皿上生长。A 3.8.2.4 抗氨二乍青霉，在（PKMlOlJ 用自金耳浸细胞培养液，在含氨来青霉素平皿表面平行却j钱，四株细菌可划在同一平皿上无抗性因子的菌株也应选用一个，用来测定氨l青霉素的效应。经37孵育过夜后，无抗性园子的不应长菌。A8.8.2.5 抗四环素（PAQI)用白金耳浸细胞培养液，在含氨苯青霉素四环素乎皿表面平行划线，四株细菌可划在同一平皿上。经37孵育过夜后，有抗四环素作用的菌株应长菌，其他菌株均不长菌。A8.8.2.6 白发回变数（his+ ) 在小试管中加入2mL顶层培养基榈.lm L细菌培养液
41、，迅速在高速液体混合器上混匀，倾倒在底层培养基平皿上，使其均匀分布。待固化后，经37孵育48h，统计全部菌落数。一个菌株应做23个平皿，以便计算平均菌落数。必要时可重复试验，以保证回变菌落数值在一个恒定的范围。A 3.3.2.7 诱变剂敏感使用已知阳性对照剂，检查测试菌株的敏感性是否降低，其方法同3.3.4条。A 3. 8. 3 预试验用菌株TA 100进行预试验（操作程序应同正式试验一致）以了解受试样品对细菌的毒性。决定受试样品的最高剂量的标准是细胞毒性和溶解度。细胞毒性表现是B平皿中回复突变菌落数减少，背景菌苔变清晰，40倍显微镜下背景菌苔稀疏，体积增大等。毒性大的受试样品，选得有轻微21
42、9 GB 1174-89 毒性的剂量作为试验的最高剂量。毒性小、溶解度高的受试样品，最高剂量溶液50mg/mL，混悬液lOOmg/m L，浸出液200mg/mLA 3. 8. 4 诱变试验一次试验最少设5个试验组及阴性（溶媒对照组和阳性对照组，代谢活化和非代谢活化两种测试过程应同时进行。试验平皿应作双份。试验结果在有背景菌苔存在情况下，计算每个平皿的回变菌落数，并需重复试验12次。A 3.3. 4.1 f!li培养法分别取0.lm L受试样品溶液、0.5mLS，混合液或O.5m L不含岛的磷酸缓冲液）、0.lm L细国培养液，三者移人无菌小试管内混合，在37振荡培养20min ，再加人2mL顶
43、层培养基，混匀后倾倒在底层培养基平皿上，使之均匀分布。待固化后，经37孵育48h观察结果。A 3.3.4.2 平板掺入法取顶层培养基2mL分装子小试管中，再分别加入o.lm L受试样品溶液、O.lm L细菌培养液和0. 5mL S，混合液或0.5mL不含岛的磷酸缓冲液，混匀后倾倒在底层培养基平皿上并使之均匀分布。待固化后，经37孵育48h观察结果。A 3.4 结果评定记录试验组和对照组的每一平皿的回变菌落数，每个试验组的回变菌落数以平均值和标准差xSD ）表示。受试样品的回变菌落数高于阴性对照回变菌落数的二倍以上，并有剂量一效应关系或某几个剂量点的可重复性，则判为诱变阳性，不符合5.2.3条的
44、要求。反之则为诱变阴性，符合5.2.3条的规定。A4 致敏试验A 4. 1 本试验是用来评价牙科复合树脂充填材料的致敏作用。A 4. 2 试验动物推荐使用Harloy的种系或其他已知种系的健康白化豚鼠，体重为300-500g，数量至少为30只，其中试验组、阴性对照组及阳性对照组各10只，每组雌雄各半。动物皮肤应无创伤、皮肤病和寄生虫病。雌性动物应是未产和无孕，A 4. 3 材料及制备A 4. 3. 1 试验材料将试验材料按制造厂提供的说明书制备成厚度大于0.5m m而小于1.0mm的薄片为试样。阴性对照材料为生理盐水。阳性对照材料为5%甲醒溶液。A 4. 3. 2 试验液A 4.3.2. 1
45、福氏（Freunds）完全佐lfiJ(A Ji!J) A 4. 3. 2. 2 试验材料浸出液（BJi!J) ：按照试样上下面的总面积.300mm 2制取lmL浸出液的比例，将试样浸泡在装有生理盐水的密封容器中，在37条件下保持7d，提取上清液lOOmL作为B剂。A 4.3.2.3 含B剂的A押j乳化液（Clfij)：取A剂与双蒸锢水按1: 1比例混匀，然后加入BJi!J制成含5%B剂的乳化液。A 4. 3. 3 j肖毒试验材料、容器、打磨E具等不得有袖污、灰尘，且经常规消毒。A 4.4 试验步骤A 4.4. 1 感应阶段用戊巴比妥纳（20mg/kg）将动物浅度麻醉，按图A1所示的注射部位剪去
46、披毛，75%(V l V) 酒精消毒，用A、B、C三种试剂成对的在豚鼠背部中线两侧作皮内缓慢注射，以减少注射引起的炎220 GB 14一”性反应e各点相距10ZOmm。连续观察7d，若出现全身毒性反应或产生局部溃荡甚至坏死则应适当降低浓度。 ( O.lmL (A荆 ( O. !mL (B剂 ( O.lmL (C押j图A1 致敏试验注射位置A 4.4.2 反应阶段在感应阶段后，重新剪毛，暴露注射部位。用含10%(W/ W）十二炕基磺酸铀的凡士林混合糊剂涂抹试剂剌激，使其产生轻微的炎性反应。24h后取B1IJO. Zm L滴于zomm 40m m的脱脂棉或滤纸圆片上贴敷于豚鼠注射部位，并用透明防水
47、纸覆盖，再用医用胶布或弹性绷带固定，贴敷后48h，除去覆盖物，用75%(V/ VJ酒精消毒该区。A 4. 4. 3 效应阶段在动物背部未i式验区选择三点，部位靠近诱导注射点，剪去披毛，用75%c v I v l酒精消毒。然后将B剂滴于ZOmm 40m m脱脂棉或滤纸圆片上贴敷该区。用上述方法固定，24h后去除绷带和敷贴物，48h后剪去背部非试验区的披毛，用75%(V /V l酒精消毒该区，将试验区皮肤与非试验区皮肤进行对照，根据反应面积、肿胀程度和颜色，作出致敏反应的评价。A 4. 5 结果评定A 4. 5. 1 致敏等级的划分（见表A3) 等。l （士）2 ( + ) 3 ( + +) 级表
48、A3注在三个试验区中以最高致敏等级作为该动物的致敏等级。A 4. 5. 2 致敏毒性的判定i平价无反应经度肿胀、发红中度扩散性肿胀、发红重度红肿泊烂在试验动物中有一只或一只以上致敏等级为三级，则认为该材料具布致敏毒性。不符合5.2. 4条的规定。在试验动物中有三只或三只以上致敏等级为二级，则认为该材料具有致敏毒性。不符合5.2.4条的规之。在试验动物中有五只或五只以上致敏等级为一级，则认为该材料具有致敏毒性。不符合5.2.4条的规定。在试验动物中，一级致敏反应和二级致敏反应的动物数总和为四只或四只以上，则认为该材料具有致敏毒性。不符合5.2.4条的规定。除上述情况外，均认为该材料无致敏毒性。符合5.2.4条的规定。GB 1174一”附加说明，本标准由全国口腔材料和器械设备标准化技术委员会归口。本标准由中国医疗器械士业公司也科材料测试室负责起草。本标准主要起草人刘文一、孙思宁。222
