1、前言本标准的附录A、附录B均为规范性附录。本标准由中华人民共和国农业部提出并归口。本标准起草单位=华中农业大学。本标准主要起草人z吕作舟、陈立国、王卓仁。GB 19169-2003 GB 19169-2003 引言栽培黑木耳使用的菌种是人工培育的纯葛丝体及其培养基的混合体。我国采用三级扩大繁育程序(即母种、原种、栽培种)培育木耳菌种。为了规范我国木耳菌种生产、经销和使用，确保我国黑木耳生产持续健康发展，特制定本标准。GB 19169-2003 黑木耳菌种1 范围本标准规定了黑木耳(Auriculariaauricula)菌种的术语和定义、质量要求、试验方法、检验规则及标签、标志、包装、贮运等。
2、本标准适用于黑木耳菌种的生产、流通和使用.2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T 191 包装储运图示标志(GB/T191-2000.eqv ISO 780 , 1997) GB/T 4789. 28 食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂GB/T 12728一1991食用菌术语GB 19172-2003 平菇菌种NY /T 528-2002 食用菌菌种
3、生产技术规程3 术语和定义下列术语和定义适用于本标准。3.1 母种stock culture 经各种方法选育得到的具有结实性的菌丝体纯培养物及其继代培养物，以玻璃试管为培养容器和使用单位，也称一级种、试管种。NY /T 528-2002.定义3.3J3.2 原种pre-culture spaWD 自母种移植、扩大培养而成的菌丝体纯培养物。常以玻璃菌种瓶或塑料菌种瓶或15cmX28 cm聚丙烯塑料袋为容器。NY /T 528-2002.定义3.4J3.3 栽培种spaWD 由原种移植、扩大培养而成的菌丝体纯培养物。常以玻璃瓶或塑料袋为容器。栽培种只能用于栽培，不可再次扩大繁殖菌种。3.4 3.5
4、 NY /T 528-2002.定义3.5J蘸顽现象antagonism 具有不同遗传基因的菌落间产生不生长区带或形成不同形式线行边缘的现象。GB 19172-2003.定义3.4J角变s配tor因菌丝体局部变异或感染病毒而导致菌丝变细、生长缓慢、菌丝体表面特征成角状异常的现象。GB 19169-2003 3.6 3.7 3.8 3.9 GB 19172-2003.定义3.5J高温抑制线high temperatured line 食用菌菌种在生产过程中受高温的不良影响，培养物出现的圈状发黄、发暗或菌丝变稀弱的现象。GB 19172-2003.定义3.6J耳芽(原基)promordium 黑木
5、耳子实体的幼小阶段，形成于培养基的表面，呈淡黄色或褐色半透明的胶质体。生物学效率biological efficiency 单位数量培养料的干物质与所培养产生出的子实体或菌丝体干重之间的比率。GB/T 12728-1991.定义2.1. 20J 种性characters of variety 食用菌的品种特性是鉴别食用茵茵种或品种优劣的重要标准之。一般包括对温度、湿度、酸碱度、光线和氧气的要求，抗逆性、丰产性、出菇迟早、出菇潮数、栽培周期、商品质量及栽培习性等农艺性状。NY /T 528-2002，定义3.8J4 质量要求4.1 母种4. 1. 1 容器规格应符合NY/T 528-2002中4
6、.7.1. 1规定。4. 1. 2 感官要求应符合表1规定。表1母种感官要求项目要求容器完整、元破损、无裂纹棉塞或无棉塑料盖干燥、洁净，松紧适度，能满足透气和滤菌要求培养基灌入最为试管屈、容积的四分之至五分之斜面长度顶端距棉塞40mm50 mm 菌丝生长量长满斜面接种量(接种块大小)(35) mmX (3 ,. 5) mm 菌种正面外观洁白、纤细、平贴培养基生长、均匀、平整、元角变，菌落边缘整齐，元杂菌菌落斜面背面外观培养基不干缩，有菌丝体分泌的黄褐色色素于培养基中气昧有黑本耳菌种特有的清香味，元酸、臭、霉等异味4. 1. 3 微生物学要求应符合表2规定。项目菌丝形态杂商表2母种微生物学要求要
7、求粗细不匀，常出现根状分枝，有锁状联合无4. 1. 4 菌丝生长速度:在PDA培养基(见附录A)L在适温C260C士20C)下，菌丝10天-15天长满斜面。GB 19169-2003 4. 1. 5 母种栽培性状z供种单位所供母种需经栽培试验确证种性中农艺性状合格后，方可用于扩大繁殖或出售。4.2 原种4.2.1 容器规格应符合NYIT 528-2002中4.7.1.2规定。4.2.2 感官要求应符合表3规定。表3原种感官要求项目要求容器完整、元破损、无裂纹棉塞或无棉塑料盖干燥、洁净，松紧适度，能满足透气和滤菌要求培养基上表面距瓶(袋)口的距离50 mm士5mm 接种量t每支母种接原种数，接种
8、物大小(4-6)瓶(袋).注12mmX15 mm 菌丝生长量长满容器菌丝体特征白色至米黄色，细羊毛状，生长旺健.菌落边缘整齐培养基及菌丝体培养基变色均匀.菌种紧贴瓶壁，无干缩菌丝分泌物允许有少量无色至棕黄色水珠杂菌菌落元额顽现象及角变无耳芽于实体原基)允许有少量胶质、珑泊色颗粒状耳芽气昧有黑木耳菌种特布的清香味，元酸、臭、霉等异昧4.2.3 微生物学要求应符合表2规定。4.2.4 菌丝生长速度在适宜培养基上，在适温(26C:t2C)下，40天45天长满容器。4.3 栽培种4.3.1 容器规格应符合NYIT 528-2002中4.7.1.3规定。4.3.2 感官要求应符合表4规定。表4栽培种感官
9、要求项目要求容器完整、无破损、无裂纹棉塞或无棉塑料盖干燥、拮净，松紧适度，能满足透气和滤菌要求培养基上表面距瓶(袋口的距离50 mm+5 mm 接种量(每瓶原种接栽培种数40瓶(袋)-50瓶(袋菌丝生长量长满容器菌丝体特征白色至来黄色，细羊毛状，生长旺健，菌落边缘整齐培养基及菌丝体培养基变色均匀.菌种紧贴瓶(袋)壁或略有干缩商丝分泌物允许有少量无色至棕黄色水珠杂茵茵落无额顽现象及角变无耳芽(于实体原基)允许有少量浅褐色至黑褐色菊花状或不规则胶质耳芽气味有黑木耳菌种特有的清香味，无酸、臭、霉等异味GB 19169-2003 4.3.3 微生物学指标应符合表2规定。4.3.4 菌丝生长速度=在适宜
10、培养基上，在适温(26.C土2C)下，一般35天40天长满容器。5 抽样5.1 质检部门的抽样应具有代表性。5.2 母种按品种、培养条件、接种时间分批编号，原种、栽培种按菌种来源、制种方法和接种时间分批编号。按批随机摘取被检样品。5.3母种、原种、栽培种的抽样量分别为该批菌种量的10%、5%、1%.但每批抽样数量不得少于10支(瓶、袋h超过100支(瓶、袋)的，可进行两级抽样。6 试验方法6.1 富检验按表5逐项进行。表5感官检验方法检验项目检验方法检验项目检验方法容器肉眼观察| 母种、原种肉眼观察、测量栽培种他查生产记录棉塞、元棉塑料盖肉眼观察培养基上表面距肉眼观察瓶袋口的距离母种培养基灌入
11、量肉眼观察菌丝体特征肉眼观察培养基及菌丝体肉眼观察母种斜面长度肉眼观察分泌物肉眼观察菌种生长量肉眼观察杂菌菌落肉眼观察必要时用5X放大镜观察母种菌种外观肉眼观察耳芽(于实体原基肉眼观察顿旗现象及角变肉眼观察母种斜面背面外观肉眼观察气昧鼻嗅6.2 微生物学检验表2中各项用放大倍数不低于10X40的光学显微镜对培养物的水封片进行观察，每一检样应观察不少于50个视野。6.2.1毒菌检验取少量疑有霉菌污染的培养物，按元菌操作接种于PDA培养基(见第A.1章)斜面或平板上.26C:I:2C培养5天7天，菌落出现白色以外的杂色者，或有异味者为霉菌污染物，必要时进行水封片镜检。6.2.2 细菌检验取少量疑有
12、细离污染的培养物，按元菌操作接人GB/T4789. 28中4.8规定的营养肉汤培养液中，25 C 28C振荡培养1天2天，观察培养液是否混浊。培养液混浊，为有细菌污染;培养液澄清，为元细菌污染。6.3 菌丝生长速度6.3.1 母种PDA培养基(见第A.1章).26C土2C培养，记录长满斜面所需天数。GB 19169-2003 6.3.2 原神和栽培种采用第B.1章、第B.2章、第B.3章规定的配方之一，在26C士2C培养，记录长满培养基所需天数。6.4 母种农艺性状将被检母种制成原种。采用第13.1章、第B.2章、第B.3章规定的配方之一，含水量提高至62%土2%.制作菌袋45个。接种后，分三
13、组进行常规管理，根据表6所列项目，做好栽培记录，统计检验结果。同时将该母种的出发菌株设为对照，亦做同样处理。对比二者的检验结果，以时间汁的检验项目中，被检母种的任何一项时间较对照菌株推迟五天以上(含五天)者，为不合格;产量显著低于对照菌株者，为不合格;子实体外观、耳片剖面形态与对照明显不同或畸形者，为不合格。表6母种栽培申农艺性状检验记录项目试验结果项目试验结果母种长满管所需天数总产/g原种长满瓶所需天数单产/g母种接种至萌发所需天数单朵耳质量/g原种接种至萌发所需天数生物学效率/%)栽培种接种至定植所需天数耳片朵型、色泽栽培种接种至产生耳芽所需天数耳片直径、厚度/mm接种至收第一茬耳所需天数
14、耳片剖面椅层6.5 留样各级菌种都应留样备查，留样的数量应每个批号菌种3支(瓶、袋)5支(瓶、袋).于4C6C下贮存，母种和原种6个月，栽培种4个月。7 检验规则按质量要求进行检验。检验项目全部符合质量要求者，为合格菌种;其中任何一项不符合要求者，均为不合格菌种。8 标签、标志、包装、运输、贮存8.1 标签、标志8.1.1 产晶标签每支、瓶(袋菌种需贴有清晰注明以下要素的标签ga) 产品名称(如黑木耳母种)，b) 品种名称(如:冀诱1号)，c) 生产单位(直Q:XX菌种厂)，d) 接种日期(如:200 1. X X. X X ) , e) 执行标准。8. 1. 2 包装标签每箱菌种需贴有清晰注
15、明以下要素的包装标签ga) 产品名称、品种名称$b) 厂名、厂址、联系电话，c) 出厂日期;d) 保藏期、贮存条件;GB 19169-2003 e) 数量;f) 执行标准。8.1.3 包装储运图示标志按GB/T191规定，应有以下图示标志a) 小心轻放标志;b) 防水、防潮、防冻标志;c) 防晒、防高温标志;d) 防止倒置标志;e) 防止重压标志。8.2 包装8.2. 母种外包装采用木盒或有足够强度的瓦楞纸箱，内部用棉花、碎纸等具有缓冲作用的轻质材料填满。8.2.2 原种、栽培种外包装采用足够强度的瓦楞纸箱，每箱20瓶，内部用碎纸、报纸等具有缓冲作用的轻质材料填满。纸箱上部和底部用8cm宽的胶
16、带封口，并用打包带捆扎两道，箱内附产品合格证书和使用说明(包括菌种种性、培养基配方及适用范围)。8.3 运输8.3.1 不得与有毒物品混装。8.3.2 气温达30C以上时，需用。C-，20C的冷藏车(船)运输。8.3.3 运输中必须有防震、防晒、防雨淋、防冻、防杂菌污染的措施。8.4 贮存8.4.1 母种一般在4C6C冰箱中贮存，贮存期不超过三个月。8.4.2 原种一般在0C10C以下冷库中贮存，贮存期不超过40夭。8.4.3 栽培种应尽快使用，14天内可在温度不超过26C、清洁、通风、干燥(相对湿度50%70%)、避光的室内松散存放。GB 19169-2003 附录A(规范性附录)母种常用培
17、养基及其配方A.1 PDA培养基(马铃薯葡萄糖琼脂培养基马铃薯200g(用浸出汁)，葡萄糖20g，琼脂20g，水1000 mL，pH值自然。A.2 CPDA培养基(综合马铃薯葡萄糖琼脂培养基)马铃薯200以用浸出汁)，葡萄糖20g，磷酸二氢梆2g，硫酸馁。.5g，水1000mL.pH值自然。A.3 木屑漫出汁马铃薯葡萄糖培养基马铃薯200以用浸出汁)，阔叶树木屑50g(用浸出汁)，葡萄糖20g，琼脂20g，水1000mLo 附录B(规范性附录)原神和栽培种常用培养基及其配方B. 1 木屑培养基阔叶树木屑78%，款皮20%，糖1%，石旁1%，含水量58%土2%。B.2 木屑棉籽壳培养基阔叶树木屑63%，棉籽壳15%，款皮20%，糖1%，石膏1%，含水量58%士2%。B.3 棉籽壳培养基棉籽壳79%，麦款20%，石膏1%，含水量58%士2%。
