1、前本标准的附录A、附录B均为规范性附录。本标准由中华人民共和国农业部提出并归口。言本标准起草单位z福建省轻工业研究所、福建省蘑菇菌种研究推广站.本标准主要起草人s玉泽生、廖剑华、曾辉、陈军、陈美元。GB 19171-2003 GB 19171-2003 冒l言栽培双抱蘑菇使用的菌种是人工培育的纯菌丝体及其培养基的混合体。我国采用三级扩大繁育程序(即母种、原种、栽培种培育双泡蘑菇菌种。为了规范我国双泡蘑菇菌种生产、经销和使用，确保我国双抱蘑菇生产持续健康发展，特制定本标准.E GB 19171-2003 双抱蘑菇种1 范围本标准规定了双抱蘑菇(Agaricusbisporus)菌种的质量要求、试
2、验方法、检验规则及标签、标志、包装、贮运等.本标准适用于双抱蘑菇(Agaricus仇isporus)菌种的生产、经销和使用。2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容或修订版均不适于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T 191 包装储运图示标志(GB/T191-2000.eqv ISO 780 ,1997) GB/T 4789.28食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂GB/T 12728-1991 食用菌术语G
3、B 19172 2003 平菇菌种NY /T 528-2002 食用菌菌种生产技术规程3 术语和定义下列术语和定义适用于本标准。3. 1 母种stock culture 经各种方法选育得到的具有结实性的菌丝体纯培养物及其继代培养物，以玻璃试管为培养容器和使用单位，也称一级种、试管种。NY /T 528-2002.定义3.3J3.2 原种pre-culture spawn 由母种移植、扩大培养而成的菌丝体纯培养物。常以玻璃菌种瓶或塑料菌种瓶或15cmX28 cm聚丙烯塑料袋为容器。NY /T 528-2002.定义3.4J3.3 栽培种spawn 由原种移植、扩大培养而成的菌丝体纯培养物。常以玻
4、璃瓶或塑料袋为容器.栽培种只能用于栽培，不可再次扩大繁殖菌种。3.4 3.5 NY /T 528-2002.定义3.5J额顽现象antagonism 具有不同遗传基因的菌落间产生不生长区带或形成不同形式线行边缘的现象。GB 191722003.定义3.4J角变sector 1 GB 19171-2003 3.6 因菌丝体局部变异或感染病毒而导致菌丝变细、生长缓慢、菌丝体表面特征成角状异常的现象。GB 19172-2003，定义3.5J高温抑制线blgh temperatur琶dline 食用菌菌种在生产过程中受高温的不良影响，培养物出现的圈状发黄、发暗或茵丝变稀弱的现象。GB 19172-20
5、03，定义3.6J3. 7 同工酶isoenzyme 催化相同生化反应，而结构及理化性质不同的酶分子。通过凝胶电泳使同工酶分离成迁移率不同的区带，经生物化学染色后显示出的同工酶谱，可对生物品种进行酶分子水平的鉴别或鉴定。3.8 生物学效率biologic划efficiency单位数量培养料的干物质与所培养产生出的子实体或菌丝体干重之间的比率。GB/T 12728-1991，定义2.1.20J 3.9 种性characters of variety 食用菌的品种特性是鉴别食用菌菌种或品种优劣的重要标准之一。一般包括对温度、湿度、酸碱度、光线和氧气的要求，抗逆性、丰产性、出菇迟早、出菇潮数、栽培周
6、期、商品质量及栽培习性等农艺性状。NY /T 528-2002，定义3.8J4 质量要求4. 1 母种4. 1. 1 容器规格应符合NY/T 528-2002中4.7. 1. 1规定。4. 1. 2 感官要求应符合表1规定。表1母种感官要求项目要求容器完整，元损棉塞或无棉塑料盖干燥、洁净，松紧适度，能满足透气和滤菌要求培养基灌人量为试管总容积的四分之一至五分之一培养基斜面长度顶端距棉塞40mm ,._. 50 mm 接种量(接种块大小(3-5) mmX (3-5) mm 菌丝生长量t主满斜面菌丝体特征洁白或米白、浓密、羽毛状或叶脉状菌丝体表面均匀、平整、无角变菌种外观菌丝分泌物无菌落边缘整齐杂
7、菌菌落元斜丽背面外观培养基不干缩，颜色均匀、元暗斑、无色素气味有双抱蘑菇菌种特有的香味，无酸、臭、霉等异味2 GB 19171-2003 4. 1. 3 微生物学要求应符合表2规定.表2母种微生物学要求项目要求菌丝粗壮杂菌元4. 1. 4 菌丝生长速度z在PDA培养基上，在适温(24c士1C)下，15天-20天长满斜面。4. 1. 5 母种遗传和栽培性状z供种单位需对所供母种进行酶酶(Est)同工酶类型鉴定，确认其遗传类型与对照相同后，再经出菇试验确证农艺性状和商品性状等种性合格后，方可用于扩大繁殖或出售。4. 1. 5. 1 菌丝体Est同工酶的板状聚丙烯酷胶凝胶电泳类型:包括G型(呈现挝、
8、e3特征带)、H型(呈现e2、e4和e30-e33特征带入HGI-HG2型(呈现el、e3、e30-e33特征带)和HG4型(呈现el、e2、e3、e4和e30-e33特征带等。以Est区带向正极泳动距离与澳盼蓝指示剂向正极泳动距离的比值作为电泳相对迁移率(Rm)，el、e2、e3、e4、e30、e31、e32和e33的Rm值分别为O.820、O.810、O.760、O. 750、O.128、O.100、0.070和0.010，4. 1. 5. 2 菌丝萌发、定植与生长能力g接种到适合的培养基后，在正常条件下24h内萌发，定植迅速、菌丝健壮。4.1.5.3结菇转潮能力g覆土后12天-16天结菇
9、，分布均匀;18天-22天采菇，每潮菇间隔7天-10天。4.1.5.4 生物学效率2在正常条件下生物学效率不低于3%。4.2 原种4.2. 1 容器规格应符合NY/T 528-2002中4.7.1.2规定。4.2.2 感官要求应符合表3规定。亵3原种感官要求项目容器要求完整，元损棉塞或无棉塑料盖干燥、洁净，松紧适度，能满足透气和滤菌要求培养基上表面距瓶口的距离50 mm :l: 5 mm 接种量(每支母种接原种数，接种物大小(4-6)瓶(袋)，主主12mmX15 mm 菌丝生长量长满容器菌丝体特征洁白浓密、生长旺健表面菌丝体生长均匀，无角变，元高温抑制线菌种外观培养基及菌丝体紧贴瓶(袋)壁，元
10、干缩表面分摇物无杂菌菌落无顿顽现象无气味布双抱蘑菇菌种特有的香味，无酸、臭、霉等异味4.2.3 微生物学指标应符合表2规定。4.2.4 菌丝生长速度z在适宜培养基上，在适温(24c土1C)下菌丝长满容器不超过45天。4.3 栽培种4. 3. 1 容器规格应符合NY/T 528-2002中4.7.1.3规定。3 GB 19171-2003 4.3.2 感官要求应符合表4规定。表4栽培种感官要求项目要求容器完整，无损棉塞或元棉塑料盖干燥、洁净.松紧适度，能满足透气和滤菌要求培养基面距瓶(袋)口的距离50 mm土5mm 接种量每瓶(袋)原种接栽培种数(30-50)瓶(袋)菌丝生长量长满容器菌丝体特征
11、洁白浓密、生长旺健不同部位菌丝体生长均匀，无角变，元高温抑制线菌种外观培养基及菌丝体紧贴瓶(袋)壁，无干缩表面分泌物元杂菌菌落无顿顽现象元气味有双抱蘑菇菌种特有的香味，元酸、臭、霉等异味4.3.3 微生物学指标应符合表2规定。4.3.4 菌丝生长速度:在适宜培养基上，在适温(24C:J:lOC)下菌丝长满瓶(袋)不超过45天。5 抽样5. 1 质检部门的抽样应具有代表性。5.2 母种按品种、培养条件、接种时间分批编号，原种、栽培种按菌种来源、和j种方法和接种时间分批编号。按批随机抽取被检样品。5.3 母种、原种、栽培种的抽样量分别为该批菌种量的10%、5%、1%。但每批抽样数量不得少于10支(
12、瓶、袋h超过100支(瓶、袋)的，可进行两级抽样。6 试验方法6. 1 感官检验按表5逐项进行。表5感言检验方法检验项目检验方法检验项目检验方法母种、原种肉眼观察容器肉眼观察接种量栽培种检查生产记录棉塞、无棉塑料盖肉眼观察菌丝生长量肉眼观察母种培养基灌入量肉眼观察菌种外观各项肉眼观察(杂菌菌落除外)母种斜面长度肉眼观察肉眼观察，必要时用杂菌菌落母种斜面正面外观各项肉眼观察5X放大镜观察培养基上表面距瓶肉眼观察(袋)口的距离气味鼻嗅4 GB 19171-2003 6.2 微生物学检验6.2. 1 表2中菌丝和杂菌用放大倍数不低于10X40的光学显微镜对培养物的水封片进行观察，每一检样应观察不少于
13、50个视野。6.2.2 细菌检验z取少量疑有细菌污染的培养物，按无菌操作接种于GB/T4789.28中4.8规定的营养肉汤培养液中，25C28C振荡培养1夭2天，观察培养液是否混浊。培养液混浊，为有细菌污染g培养液澄清，为无细菌污染。6.2.3霉菌检验取少量疑有霉菌污染的培养物，按无菌操作接种于PDA培养基(见附录A)中，25 C 28C培养3天4天，出现双抱蘑菇菌落以外的菌落，或有异味者为霉菌污染物，必要时进行水封片镜检。6.3 菌丝生长速度6. 3. 1 母种，PDA培养基，在24C士1C下培养，计算长满需天数。6.3.2 原种和栽培种2采用第B.l章或第B.2章规定的配方之一，在24C士
14、IC下培养，计算长满需天数。6.4 母种遗传和栽培性状6. 4. 1 菌丝体Est同工酶的板状聚丙烯酷胶凝胶电泳z取菌龄为15天20天的试管母种，刮取菌丝，按1 3 O. 5的比例混合菌丝(g)、0.1mol/L磷酸缓冲液(mL)和石英砂(g)，研磨成匀浆，台式离心机10 000 r/min离心5min，取上清液，按5 1 1的比例混合上清液、40%煎糖和0.01%澳盼蓝溶液作为电泳样品.4c下冷藏备用。采用聚丙烯酷胶凝胶电泳。用pH8.9Tris-HCl缓冲液配制9%分离胶，用pH8.3Tris甘氨酸作电极缓冲液。点样75L.3C下120V电泳20min后稳压200V , 4儿用固蓝RR盐6
15、0mg , O. 1 mol/L磷酸缓冲液(pH6.0)80 mL.-茶乙醋38mg和萨茶乙酣38mg溶于3mL丙酣配制的染色液，染色，显现酶谱，再根据特征带分型.6.4.2 栽培性状=使用附录B中B.2. 1培养基按表6各项观察记录。6.4.2.1 菌丝萌发、定植与生长能力2接种到附录B中B.2. 1培养基(含水量提高到68%)上，在适温(24 C土IC)下培养，肉眼观察菌丝萌发、定植与生长情况。6.4.2.2 结菇转潮能力z栽培试验，肉眼观察，计算覆土到出第一潮菇的时间。6.4.2.3 生物学效率=栽培试验，记录、统计产量，按GB/T12728-1991中2.1. 20规定计算。6.4.2
16、.4 栽培试验:将被检母种制成原种。采用附录B中B.2. 1的培养基配方(含水量提高到68%) 配制360kg培养基，接种后分三组(每组2m)进行常规管理，根据表6所列项目，做好栽培记录，统计检验结果。同时将该母种的出发菌株设为对照，亦做同样处理。对比二者的检验结果，以时间计的检验项目中，被检母种的任何一项时间较对照菌株推迟5天以上(含5天)者，为不合格p产量显著低于对照茵株者，为不合格s菇体外观形态与对照明显不同或畸形者，为不合格。袋6母种栽培中农艺性状和商品性状检验记录检验项目检验结果检验项目检验结果母种长满所需时间/天转潮间隔时间/天原种长满所需时间/天总产/kg栽培种长满所需时间/天平
17、均单产/kg菌种萌发所需时间/天平均单菇质量/g菌丝长满培养基所需时间/天生物学效率/(%)覆土至扭结所需时间/天菇形、质地、色泽覆土至采菇所需时间/天菇盖直径、厚度、柄长、柄粗直径)/mm5 GB 19171-2003 6.5 留样各级菌种都要留样备查，留样的数量应每个批号菌种(3-5)支(瓶、袋)，于4C-6C下贮存，母种5个月，原种4个月，栽培种2个月.7 幢幢规则判定规则按质量要求进行。检验项目全部符合质量要求时，为合格菌种，其中任何一项不符合要求，均为不合格菌种。8 标签、标志、包装、运输、贮存8. 1 标签、标志8. 1. 1 产晶标签每支(瓶、袋菌种必须贴有清晰注明以下要素的标签
18、2a) 产品名称(如z双抱蘑菇母种); b) 品种名称(如:As2796) ; c) 生产单位(Xx x菌种厂); d) 接种日期(如:2000. X X. X X ) ; e) 执行标准。8. 1. 2 包装标签每箱菌种必须贴有清晰注明以下要素的包装标签za) 产品名称、品种名称;b) 厂名、厂址、联系电话gc) 出厂日期;d 保质期、贮存条件，e) 数量;f) 执行标准。8. 1. 3 包装储运图示按GB/T191规定，应注明以下图示标志2a) 小心轻放标志;b) 防水、防潮、防冻标志$0 防晒、防高温标志，d) 防止倒置标志;e) 防止重压标志。8.2 包装8. 2. 1 母种外包装采用
19、术盒或有足够强度的纸材$IJ做的纸箱，内部用棉花、碎纸、报纸等具有缓冲作用的轻质材料填满。8.2.2 原种、栽培种外包装采用有足够强度的纸材制做的纸箱，菌种间用碎纸、报纸等具有缓冲作用的轻质材料填满。纸箱上部和底部用8cm宽的胶带封口，并用打包带捆扎两道，箱内附产品合格证书和使用说明(包括菌种种性、培养基配方及适用范围)。8.3 运输8. 3. 1 不得与有毒物品混装。8.3.2 气温达30C以上时，需用2C-20C的冷藏车运输。8.3.3 运输中必须有防震、防晒、防尘、防雨淋、防冻、防杂菌污染的措施。8.4 贮存GB 19171-2003 8. 4. 1 母种在5C土1C下贮存，贮存期不超过
20、90天.8.4.2 原种应尽快使用，10天内可在温度24C士1C、清洁、通风、干燥相对湿度50%75%)、避光的室内存放.一般在5C士1C下贮存，贮存期不超过40天.8.4.3 栽培种应尽快使用，在温度24C土1C、清洁、通风、干燥(相对湿度50%75%)、避光的室内存放谷粒种不超过10天，其余培养基的栽培种不超过20天.在5C士1C下可贮存90天。gON-hF-筒。附录(规范性附录)PDA培养基配方A GB 19171-2003 马铃薯200g(取用浸出液).葡萄糖20g.琼脂20g.水1000 mL.pH值自然.附录(规范性附聚常用原种和栽培种培弊基及其配方B 谷粒种培养基B. 1 谷粒98%.石膏粉2%.含水量50%:t:l % pH7. 58. O. 腐熟料种培养基B.2 B.2. 1 腐熟羹草种培养基腐熟麦轩或稻轩(干)77%.腐熟牛粪粉干)20%.石膏粉1%.碳酸钙2%.含水量62%土1%.pH7.5. B.2.2 庸熟棉籽壳种培养基腐熟棉籽壳(干)97%.石膏粉1%.碳酸钙2%.含水量55%士1%.pH7.5.侵极必究版权专有 书号，155066，1-19959 定价s10.00 )l; 49 2 拉J_
