1、道雪中华人民共和国国家标准GB 28301-2012 食品安全国家标准食品添加剂核黄素5-磷酸纳2012-04-25发布2012-06-25实施数码防伪中华人民共和国卫生部发布GB 28301-2012 食品安全国家标准食品添加剂核黄素5二磷酸纳1 范围本标准适用于以核黄素为原料，经磷酸化、中和、精制等步骤生产的食品添加剂核黄素5磷酸纳。2 分子式和相对分子质量2. 1 分子式CI7HzoN4Na09P.2HzO 2.2 相对分子质量514.36(按2007年国际相对原子质量)3 技术要求3. 1 感冒要求:应符合表1的规定。色泽状态项目橙黄色结晶性粉末3.2 理化指标:应符合表2的规定。项目
2、核黄素Cc17 H20 N, 06 )含量，/%要求比旋光度mC25.C ,D)/C). dm2 kg一1 pH 干燥减量，w/%主二灼烧残渣，四/%主二游离磷酸，w/%主二游离核黄素，w/%运二核黄素二磷酸盐，由/%飞一铅CPb)/ Cmg/kg) 主豆表1感官要求表2理化指标指标检验方法取适量样品置于清洁、干燥的自瓷盘中，在自然光线下，观察其色泽和状态检验方法73.0-79.。附录A中A.3+37.0-+42.。附录A中A.45.0-6.5 附录A中A.57.5 附录A中A.625.0 附录A中A.71. 0 附录A中A.86.0 附录A中A.96.0 附录A中A.92.0 GB 5009
3、. 12 1 GB 28301-2012 A.1 -般规定附录A检验方法本标准所用试剂和水，在没有注明其他要求时，均指分析纯试剂和GB/T6682-2008中规定的三级水。试验中所用标准滴定溶液、杂质测定用标准溶液、制剂及制品，在没有注明其他要求时，均按GB/T 601、GB/T602、GB/T603的规定制备。试验中所用溶液在未注明用何种溶剂配制时，均指水溶液。A.2 鉴别试验A.2.1 试剂和材料A. 2.1. 1 盐酸洛液:取盐酸1mL，用水稀释至3mL。A.2. 1. 2 氢氧化纳溶液:取氢氧化铀1g，加水溶解并稀释至25mL。A.2.2 鉴别方法称取约1.5 mg试样，加100mL水
4、溶解，此为试样液。试样液在透射光下显淡黄绿色，并有强烈的黄绿色荧光。取试样液25mL，加入0.5mL盐酸溶液，荧光消失;另取试样液25mL，加入0.1mL氢氧化铀溶液，荧光消失。A.3 核黄素(C17H20N406)含量的测定A.3.1 试剂和材料A. 3. 1. 1 冰乙酸。A. 3.1.2 乙酸铀溶液:14 g/Lo A. 3. 2 仪器和设备分光光度计。A. 3. 3 分析步骤避光操作。称取约100mg样品，精确至0.0001 g，置于500mL容量瓶中，加1mL冰乙酸和75 mL水。待样品溶解后，用水稀释至刻度，摇匀。精确量取10mL，置于100mL容量瓶中，加入7 mL乙酸铀榕液，用
5、水稀释至刻度，摇匀。以水作空白，用光程为1cm的比色杯，在444nm波长处测定样品溶液的吸光度。核黄素的吸光系数(El生)以328计。A. 3. 4 结果计算核黄素含量以核黄素的质量分数切。计，数值以%表示，按公式(A.1)计算z5OX A n/ wo=咱、x100% ( A.1 ) 2 GB 28301-2012 式中250一一稀释倍数;A一一样品溶液的吸光度值;m一样品质量的数值，单位为克(g); Wl 实测样品干燥减量的数值，%。实验结果以平行测定结果的算术平均值为准。在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值与算术平均值的比值不大于1.0%。A.4 比旋光度的测定A. 4.1 试剂
6、和材料盐酸溶液:取盐酸27.0mL，用水稀释、定容至50mLo A.4.2 仪器和设备旋光仪，精度土0.0100A.4.3 分析步骤避光操作。称取0.75g(以无水品计)样品，精确至0.0001g，置于50mL容量瓶中，加盐酸溶液溶解并稀释至刻度，在15min内、25.C土1.C条件下用旋光仪测定比旋光度。A.4.4 结果计算比旋光度m(25 .C ，D)数值以C) dm2 kg-l表示，按公式(A.2)计算:式中:一一测得的旋光角，单位为度C);m (25 .C ，D)二主lpa t 旋光管的长度，单位为分米(dm); pa一一样品溶液的浓度，单位为克每毫升(g/mL)。.( A.2 ) 实
7、验结果以平行测定结果的算术平均值为准。在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值与算术平均值的比值不大于1.0%。A.5 pH的测定A.5.1 仪器和设备酸度计，精度士0.010A.5.2 分析步骤称取1.0g样品，精确至0.0001g，置于200mL清洁干燥的烧杯中，加水100mL溶解，在20.C下用酸度计测定其pH.A. 5. 3 结果计算实验结果以平行测定结果的算术平均值为准。在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差3 GB 28301-2012 值与算术平均值的比值不大于1.0%。.6 干燥减量的测定. 6.1 仪器和设备恒温真空干燥箱。.6.2 分析步骤称取约2g样品，精确至
8、0.0001g，置于己干燥至恒重的称量瓶中，于100.C士1.C、0.01MPa下干燥5h，然后置于干燥器中冷却至室温，称重。.6.3 结果计算干燥减量以质量分数Wj计，数值以%表示，按公式(A.3)计算:式中:Wj=旦二旦旦x100% m3 mj 干燥前样品和称量瓶质量的数值，单位为克(g); m2一一干燥后样品和称量瓶质量的数值，单位为克(g);m3一一干燥前样品质量的数值，单位为克Cg)。.( A.3 ) 实验结果以平行测定结果的算术平均值为准。在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值与算术平均值的比值不大于1.0%。.7 灼烧残渣的测定. 7.1 仪器和设备高温炉。.7.2 分析
9、步骤称取约1g样品，精确至0.001g，置于已在600.C 7下灼烧至恒重的增塌中，缓缓加热至样品完全碳化。将碳化的样品冷却，用0.5mL的硫酸润湿残渣，继续加热至硫酸蒸汽逸尽，并在600 .C 700 .C的高温炉中灼烧至恒重。.7.3 结果计算灼烧残渣以质量分数W2计，数值以%表示，按公式CA.4)计算z式中zW2=生二旦旦x100% t6 m4一一残渣和空增塌质量的数值，单位为克Cg);ms一一空蜻塌质量的数值，单位为克Cg);m6 样品质量的数值，单位为克Cg)。C A.4 ) 实验结果以平行测定结果的算术平均值为准。在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值与算术平均值的比值不大
10、于1.0%。GB 28301-2012 A.8 游离磷酸的测定A. 8.1 试剂和材料A. 8. 1. 1 标准磷酸盐溶液:精确称取105.C干燥2h的磷酸二氢饵0.22g，置于1000 mL容量瓶中，加适量的水溶解，并稀释至刻度，摇匀，临用时再稀释5倍。A. 8. 1. 2 铝酸镀(NH4)6 M07 OZ4 4Hz OJ溶液:70g/L。A. 8. 1. 3 硫酸溶液:3. 75 mol/Lo A. 8. 1. 4 酸性锢酸镀溶液:将25mL铝酸接溶液用水稀释至200mL，然后缓缓加入25mL硫酸溶液，摇匀。A. 8. 1. 5 硫酸亚铁溶液:精确称取10.0g的硫酸亚铁，置于100mL容
11、量瓶中，加适量的水和2mL的硫酸溶液溶解，并稀释至刻度，摇匀。A.8.2 仪器和设备紫外可见分光光度计。A. 8. 3 分析步骤A. 8. 3.1 样品溶液的制备精确称取300.0mg样品(按元水品计)，置于100mL容量瓶中，加适量的水溶解，并稀释至刻度，摇匀。A. 8. 3. 2 测定精确量取标准磷酸盐溶掖和样品榕液各10.0mL，分别置于50mL的锥形瓶中，然后向各锥形瓶中加入10.0mL酸性铝酸盐摇撞和5mL硫酸亚铁搭液，提匀，以10.0mL水、10.0mL酸性铝酸盐溶液和5mL硫酸亚铁溶液组成的混合液为空白，用光程为1cm的比色杯，在700nm波长处测定各锥形瓶中榕液的吸光度。样品洛
12、液的吸光度不得大于标准溶液的吸光度。A.8.4 结果计算实验结果以平行测定结果的算术平均值为准。在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值与算术平均值的比值不大于l.5%。A.9 游离核黄素和核黄素二磷酸盐的测定A. 9.1 试剂和材料A. 9.1. 1 KHzP04溶液:O. 054 mol/L。A. 9. 1. 2 甲醇:色谱纯。A. 9. 1. 3 核黄素标准品:核黄素含量不低于99.0%(质量分数)。A. 9.1.4 核黄素5-磷酸铀标准品:核黄素含量不低于74.0%(质量分数)。A.9.2 仪器和设备高效液相色谱仪，配荧光检测器(激发波长440nm;发射波长470nm)。5 GB
13、 28301-2012 A.9.3 参考色谱条件A. 9. 3.1 色谱柱:C18柱，3.9mmX 300 mm，或其他等效的色谱柱。A. 9. 3. 2 流动相:按KH2P04溶被=甲醇=85: 15(体积比)配制，混合均匀后，用o.45m滤膜过滤，超声脱气后备用。A. 9. 3. 3 柱温:室温。A. 9. 3.4 流动相流速:2.0mL/min。A.9.3.5 进样量:100L。A.9.4 分析步骤A. 9. 4.1 系统适应性溶溜的制备溶解100mg核黄素5-磷酸铀标准品于水中，使其质量浓度为2.0mg/mL，加入等体积的流动相，混匀。吸取8mL，用流动相稀释至50mL，棍匀备用。A.
14、9.4.2 标准溶液的制备精确称取60.0mg核黄素标准品于250mL容量瓶中，小心加入1mL盐酸溶解，用水稀释至刻度，混匀。用移液管吸取4mL的核黄素溶液于100mL容量瓶中，用流动相稀释至刻度，混匀备用。A. 9. 4. 3 样品溶液的制备精确称取100.0mg样品于100mL容量瓶中，加50mL水溶解，用流动相稀释至刻度，混匀。用移液管吸取8mL溶液于50mL容量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀备用。A.9.4.4 系统适应性要求取适量系统适应性溶液注入色谱仪中进行色谱分析。核黄素4-单磷酸盐和核黄素5仁单磷酸盐之间的分离度应不低于1.0;核黄素5-单磷酸盐两次重复进样的相对标准偏差不大于
15、1.5%。核黄素5-单磷酸盐的保留时间约为20min 25 mino各组分的近似相对保留时间如表A.1所示。表A.1各组分的近似相对保留时间组分相对保留时间核黄素3，4_二磷酸盐0.23 核黄素3，5_二磷酸盐0.39 核黄素4，5_二磷酸盐0.58 核黄素3七单磷酸盐o. 70 核黄素4仁单磷酸盐0.87 核黄素5_单磷酸盐1. 00 核黄素1. 63 A.9.4.5 测定分别将等体积(约100L)的标准溶液、样品溶液和系统适应性溶液注入色谱仪中进行色谱分析，记录色谱图，分别测量标准溶液和样品溶液色谱图中的峰响应值。通过比对系统适应性溶液色谱图中色谱峰的保留时间，确定样品溶液色谱图中待测的峰
16、。A.9.5 结果计算GB 28301-2012 游离核黄素含量以游离核黄素的质量分数叫计，数值以%表示，按公式CA.5)计算:式中:625一一一样品的稀释倍数;W3=625 ws E s W , 标准溶液中核黄素浓度的数值，单位为毫克每毫升Cmg/mL); PF 样品溶液色谱图中核黄素的峰响应值;PS 标准溶液色谱图中核黄素的峰响应值。.C A.5 ) 核黄素二磷酸盐含量以核黄素二磷酸盐的质量分数叫计，数值以%表示，按公式CA.的计算:式中z625 样品的稀释倍数;叫=625X w , X手 s w , 标准溶液中核黄素浓度的数值，单位为毫克每毫升Cmg/mL); PS 标准溶液色谱图中核黄
17、素的峰响应值;PD一一样品溶液色谱图中三种核黄素二磷酸盐峰的总响应值。.C A.6 ) 实验结果以平行测定结果的算术平均值为准。在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值与算术平均值的比值不大于1.5%。7 NFON-0的N阁。国华人民共和国家标准食品安全国家标准中食品添加剂核黄素5-磷酸铀GB 28301-2012 * 中国标准出版社出版发行北京市朝阳区和平里西街甲2号(100013)北京市西城区三里河北街16号(100045)网址总编室:(010)64275323发行中心:(010)51780235读者服务部:(010)68523946中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷各地新华书店经销 印张0.75字数13千字2012年6月第一次印刷开本880X 1230 1/16 2012年6月第一版 书号:155066. 1-45178定价16.00元如有印装差错由本社发行中心调换版权专有侵权必究举报电话:(010)68510107GB 28301-2012 打印日期:2012年6月28E F002
