1、GB/T 17814 -1999 前兰fI=t 随着我国饲料工业的不断发展，抗氧化剂在饲料中的使用逐渐增加。考虑到抗氧化剂在饲料中用量的多少所带来的利弊，必须建立检测其含量的方法。我国食品中抗氧化剂BHA、BHT的检测已有国家标准。气相色谱法单项测定BHA、BHT或EQ的方法已有介绍。国外检测抗氧化剂的方法很多，主要是气相色谱和高压液相色谱法。但在我国目前还未见检测饲料中抗氧化剂的方法的报导，更没有制定国家标准。根据我国复核检验不同品种的国外进口抗氧化剂以及我国目前使用抗氧化剂的情况来看.主要是复合型抗氧化剂或复配使用。因此，建立能同时检测多组分复合型抗氧化剂的检测方法势在必行。鉴于此，特制定
2、本标准。本标准由全国饲料工业标准化技术委员会提出。本标准由国家饲料质量监督检验中心(北京)负责起草。本标准主要起草人:谢发明、宋荣、韩华琼、范理。12中华人民共和国国家标准饲料中丁基挂基苗香醋、二丁基是基甲苯和Z氧睡的测定GB/T 17814 1999 1 范围Determination of butyl bydroxy anisole .dibutyl hydroxy toluene and ethoxyquin in feeds 丰标准规定了饲料中抗氧化剂丁基经基茵香酷CBHA)、二丁基瓷基甲苯(BHT)和乙氧喳(EQ)测定方法的试剂、仪器、设备、操作方法和注意事项。丰标准适用于配合饲料、
3、鱼粉中抗氧化剂BHA、BHT、EQ的测定。2 引用标准F列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时，所示版本均为有坡。所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。GB/T 14699.1一1993饲料采样方法3 原理样品中BHA、BHT、EQ用正己烧提取，离心分离后(如遇干扰待测组分的样品，则需取上清液，用柱层析净化处理).取上清液用气相色谱、FID检测器检测，外标法定量。4试J除特殊注明外，本标准所用试剂均为分析纯，分析用水为蒸偏水(或离子交换水)。4. 1 正己烧。4. 2 丙醋。4. 3 二氯甲炕。4.4 二:氯甲烧丙翻(9+1)
4、混合液。4. 5 元水硫酸纳:500C烘4ho 4.6 氟罗里硅土:孔径177149m(80100目).550 C烘4h.存于干燥器中。4. 7 助滤剂Celite545 2045m。4.8 医用脱脂棉。4.9 BHA标准物g纯度98%。4.10 BHT标准物纯度98%。4.11 EQ标准物2纯度95%。4.12 BHA、BHT、EQ混合标准溶液z称取上述标准物各500.00mg(视其纯度.换算成100%再称样) 置于50mL棕色容量瓶中，以正己统溶解并定容。此液为10mg/mL。然后稀释成系列标准液:1. 00 mg/mL、0.50mg/mL、0.10mg/mL、0.05mg/mL、0.01
5、mg/mLo 国家质量技术监督局1999-08-10批准2000- 02-01实施211 5 仪器、设备5. 1 气相色谱仪带FID检测器。5. 2 氮气钢瓶氮气纯度为99.99%。5.3 氧气发生器氧气纯度为99.99 %。5.4 空气钢瓶一般压缩空气。5. 5 离心机，4000 r/min , 5.6 粉碎机:粉碎粒度达40目。5. 7 超声波处理机。5.8 微型混合器。5.9 分析夭平.感量O.000 1 g , 5.10 具塞刻度玻璃试管，10mL , 5. 11 铝制试管架。5.12 具活塞层析柱，15cmX向cm，GB/T 17814-1999 5. 13 旋转蒸发器:带抽真空装置
6、(或真空泵)。5. 14 浓缩烧瓶，150mL.带5mL刻度尾接管。6样品6. 1 按GB/T14699. 1取得样品。6. 2 配合饲料t以四分法缩分样品至约250g.粉碎，过孔径420m(40目)筛，混匀，装人密闭广口瓶中，避光低温保存备用。6.3 鱼粉:如为均匀粉状，可直接取样。7 测定步骤7.1 试样制备7. 1. 1 摄取按6.1或6.2称取样品2.000 g于10mL具塞刻度试管中，加入少许元水硫酸锅，再加5.0mL正己烧.加塞.在微型混合器上混合O.5min，将试管放到试管架上，连同试管架一起放入超声波处理槽内，槽内水位以刚好与试管中试样液位取齐或稍过，超声提取15min。取出.
7、将试管外水液擦去，放人离心机，以j000 r/min离心2min，取出试管。上清液为待测溶液。7.1 .2 净化7.1.2.1 如遇于扰待测组分的样品，须作如下柱层析净化处理首先按7.1. 1提取样品，只是提取液由5.0 mL iE己烧改为10.0mL正己烧。7.1.2.2 装柱2层析柱底先放少许脱脂棉，再加少许(约2g)元水硫酸锅，用正己烧调制氟罗里硅士适量(约4g.以装满柱为准).湿法填充于层析柱中，上端先加约5g助滤剂，再加约5g元水硫酸销，铺平。7.1 .2.3 t排洗z用移液管准确吸取7.1.2.1所得上清液5.0mL上柱。先以30mL正己烧淋洗，再以80 mL二氯甲烧丙酬(4.4)
8、混合液淋洗，速度以大约每分钟2mL为宜。用旋转蒸发器浓缩至约lmL.用正己烧定容至2.0mL.待测。7.2 测定分别取系列混合标准格液(4.12)1L进样，测得不同浓度BHA、BHT、EQ的峰面积(或峰高).以浓度为横坐标，峰面积(或峰高)为纵坐标，分别绘制工作曲线。同时取样品待测液1L进样，测得峰面积(或峰高)分别与工作曲线相比较定量，或按式(1)计算求得。7.3 计算G/T 17814一1999BHA、BHT、EQ的古量按式(1)分别计算:A, X m X V 3二=A X m X V , 式中:每干克样品中含某组分的质量，mg;A , 进样样液中BHA、BHT、EQ路面积(或峰高).v
9、s(或mm); m叶-BHA、BHT、EQ标准物进样的绝对量.ng;v 样品提取定容体积，mL;A，-一标准液的日HA、BHT、EQ峰面积(或峰高).V. s(或mm); m 称样量，g;V，一-样液的进样体积，L如样品用柱层析净化处理，则结果按式(2)计算A;，.:Xm=.:X_ V_ X _I 2 十二AS1 X m X Vj V 1 式中:V1 一样品提取液分取过柱体积，mL;Vz样液进样前定容体积，mLo其他符号同式(1)。7.4 气相色谱参考条件7.4.1 气相色谱仪，带FID检测器。色谱柱，HPl石英毛细管柱.25mX件。.32mm。载气:氮气，2.0 mL/min;尾吹气，30m
10、L/min;氧气，30mL/min;空气，350mL/min。隔垫吹扫，6mL/min. 分流比，20 1。检测器温度，240C。进样口温度，210C 柱温z见图1.7.4.2 气相色谱仪，带FID检测器。150 C llmin 图1程序升温图色谱柱，5%SE-30玻璃填充柱.2.5mX世3.5mmo 200 C 11min 气体流速z氯气，40mL/min;氢气，25mL/田lnj空气，250mL/min。进样口、检测器温度，230汇。柱温见图2. ( 1 ) . ( 2 ) 233 GB/T 17814-1999 200 ( 10mJ!l 25 C /min 170 ( lOmin 图2程
11、序升温图BHA、BHT、EQ气相色谱图(出峰顺序zBHA、BHT、EQl.见图3和图4，7,4. 3 的H4T伺机。-HHHO-V OHm-守oaH hFC Ndy的。口的U白白、，dmHMWH的将M陆F的ZDM dVHm 毛细管柱图4填充柱图3结果表述8 每个试样平行测定两次，以其算术平均值为结果。结果表示到小数点后一位。允许差9 相对相差:;15%。注意事项10 10. 1 本标准的特点之句，是以程序升温去除色谱图后面可能出现的杂质峰(避免干扰后续上饥样品的测定)。如色谱图中，前面各待测组分不受杂峰干扰，则尽可不必采用净化处理，避繁求简。但要常注意清I先进样器。10. 2 本标准也适合于维生素预混料、单组分抗氧化剂BHA、BHT、EQ的测定，而且可免除程序升温，节省时间r10.3 本标准检测全过程.尽可能避光(或不在强光下)操作，以减少损失。10. 4 如遇较难提取的试样.可于头天称样，加正己烧浸泡过夜，第二天再提取测定。216 GB/T 17814-1999 10. 5 如用柱层析净化时.定要注意氟罗里硅士的活性。550C烘4h能保持3天，3天后，用前需在130 C烘4h (特别是夏天湿度大时，更需注意h活性太强，EQ过柱洗脱不下来时，可加分析用水脱活(加氟罗里硅土重量的2%的水，摇匀，过夜平衡)。10.6 本标准以毛细管柱法为仲裁法。217
