1、G/T 17999.7-1999 前言血?青干饭凝集试验是监测鸡臼荆鸡伤寒抄门氏菌感染的常规方法，但是某些其他细菌感染后.也d出现定的阳性反应，这就有赖于细菌分离，作为最终结果判定，为此本标准规定了SPF鸡鸡白病IJ、门氏阂检验方法。SPF鸡微生物学质量投制国家系列标准，包括SPF鸡微生物学监测总则和9种SPF鸡微生物学检测f法。本标准为何PF鸡鸡自锅tJ、门氏菌检验。SPF鸡微生物学检测方法还包括以下部分GB/T 17999.1-1999 SPF鸡红细胞凝集抑制试验;GB/T 17999. 2 .-1999 SPF鸡血清中和试验;G日/T17999.3.1999 SPF鸡血清平板凝集试验，G
2、B/T 17999.4 .1999 SPF x鸟琼脂扩散试验;GB/T 17999. 5 -1999 SPF x鸟酶联免疫吸附试验;(;B/T 17999.6 -1999 SPF 鸡胚敏感试验;c; B/T 17999. 8-1999 SPF鸡试管凝集试验，GB/T 17999. 9 -1999 SPF 鸡间接免疫荧光试验。本标准，Ij中华人民共和国农业部、国家科学技术部提出。本标准由农业部畜牧兽医司归口。牛二标准起草单位:中国兽药监察所、农业部实验动物研究中心。本标准仨要起草人z张学琴、陈德威、赵立红。8月中华人民共和国国家标准SPF鸡鸡自嗣沙门氏菌检验G8/T 17999. 7 - 199
3、9 SPF chicken -Examination of Salmonella Pullorum 1 范围本标准规定了鸡臼躏沙门氏菌检验所用试剂、材料，检验程序及结果判定等。本标准适用于SPF鸡感染鸡臼病鸡伤寒沙门氏菌后的细菌分离和鉴定。2 原理取待检样品(肠内容物、有关脏器匀浆)接种于增菌培养基中进行增菌，然后将培养物转移到选择、鉴别培养基k培养，挑选可疑菌落接种于营养琼脂培养基上，取培养物进行生化试验与血清学试验，以确定鸡臼喇沙门氏菌与鸡tlp门氏商。3 51用标准下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时，所示版本均为有效。所有标准都会被修订，使用本标准
4、的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。GB/T 14926.1-1994 实验动物沙门氏菌检验方法GB 4789.4-1994 食品卫生微生物学检验沙门氏菌检验4 材料和试剂4. 1 营养肉汤培养基按GB4789.4执行。4.2 改良亚硝酸氢例增菌液(SF)按GB/T14926.1一1994中3.1的规定执行。4.3 DHL琼脂按GB4789. 4-1994中3.19的规定执行。4.4 SS琼脂按GB4789. 4-1994中3.21的规定执行。4.5 亚硫酸钻琼脂(BS)按GB4789.4一1994中3.18的规定执行。4.6 三糖铁培养基(TSI)按GB4789.4-.1994中3.2
5、4、3.25的规定执行。4.7 营养琼脂按GB4789.4一1994中3.7的规定执行。4.8 半团体琼脂按GB4789.4一1994中3.28的规定执行。4.9 糖发酵管按GB4789. 4-1994中2.2的规定执行。4.10 蛋白陈水按GB4789. 4一1994中2.13的规定执行。4. 11 硝酸盐培养基按GB4789. 4-1994中2.17的规定执行。4.12 氧化酶试剂按GB4789.4-1994中2.18的规定执行。4.13 氨基酸脱竣酶试验培养基按GB4789. 4-1994中2.21的规定执行。4. 14 尿素培养基按GB/T14926.1一1994中3.7. 1的规定执
6、行。4.15 革三氏染色法按GB4789.4-1994中1.2的规定执行。416 炒tl氏菌诊断血清。国家质量技术监督局1999-11-10批准2000 - 04 -01实施R7 5 检验程序检验程序见附L6 操作步骤G/T 17999. 7-1999 即;甚心包液、阳汁肝、脾岳10g15g组织生JJI!.样品ilil内时元培养基一1: 10 36T土1C，24h s._S，i妇也冉时t什离培养自肠、1曲5cm7cm皇军主主样品SF增商被= 1 ; 10 43(士1(. 18hZ4h 36-C士l(_:，24h48h 挑选出3个-5个可疑菌落，接同宁营养翩翩而培弄基36 C土C，24h悻片，革
7、兰民耻邑，镜憧相挂在琼抽生化试验报告因1沙门氏菌检验程序t!-( 1氏菌A-F群多你)国h青生化鉴别6. 1 采样元i的采取有病变的卵巢、输卵管、辜丸、心包H慧与心包液、胆汁、肝、脾以及小肠和盲肠。6.2 将m、牌、ijl1汁、心包膜、心包液、输卵管、宰九混合样品，放入灭菌乳钵或均浆器中研磨成匀浆，加入少悦营养肉汤稀释。取此匀浆10mL接种到100mL 5F增菌液中，另取匀浆10mL接种到100mL 背养肉汤培养基巾。采取的小肠与盲肠样品，按上述方法制成匀浆，取10mL接种到100mL 5F增菌液中。分别将背养肉汤培养瓶1进36(土IC培养24h，5F增菌液培养瓶置43C士1C培养18h24
8、ho 6, 3 分离烧养，用接种环取2培养物分别在55或B5和DHL琼脂平版培养基上划线接种，置36C 土1(培养24h48 h。如果经24h48 h培养后未发现可疑菌落，再取增菌培养物重复划线分离培养4次。6.4 挑选可疑商落:从每块平极培养基上挑选沙门氏菌疑是菌落3个5个，分别接种在营养琼脂斜阳上，i吁36(土lC培养24h，鸡自俐沙门氏菌与鸡沙门氏菌的典型菌落是生氏在DHL培养基上为黄褐色透明小菌落;生长在55琼脂平板上为无色半透明圆形小菌落e生长在B5琼脂平板上为黑色或黑绿色小树洛。6. 5 生化鉴定:取营养琼脂斜面培养物接种到下列培养基上。6. 5. 1 接种TS1，斜丽划线.底部穿
9、刺，贵36C土1C培养24h。其生化反应为斜面呈红色，底层变黄，千Eli:元气体，不产生硫化氢(H;sJ。6. 5. 2 核科1，卡化培养基，经培养后检验结果。发酵葡萄糖产酸或产气，不发酵乳糖和熊糖。触酶、赖氨阪脱贱酶、硝酸盐还原试验阳性。氧化酶、尿素酶、PI味试验阴性。6, 6 取衍养坊、脂斜面培养物，涂片作革兰氏染色，镜检可见革兰氏阴性杆菌，大小为O.3 p,m - O. 5m Xl ilm2.5 川，无芽于包，多单个散在，经接种半固体培养基检查无动力。6. 7 比用生化试验进一步区别鸡臼荆Y门氏菌与鸡沙门氏菌(鸡伤寒沙门氏商)(见表1)。拭8GB/T 17999.7-1999 表l鸡白喇沙门氏菌与鸡沙门氏菌的鉴别生化试验细菌葡萄糖卫矛醇麦芽糖鸟氨酸脱楼鸣白躏抄门氏商 十鸡沙IJ氏菌十十十注CB产酸产气;十严酸或阳性，阴性或不分解。7 结果报告符合t述各项实验结果，为鸡臼荆沙门氏菌或鸡沙门氏菌(鸡伤寒沙门氏菌)检出阳性.否则结果为阴性。H9
