1、GB/T 17999. 8- 1999 前言用血清平板凝集试验监测鸡臼荆沙门氏菌感染，结果难以判定时，可用试管凝集试验(TA)进行复检，为此本标准规定了SPF鸡试管凝集试验。SPF鸡微生物学质量控制国家系列标准，包括SPF鸡微生物学监测总则和9种SPF鸡微生物学检测l方法。本标准为(SPF鸡试管凝集试验。SPF鸡微生物学检测方法还包括以下部分:GB/T 17999.1-1999 SPF鸡红细胞凝集抑制试验;GB/T 17999. 2-1999 SPF鸡血清中和试验;GB/T 17999. 3-1999 SPF鸡血清平板凝集试验$GB/T 17999.4-1999 SPF鸡琼脂扩散试验;GB/T
2、 17999.5-1999 SPF鸡酶联免疫吸附试验;GB/T 17999.6-1999 SPF鸡胚敏感试验;GB/T 17999.7-1999 SPF鸡鸡臼荆沙门氏菌检验;GB/T 17999.9-1999 SPF鸡间接免疫荧光试验。本标准由中华人民共和国农业部、国家科学技术部提出。本标准由农业部畜牧兽医司归口。本标准起草单位:中国兽药监察所、农业部实验动物中心。本标准主要起草人:张学琴、陈德威、赵立红。90 中华人民共和国国家标准SPF鸡试管凝集试验G/T 17999.8-1999 SPf chick.n Tub. agglutination t.st 1 范围本标准规定了试管凝集试验所用
3、试剂、材料，操作程序及结果判定等。术标准适用于SPF鸡感染鸡自病沙门氏菌或鸡伤寒沙门氏菌后的抗体监视1.2 原理同血清平板凝集试验，亦是细菌性抗原与相应的抗体结合后，在适量电解质参与下，经过一段时间出现肉眼可见的凝集现象，只是结果判定以凝集价表示。3 试剂和材料3. 1 抗原:试管凝集试验用鸡白荆-鸡伤寒抗原(含菌10亿/mLl。3. 2 阳性、阴性血清。3. 3 被检血清。3. 4 0.5%石炭酸生理盐水炭酸5 g j 氯1七纳吕.5 g; 蒸馈水1 000 mL; 混合溶化，6.897 Pa 20 min消毒备用。3. 5 常规血清学试验用品。4 操作程序4. 1 每份被检血清需要5支小试
4、管(口径8mm10 mm)。第1管加石炭酸生理盐水1.8 mL，其余管各加1mLo 4. 2 第1管bo被检血清0.2mL，与石炭酸生理盐水i昆匀(使成1: 10稀释)。取1mL移至第2管，混匀后连续倍比稀释至第4管，最后从第4管内吸出1mL弃去。如此各管血清最后稀释依次为1: 20 , 1: 40 , 1: 80 , 1: 160,1: 320 , 4. 3 待管加入抗原液lmL4.4 振荡混匀后，瓷37C感作24h，观察结果。4. 5 每次试验须设三种对照各-份。4. 5. 1 抗原对照t在试管中加抗原液1mL，再加0.5%石炭酸生理盐水1mL。4.5.2 阳性血清对照阳性血清稀释至原来效
5、价，每管加入抗原被lmL4. 5. 3 阴性血清对照:操作方法同被检血清。4.5.4 全部试管振荡后，在37C24h后移入4C8C冰箱过夜，使结果更易判定。4.6 结果观察国家质量技术监督局1999-11-10批准20-04 -01实施91 GB/T 17999.8-1999 4.6.1 从4C8.C冰箱取出试管架，暂不振动试管。4.6.2 轻轻取出每支试管，先观察试管内上清液和管底凝集物，再轻振管底，使凝块从管底升起，最后按液体清浊、凝块大小记录。4.6.3 观察结果时应首先观察抗原对照与阴性血清对照.均应呈-(即不凝集)，阳性血清对照呈不同程度凝集，表明试验可靠。4.6.4 凝集结果判定见表1。表1试管凝集结果判定类别试管所见1 细菌全部形成凝块，上层液完全透明2 大部分细菌形成凝块，上层液透明度达75%3 约50%细菌形成明显可见凝集块，上层液透明度达50%4 仅有少部分细菌形成小凝块，上层液透明度达25%无凝集块，液体均匀混浊(有部分菌体因静置而沉于管底，轻轻摇后细5 菌如云烟状升起，但很快消失)4.6.5 效价以呈现+凝集试管的血清最高稀释倍数作为该血清的凝集效价。5 结果判定凝集价二三1: 80为阳性:凝集价为1: 40为可疑;凝集价l: 20为阴性。92 结果+十十十+ 十+
