1、ICs 67050X 04 囝雷中华人民共和国国家标准GBT 23377-20092009-04-08发布食品中脱氢乙酸的测定高效液相色谱法Determination of dehydroacetic acid in foodHigh performance liquid chromatography2009-05-0 1实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局磐士中国国家标准化管理委员会厦仲刖 置GBT 23377-2009本标准的附录A为资料性附录。本标准由青岛市质量技术监督局提出。本标准由中国标准化研究院归口。本标准主要起草单位：青岛市产品质量监督检验所、国家食品质量安全监督检验中心。
2、本标准主要起草人：杨红梅、张辉珍、李惠颖、王晓滨、刘艳琴、王浩、李昭勇、谭燕、闫龙宝。食品中脱氢乙酸的测定高效液相色谱法GBT 23377-20091范围本标准规定了黄油、酱菜、发酵豆制品、面包、糕点、焙烤食品馅料、复合调味料、果蔬汁中脱氢乙酸含量的高效液相色谱测定方法。本标准适用于黄油、酱菜、发酵豆制品、面包、糕点、焙烤食品馅料、复合调味料、果蔬汁中脱氢乙酸含量的测定，其他食品可参照执行。本标准定量限为5 mgkg。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成
3、协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GBT 6682分析实验室用水规格和试验方法(GBT 6682 2008，ISO 3696：1987，MOD)3原理用氢氧化钠溶液提取试样中的脱氢乙酸，经脱脂、去蛋白处理后，用高效液相色谱紫外检测器测定外标法定量。4试剂和材料除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为GBT 6682规定的一级水。41甲醇：色谱纯。42正己烷。43乙酸铵：优级纯。44甲酸溶液：10。取10mL甲酸，加水90mL，混匀。45乙酸铵溶液：002 molL。称取154 g乙酸铵，用水溶解并定容至1 L。46氢氧化钠溶液：20 gL
4、。称取200 g氢氧化钠，用水溶解并定容至1 L。47硫酸锌溶液：120 gL。称取1200 g七水硫酸锌，用水溶解并定容至1 L。48甲醇溶液：70。取70mL甲醇(41)，加30mL水，混匀。49脱氢乙酸标准样品：纯度98。410脱氢乙酸标准储备液：1 000mgL。准确称取100mg脱氢乙酸标准样品，用10mL 20 gL的氢氧化钠溶液溶解，用水定容至100 mL，配成1 000 mgL的标准储备液，4保存，可使用3个月。41 1脱氢乙酸标准工作液：分别吸取01 mL、10 mL、50 mL、100 mL、200 mL的脱氢乙酸储备液，用水稀释至100 mL，得到浓度为10 mgL、10
5、0 mgL、500 mgL、1000 mgL、2000 mgL的标准工作液，4保存，可使用1个月。5仪器和设备51高效液相色谱仪：配有紫外检测器或二极管阵列检测器。1GBT 23377-200952535455565758不锈钢高速均质器。粉碎机。分析天平：感量0000 1 g和感量001 g。超声波发生器：功率大于180 W。涡旋混合器。离心机。C。固相萃取柱：500 mg，6 mL(使用前用5 mL的甲醇、10 mL水活化，使柱子保持湿润状态)。6分析步骤61试样的制备与提取611果蔬汁：准确称取2 g5 g试样，精确至001 g。置于50mL容量瓶中，加入约10mL水，用氢氧化钠溶液(4
6、6)调pH值至78，加水稀释至刻度，摇匀，置于离心管中，4 000 rrain离心10rain。取20 mL上清液用10的甲酸(44)调pH值至46，定容到25 mL。取5 mL过已经活化的固相萃取柱，用5 mL水淋洗，用2 mL 70的甲醇溶液(48)洗脱，收集洗脱液，过045 pm滤膜，供高效液相色谱测定。612酱菜、发酵豆制品：样品用不锈钢高速均质器均质。准确称取2 g5 g均匀试样，精确至001 g。置于25 mL容量瓶中，加入约10 mL水、5 mL硫酸锌溶液(47)，用氢氧化钠溶液(46)调pH值至78，加水定容至刻度，超声提取10 rain。取适量置于lo mL离心管中，4 00
7、0 rmn离心10 rain，取上清液过045 pm滤膜，供高效液相色谱测定。613黄油、面包、糕点、焙烤食品馅料、复合调味料：样品用粉碎机磨碎或不锈钢高速均质器均质。准确称取2 g5 g均匀试样，精确至001 g，置于25 mL容量瓶(如需过固相萃取柱则用50 mL容量瓶)中，加入约10 mL水、5 mL硫酸锌溶液(47)，用氢氧化钠溶液(46)调pH值至78，加水定容至刻度，超声提取10 rain，转移到分液漏斗中，加入10 mL正己烷，振摇1 rain，静置分层，弃去正己烷层，再加入10 mL正己烷重复进行一次，取下层水相置于离心管中，4 000 rrain离心10 rain。取上清液过
8、045 pm滤膜，供高效液相色谱测定。若高效液相色谱分离效果不理想时，可取20 mL上清液，用10的甲酸(44)调pH值至46，定容到25 mL，取5 mL过已经活化的固相萃取柱，用5 mL水淋洗，用2 mL 70的甲醇溶液(48)洗脱，收集洗脱液，过045 pm滤膜，供高效液相色谱测定。62高效液相色谱参考条件a)色谱柱：C。8柱，5 pm，250 minx46 mm(内径)或相当者；b)流动相：甲醇+002molL乙酸铵(10+90，体积比)；c)流速：10 mLmin；d)柱温：30；e)进样量：10 pL；f)检测波长：293 nm。63定性分析依据保留时间一致性进行定性识别的方法，根
9、据脱氢乙酸标准样品的保留时间，确定样品中脱氢乙酸的色谱峰(参见附录A)。必要时应采用其他方法进一步定性确证。64定量测定以脱氢乙酸标准工作溶液浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准工作曲线，用标准工作曲线对试样进行定量，标准工作溶液和试样溶液中脱氢乙酸的响应值均应在仪器检测线性范围内。在上述色谱条件下，脱氢乙酸标准样品色谱图参见附录A。65空白试验除不加试样外，空白试验应与样品测定平行进行，并采用相同的分析步骤，取相同量的所有试剂。266平行试验按以上步骤，对同一试样进行平行试验测定。67回收率试验样品中添加标准溶液，按步骤6166操作，测定后计算样品的添加回收率。GBT 23377-200
10、97结果计算样品中脱氢乙酸的含量按式(1)计算： X一(c，-Co)VIO3Xf(1)m式中：x样品中脱氢乙酸的含量，单位为克每千克(gkg)；“由标准曲线查得试样溶液中脱氢乙酸的浓度，单位为毫克每升(ragL)；“由标准睦线查得空白试样溶液中脱氢乙酸的浓度，单位为毫克每升(ragL)；v试样溶液总体积，单位为毫升(mL)；，过固相萃取柱换算系数(，一o5)；m样品的质量，单位为克(g)。计算结果保留至小数点后3位。8回收率在添加浓度5mgkgl 000mgkg范围内，回收率在80110之间，相对标准偏差小于lO。9允许差在重复性条件下，获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10。GBT 23377-20094波长一293 rLr|l=笈长一2m附录A(资辩性附录)脱氢乙酸液相色谱图图A1 脱氢乙酸标准样品的液相色谱图图A2空白样品的液相色谱图嚣竺n1一M肋蚰加。波长=293IlInGBT 23377-2009图A3空白样品中添加脱氢乙酸的液相色谱图帅蚰舯加。
