1、ICS 67050X 40 a目中华人民共和国国家标准GBT 23378-2009食品中纽甜的测定方法Cj同 效液相色谱法Method for the determination of neotame in foodsHighperformance liquid chromatography2009-04-08发布 2009-05-0 1实施丰瞀髁鬻瓣警糌瞥星发布中国国家标准化管理委员会仅19刖 再GBT 23378-2009本标准的附录A为资料性附录。本标准由全国食品安全应急标准化工作组提出并归口。本标准主要起草单位：国家食品质量监督检验中心(上海)、上海市质量监督检验技术研究院。本标准主要
2、起草人：曹程明、印杰、李俊、葛宇。食品中纽甜的测定方法高效液相色谱法1范围本标准规定了用高效液相色谱法测定食品中纽甜含量的方法。本标准适用于食品中纽甜的测定。2规范性引用文件GBT 23378-2009下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GBT 6682分析实验室用水规格和试验方法(GBT 6682 2008，ISO 3696：1987，MOD)3原理试样经缓冲液提取，固相萃取柱
3、净化后，用高效液相色谱检测，外标法定量。4试剂与材料除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为GBT 6682规定的一级水。41乙腈：色谱纯。42辛烷磺酸钠：色谱纯。43磷酸。44甲酸：色谱纯。45甲醇：色谱纯。46纽甜标准品：纯度990。47混合提取液：分别吸取08mL甲酸和25mL三乙胺，加水定容至1 000mL，pH值约45。48离子对试剂缓冲液：称取200 g辛烷磺酸钠，用适量水溶解，加入10 mL磷酸，加水定容至1 000mL。49 C，8固相萃取柱：6 mL，500 mg，Supelclean“LC-18，或相当者，使用前依次用5 mL甲醇、10 mL水活化。410标准储备液：准确称取
4、0100 0 g纽甜标准品，加混合提取液溶解定容至l 00 mL，此溶液纽甜含量为100 mgmL。4”标准使用液：吸取纽甜标准储备液1_0mL于100mL容量瓶中，加混合提取液定容至刻度，此溶液纽甜含量为100 pgmL。412微孔滤膜：045 pm，有机相。5仪器和设备51高效液相色谱(HPLC)仪：配有紫外检测器或二极管阵列检测器。52超声波清洗仪。53涡旋混合器。lGBT 23378-200954分析天平：感量为0000 I g和001 g。55固相萃取装置。56氮吹仪。57离心机：转速不低于4 000 rmin。6样品处理61样品提取611固态样品称取10 g(精确到001 g)均匀
5、试样于50mL具塞塑料离心管中，加入30mL混合提取液(47)，涡旋振荡10 rain，超声30 rain后，用混合提取液定容至刻度，若溶液混浊，以不低于4 000 rrain离心10 rain后，过滤待用。612液态样品准确量取100 mL试样于50 mL具塞塑料离心管中，加入30 mL混合提取液(47)，振荡混匀。超声15 rain后，用混合提取液定容至刻度，若溶液混浊，以不低于4 000 rmin离心10 min后，过滤待用。注：含气样品如碳酸饮料、汽水等先微温，搅拌去除试样中的二氧化碳或超声脱气后，再准确量取试样。62样品净化吸取100 mL的过滤液以1 mLmin2 mLmin的流速
6、通过固相萃取柱(49)，待滤液完全流出后，用5 mL的混合提取液以1 mLmin2 mLmin的流速淋洗萃取柱，弃去全部流出液，用5 mL甲醇以l mLmin的流速洗脱，洗脱液在40水浴中用氮吹仪浓缩定容至20 mL，经045 pm滤膜过滤后作为待测液供HPLC分析。7高效液相色谱测定71 HPLC参考条件a) 色谱柱：zORBAx SB C18，250 ram46 ram(内径)，5肛m或相当型号色谱柱。b)柱温：30。c)检测波长：218 llm。d)流动相：溶剂A乙腈+溶剂B离子对试剂缓冲液(48)。e)流速：10 mLmin。f)进样量：500 pL。g)梯度洗脱条件见表1。表1参考流
7、动相配比时间min 溶剂A 溶剂Booo 25o 75o8oo 25o 75o20oo 35o 65o22oo 100o oo24oo 100o oo2401 25o 75o35oo 25o 75o72测定分别取纽甜标准工作液和待测液100 pL注入高效液相色谱仪进行测定。2GBT 23378-200973结果计算样品中纽甜的含量(x)以毫克每千克(mgkg)或毫克每升(mgL)表示，按式(1)计算x一石A2 X cXK黢揣式中：x样品中纽甜含量，单位为毫克每千克或毫克每升(mgkg或mgL)；A。样品峰面积；At标样峰面积；c纽甜标样浓度，单位为微克每毫升(pgmL)；K样品稀释倍数；V样品洗脱液浓缩定容体积，单位为毫升(mL)；7样品质量，单位为克(g)。计算结果保留两位有效数字。8方法定量检出限本标准的方法定量检出限为：02 mgkg。9允许差在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10。GBT 23378-2009附录A(资料性附录)纽甜标样图谱Lp、 丛图A1 纽甜标样图谱(100 IlgmL)
