1、ICS 67050C 53 囝园中华人民共和国国家标准GBT 23382-2009食品中丙酸钠、丙酸钙的测定高效液相色谱法Determination of sodium propionate and calcium propionate in foodsHigh performance liquid chromatography method2009-04-08发布 20090501实施宰瞀鹊紫瓣訾麟瞥星发布中国国家标准化管理委员会“1”刖 肓GBT 23382-2009本标准的附录A为资料性附录。本标准由中国标准化研究院提出并归口。本标准由国家农副加工产品及白酒质量监督检验中心(山西省食品质
2、量监督检验中心)负责起草。本标准主要起草人：梁宝爱、刘军、张素娟、冯晓斌、武向勇、赵娅鸿、孙丽萍、胡晓江、刘宪萍。1范围食品中丙酸钠、丙酸钙的测定高效液相色谱法GBT 23382-2009本标准规定了食品中丙酸钠、丙酸钙高效液相色谱的测定方法。本标准适用于豆类制品、生湿面制品、面包、糕点、醋、酱油等食品中丙酸钠、丙酸钙的含量测定。本标准的方法检出限：003 gkg，方法定量限：o10 gkg。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这
3、些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GBT 6682-2008分析实验室用水规格和试验方法(ISO 3696：1987，MOD)3原理样品中丙酸钠(钙)酸化后转化为丙酸，经超声波水浴提取或水蒸气蒸馏，收集后调pH值，经高效液相色谱测定，外标法定量。4试剂与材料除另有规定外，试剂均为分析纯。41色谱用水应符合GBT 6682-2008规定的一级水，其他用水符合GBT 6682-2008规定的三级水。42磷酸。43磷酸氢二铵。44硅油。45磷酸溶液(1 molL)：在50 mL中加入535 mL磷酸，混匀后，加水定容至1 000 mL。46磷酸氢二铵溶液(15 gL)
4、：称取磷酸氢二铵15 g，加水溶解定容至1 000 mL。47丙酸钠(钙)或丙酸标准品：纯度99。48标准储备液(10mgmL)：准确称取丙酸钠130 g或丙酸钙126 g或丙酸1 g(精确至00001 g)用水定容至100 mL，配制成丙酸含量为10 mgmL的标准储备液。于4冰箱内贮存，有效期3个月。49微孔滤膜：045 pm，水相。410 pH试纸。5仪器和设备51高效液相色谱(HPLC)仪：配有紫外检测器或二极管阵列检测器。52天平：感量0000 1 g和001 g。53超声波水浴。54离心机：转速不低于4 000 rrain。55组织捣碎机。1GBT 23382-200956具塞塑料
5、离心管：50 mL。57水蒸气蒸馏装置：500 mL。58 pH计。6分析步骤61样品制备固体样品经组织捣碎机捣碎混匀后备用；液体样品摇匀后备用。62试样处理621蒸馏法：准确称取25 g(精确至001 g)试样(61)，置于500 mL蒸馏瓶中，加人100 mL水，再用50 mL水冲洗容器，转移到蒸馏瓶中，加1 molL磷酸溶液(45)20 mL，2滴3滴硅油，进行水蒸气蒸馏，将250 mL容量瓶置于冰浴中作为吸收液装置，待蒸馏至约240 mL时取出，在室温下放置30 min，用1 molL磷酸溶液(45)调pH值至3左右，加水定容至刻度，摇匀，经045 pm微孔滤膜过滤后，待液相色谱测定。
6、622直接浸提法(适用于面包、糕点)：准确称取5 g(精确至001 g)试样(61)至i00 mL烧杯中，加水20 mL，加入1 moiL磷酸溶液(45)05 mL，混匀，经超声浸提10 rain后，用1 molL磷酸溶液(45)调pH值至3左右，转移试样至50 mL容量瓶中，用水定容至刻度，摇匀。将试样全部转移至50mL具塞塑料离心管中，以不低于4 000 rmin离心10rain，取上清液，经045 pm微孔滤膜过滤后，待液相色谱测定。63测定631高效液相色谱条件a)色谱柱：C18柱，46 mm250 mm，5 pm或等效色谱柱。b)流动相：15 gL磷酸氢二铵溶液(46)，用1 mol
7、L磷酸溶液(45)调pH值至2735(使用时配制)；经045 pm微孔滤膜过滤。c)流速：10 mLmin。d)柱温：25。e)进样量：20“L。f) 波长：214 nm。g)色谱柱清洗参考条件：实验结束后，用lo甲醇清洗1 h，再用100甲醇清洗1 h。632标准曲线绘制6321蒸馏法：准确吸取标准储备液(48)05、10、25、50、75、100、125 mL置于500 mL蒸馏瓶中，其他操作同621样品前处理，其丙酸标准溶液的最终浓度分别为002、004、01、02、03、04、05 mgmL，经045Lm微孔滤膜过滤，浓度由低到高进样，以浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。6
8、322直接浸提法：准确吸取50mL标准储备液(48)于50mL容量瓶中，用水稀释至刻度，配制成浓度为10 mgmL标准工作液。再准确吸取标准工作液025、05、10、20、30、40、50 mL至10 mL容量瓶中，分别加入1 molL磷酸溶液(45)02 mL，用水定容至10 mL，混匀。其丙酸标准溶液的最终浓度分别为0025、005、01、02、03、04、05 mgmL，经045 pm微孔滤膜过滤，浓度由低到高进样，以浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。在上述色谱条件下，根据保留时间定性，外标峰面积法定量。高效液相色谱图参见图A1。633定量测定待测样液中丙酸响应值应在标准曲线
9、线性范围内，超出浓度线性范围则应稀释后再进样分析。64结果计算样品中丙酸钠(钙)含量(以丙酸计)按式(1)进行计算。GBT 23382-2009x一每并等， (1)“一五万i丽r“J “式中：x样品中丙酸钠(钙)含量(以丙酸计)，单位为克每千克(gkg)；如以丙酸钠计乘以1296 7，以丙酸钙计乘以1256 9；c由标准曲线得出的样液中丙酸的浓度，单位为毫克每毫升(mgmL)；y样液最后定容体积，单位为毫升(mL)；m样品质量，单位为克(g)；，稀释倍数。计算结果保留三位有效数字。7允许差在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10。8回收率蒸馏法：在添加浓度025 gkg50 gkg范围内，回收率在90o110o之间，相对标准偏差小于5。直接浸提法：在添加浓度025 gkg50 gkg范围内，回收率在800ii00之间，相对标准偏差小于5。GBT 23382-2009mAu108642O波长=214 nm附录A(资料性附录)丙酸标准物质的液相色谱图O图A1 丙酸标准物质的液相色谱图
