1、a雷中华人民共和国国家标准GBT 23533-2009固定化葡萄糖异构酶制剂2009-04-27发布Immobilized glucose isomerase preparations20091101实施宰瞀徽紫瓣訾糌瞥霎发布中国国家标准化管理委员会促111刖 罱本标准的附录A为资料性附录。本标准由中国轻工业联合会提出。本标准由全国食品工业标准化技术委员会工业发酵分技术委员会归口。本标准起草单位：中国食品发酵工业研究院、诺维信(中国)生物技术有限公司。本标准主要起草人：张蔚、滕智津、郭新光、唐辰、翟文景。GBT 23533-2009固定化葡萄糖异构酶制剂GBT 23533-20091范围本标准
2、规定了固定化葡萄糖异构酶制剂的术语和定义、要求、试验方法、检验规则和标志、包装、运输、贮存及保质期。本标准适用于经淀粉质(或糖质)为原料，经微生物发酵、提纯、固定化制得的固定化葡萄糖异构酶制剂产品的生产、检验和销售。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GBT 191包装储运图示标志(GBT 1912008，ISO 780：1997，MOD)3术语和定义下列术语和定
3、义适用于本标准。31葡萄糖异构酶glucose isomerase能将n葡萄糖转化为肛果糖的酶。32固定化葡萄糖异构酶immobilized glucose isomerase经载体固定化而成的葡萄糖异构酶。33葡萄糖异构酶活力activity of glUCOSe isomerase葡萄糖异构酶活力以葡萄糖异构酶活力单位表示，定义为1 g固体化葡萄糖异构酶，在本标准规定的反应条件下，1 h转化产生1 mg果糖，即为1个酶活力单位，以ug表示。34生产能力productivity在适宜的工作条件下，酶活力降至原活力的10的过程中，1 kg固定化酶能转化绝干葡萄糖为绝干果葡糖的量。4要求41外观
4、不结块，无异味。42固定化载体所使用的固定化载体需符合相关标准要求。43理化要求应符合表1的规定。】GBT 23533-2009表1 固定化葡萄糖异构酶制剂的理化要求项 目 要 求酶活力(ug) 2 000生产能力(tkg) 5强度 合格干燥失重 8oa可按供需双方合同规定的酶话力规格执行。44卫生要求应符合国家有关规定。5试验方法除非另有说明，在分析中仅使用分析纯试剂和蒸馏水或去离子水或相当纯度的水。51外观称取样品10 g(或10 mL)，观察、嗅闻作出判断，做好记录。52酶活力521适用于链霉菌(Streptomyces sp)生产的葡萄糖异构酶制剂5211溶液和试剂52111葡萄糖溶液
5、(700 gL)称取70 g葡萄糖加入沸水中，使其完全溶解，冷却后用蒸馏水定容至100 mL。52112磷酸缓冲溶液(pH=75)分别称取磷酸二氢钠196 g和十二水磷酸氢二钠3962 g，用水溶解并定容到500 mL。如需要，调节溶液的pH到75土005。52113硫酸镁溶液(61 gL)称取123 g七水合硫酸镁(MgSO。7H：O)，加水溶解并定容至100 mL。52114高氯酸溶液(210 mLL)量取市售的高氯酸试剂21 mL，用水定容至500 mL。5212分析步骤称取适量固定化酶完整颗粒，用1 mL磷酸缓冲溶液(52112)于37浸泡16 h后，加15mL磷酸缓冲溶液，05mL硫
6、酸镁溶液(52113)和I5mL葡萄糖溶液(52111)，再加水调整至总体积5 mL，于70反应1 h。加5 mL高氯酸溶液(52114)终止反应，测定果糖含量。522适用于游动放线菌(Actinoplanes sp)生产的葡萄糖异构酶制剂5221溶液和试剂52211葡萄糖溶液(540 gL)称取540 g无水葡萄糖加入沸水中，使其完全溶解，冷却后用蒸馏水定容至100 mL；52212磷酸缓冲溶液(pH=70)分别称取磷酸氢二钠1236 g和十二水合磷酸二氢钠410 g，加水溶解并定容至1 L。如需要，调节溶液的pH到70土005。52213硫酸镁溶液(366 gL)称取0739 g七水合硫酸
7、镁(MgSOt7H。O)，加水溶解并定容至100 mL。52214硫酸钻溶液(046 gL)称取O084 3 g七水合硫酸钻(CoSq7H20)，加水溶解并定容至100 mL。2GBT 23533-20095222分析步骤称取适量固定化酶完整颗粒，用1 mL磷酸缓冲溶液(52212)于37浸泡16 h后，加05 mL磷酸缓冲溶液，05 mL硫酸镁溶液(5221-3)，05 mL硫酸钴溶液(52214)和25 mL葡萄糖溶液(52211)，再加水调整至总体积5 mI，于75反应1 h。加5 mL高氯酸溶液(52114)终止反应，测定果糖含量。523果糖的测定5231溶液和试剂52311半胱氨酸盐
8、酸盐溶液(15 gL)称取生化试剂半胱氨酸盐酸盐0375 g，用水溶解定容至25 mL。52312咔唑酒精溶液(12 gL)称取咔唑300 mg，用无水酒精溶解定容至25 mL，放置在棕色瓶中，24 h后使用。52313硫酸溶液取市售浓硫酸450 mL，在不断搅拌下徐徐倒入190 mL水中。52314标准果糖溶液称取55真空干燥至恒重的果糖1250 mg，精确至0000 1 g，用水定容至25 mL(即5 mgmL)，存放于冰箱备用。使用时稀释100倍(即50 p-gmL)。5232分析步骤52321绘制标准曲线取25mL比色管分别加入50tgmL果糖标准溶液0mL、02mL、04mL、06m
9、L和08mL，分别用蒸馏水补充至1 mL后，于每管中加入02 mL半胱氨酸盐酸盐溶液(52311)、6 mL硫酸溶液(52313)，摇匀后，立即加入02mL咔唑酒精溶液(52312)，摇匀，于60水浴中保温10min，取出，用水冷却，用10 mm比色皿于560 D,m波长下比色，以吸光度对果糖作图，即得标准曲线。52322样品测定将5212或5222的反应终止液适当稀释后(使果糖含量在20 pgmL30tgmL范围内)，准确吸取10mL于25mL比色管，加入02mL半胱氨酸盐酸盐溶液、6mL硫酸溶液，摇匀后，立即加入02 mL咔唑酒精溶液，摇匀，于60水浴中保温10 min，取出，用水冷却，用
10、10 mm比色皿于560 nm波长下比色，记录吸光度后，在标准曲线图上查得相应的果糖含量。524计算5241 酶反应液产生果糖含量的计算酶反应液产生果糖的含量按式(1)计算：X1一研，nl 000 (1)式中：x，酶反应液产生果糖的质量，单位为克(g)；帆吸光度在标准曲线上查得的果糖质量，单位为微克(pg)；n稀释倍数；1 ooo质量换算系数。结果保留至整数位。5242样品酶活力的计算样品的酶活力按式(2)计算：x。；旦m2GBT 23533-2009式中：x：样品的酶活力，ug；U酶活力单位，U；m。样品质量，单位为克(g)。525精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值应不超过
11、算术平均值的2。53生产能力生产能力按式(3)计算： 耻蒜式中：x。生产能力，单位为吨每千克(tkg)；s转化糖量的总和，单位为千克(kg)；m，转化时所用固定化酶的量，单位为千克(kg)。果葡糖中果糖含量按42(质量分数)计。54强度固定化酶用60蒸馏水浸没，缓慢搅动20 h，用两个手指用力挤压，放开后不成浆(或极少量成浆)仍硬，为合格。否则为不合格。55干燥失重551仪器5511电热干燥箱。5512分析天平：精度为0000 1 g。5513称量瓶：50 mm30 mm。552分析步骤用烘干至恒重的称量瓶称取酶样约2 g，精确至士o000 2 g，置于103土2电热干燥箱中将盖取下，侧放在称
12、量瓶旁，烘干2 h，取出，加盖，放人干燥器中冷却至室温，称量。553计算干燥失重按照式(4)计算rX4：ms-m6100m5一优式中：x。样品的干燥失重，；m。干燥前称量瓶加样品的质量，单位为克(g)；m。干燥后称量瓶加样品的质量，单位为克(g)；m。称量瓶的质量，单位为克(g)。所得结果表示至一位小数。6检验规则61批次的确定由生产单位按照其相应的规则负责确定产品的批号，批内产品的品质应均一。62取样规则和样本621取样应均匀分布在整个灌装过程中，或均匀分布于灌装后的成品中。622取样时应采用适宜的方法保证取样具有代表性，保证取样部位和取样瓶的清洁。对用于微生物4GBT 23533-2009
13、检验的取样，应使用无菌操作。623成品抽样的样本量见表2。取样的样本量可按照估计的批量参照表2执行，或由生产企业和(或)相关方确定。批取样量不得少于300 mL(或300 g)，不足者应按比例适当加取。表2成品抽样的样本量批量桶或箱 样本量桶或袋500 4注：批量是指批中所包含的单位商品数，单位为桶或箱。样本量是指样本中所包含的样本单位数，单位为桶或袋。63检验分类631出厂检验6311产品出厂前，应由生产厂的质量监督检验部门按本标准规定逐批进行检验，检验合格，并附上质量合格证明的，方可出厂。6312检验项目：外观、酶活力、干燥失重和菌落总数。632型式检验6321检验项目：本标准中全部要求项
14、目。6322一般情况下，同一类产品的型式检验每年至少进行一次，有下列情况之一者，亦应进行：a) 原辅材料有较大变化时；b)更改关键工艺或设备时；c)新试制的产品或正常生产的产品停产3个月后，重新恢复生产时；d) 出厂检验与上次型式检验结果有较大差异时；e) 国家质量监督检验机构按有关规定需要抽检时。64判定规则641 出厂检验和(或)型式检验合格时，由质量检验部门出具产品合格证。642出厂检验和(或)型式检验不合格时，在原批次基础上加倍取样分析。如仍不合格，判定该产品为不合格品，不得出厂。7标志、包装、运输及贮存71标志711产品的外包装宜使用符合GBT 191要求的标志。712产品的包装上应
15、贴有牢固的标签。标志内容应包括品名、产地、厂名、规格(酶活力)、生产日期、批号或代号、保质期等。72包装产品的内包装和(或)包装容器的内涂料应采用国家批准的材料，食品工业用产品应符合相应的食品包装用食品容器卫生标准的材料。73运输产品在运输过程中应轻拿轻放，严防雨淋和曝晒。运输工具应清洁、无毒、无污染。严禁与有毒、有害、有腐蚀性的物质混装混运。74贮存产品应贮存在阴凉干燥的环境下。严禁与有毒、有害、有腐蚀性的物质同存。5GBT 23533-20098保质期81在4以下固定化葡萄糖异构酶制剂保质期不少于90天，企业应按上述要求具体标示。在保质期内实测酶活力不应低于标示酶活力。82酶制剂是含有生物
16、活性物质的产品。在保质期外，保存期内，酶活力可能降低，但仍具有使用价值。附录A(资料性附录)固定化葡萄糖异构酶活力的测定A1范围本方法适用于测定样品中固定化葡萄糖异构酶的活力。A2原理和反应条件GBT 23533-2009A21原理利用葡萄糖异构酶可以将葡萄糖转化为果糖的原理，把酶装填在柱子中并在标准条件下与葡萄糖浆反应。用旋光仪检测由葡萄糖转化来的果糖，从转化速率计算酶的活力。A22反应条件葡萄糖：450 gkg。底物pH：75。温度：60。Mg”：99 mgL(10 gL MgS047H20)。Ca”：o45：考虑更高的流速；转化率o40：考虑更低的流速。A83第三天在测定转化率48 h后
17、收集转化产物。检查底物pH为75士003。读取底物的折光值。将转化产物收集在玻璃瓶中，测净重。在1 h和3 h后分别从玻璃瓶中取样。测定样品的折光值。两次测定的相关系数CV应2。A9计算A91计算方法本反应为可逆反应，果糖浓度的上升与葡萄糖的浓度以及果糖形成速度之间的关系十分复杂。A911 葡萄糖溶液密度的计算对于浓度为450 gL的葡萄糖溶液，密度按照式(A1)计算：p=0005 16DS+0966 3(A1)式中：p一底物密度，单位为克每毫升(gmL)；DS底物葡萄糖含量。A912转化率的计算利用旋光仪的读数，用式(A2)计算转化率： A一。ao唧(L一瓦了孑溉)式中：A计算的转化率，口。
18、葡萄糖的特征旋光度(实测值，20)；口，果糖的特征旋光度(实测值，20)；口。样品旋光度；L样品池长，lO cm；DS底物葡萄糖含量； r底物密度，单位为克每毫升(gmL)。A913酶活力的计算用式(A3)计算样品的酶活力：X。一o926嘉XexDSXl“趸鬲Xe(A3)式中：x。样品的酶活力，IGIUg；o926转化因子(gh到mmolmin)；F流速，单位为克每小时(gh)；m酶样品的质量，单位为克(g)；10DS底物葡萄糖含量；xP平衡时转化率(o507，60)；A转化率由式(A2)计算所得。A92结果裹示测试值给出三位有效数字。A10精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不应超过平均值的3。GBT 23533-2009
