1、ICS 07.100.20 C 51 道自3和国国家标准11: ./、中华人民G/T 28230-20门膜过滤法测定入出境船舶压舱水中大肠菌群Enumeration of coliforms in ballast water of entry-exit ships by membrane filtration 2011-12-30发布2012-05-01实施数码防伪中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会发布中华人民共和国国家标准膜过滤法测定入出境船舶压舱水中大肠菌群GB/T 28230-2011 * 中国标准出版社出版发行北京市朝阳区和平里西街甲2号(100013)北京
2、市西城区三里河北街16号。00045)网址总编室:(010)64275323发行中心:(010)51780235读者服务部:(010)68523946中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷各地新华书店经销当&开本880X12301/16 印张0.5字数9千字2012年3月第一版2012年3月第一次印刷争e书号:155066. 1-44535定价14.00元如有印装差错由本社发行中心调换版权专有侵权必究举报电话:(010)68510107GB/T 28230-2011 剧吕本标准按照GB/T1. 1-2009给出的规则起草。本标准修改采用美国环境保护局(EPA)(方法1604:膜过滤法联合测定水中总大肠
3、菌群和大肠杆菌)(2002年9月)Method 1604: Total coliforms and Escherichia coli in water by membrane filtration using a simultaneous detection technique (MI medium) ,september 2002J。本标准与EPA方法的主要区别是:一一删除了大肠杆菌计数的内容;一一培养箱温度由35c士0.5.C修改为36.C士1.C; 一一增加将水样梯度稀释的步骤。本标准由国家质量监督检验检疫总局提出。本标准由中国检验检疫科学研究院归口。本标准起草单位:中国检验检疫科学研究
4、院、中华人民共和国秦皇岛出入境检验检疫局、中华人民共和国广州出入境检验检疫局。本标准主要起草人z王林、张顺合、张乐、李俊成、李金有、聂维忠、廖如燕、陈春田、常林、慈颖、庞秋艳、杨晨光、韩辉。I G/T 28230-2011 1 范围膜过滤法测定入出境船舶压舱水中大肠菌群本标准规定了采用膜过滤法测定人出境船舶压舱水中大肠菌群(coliforms)的程序和方法。本标准适用于对入出境船舶压舱水中的大肠菌群进行计数。2 设备和材料2. 1 恒温培养箱:36.C:I:1.C。2.2 冰箱:2.C8 .C。2.3 100 mL量筒z灭菌。2.4 膜过滤装置1):见4.1. 20 2.5 元菌纤维素醋滤膜，
5、白色，带格栅，直径47mm，孔径0.45m。2.6 元菌移液管:10mL，精确到0.1mL. 2. 7 元菌生理盐水。2.8 锥形瓶:150mL。2.9 紫外钱灯:披长366nrr盯m2. 10 元菌培养皿z直径5切omr盯1m红m。2. 1门1元菌滤器=孔径0.22m。2. 1臼2MI培养基=见附录A。3 检测程序大肠菌群检测程序见图1.4 操作步骤4. 1 准备4. 1. 1 制备MI琼脂培养基，4.C保存的培养基应待温度恢复至室温备用。4. 1. 2 装配过滤装置:用消毒慑子夹取元菌滤膜置于滤器多孔盘上，格栅面向上，装配滤杯与滤器基座，连接缓冲瓶、真空泵(元真空泵可用注射器代替)。过滤装
6、置示意见图2。可使用等效的膜过滤装置。1 GB/T 28230-2011 检样100 mL水样或稀释液抽滤期间用30mL无菌水冲洗滤杯两次滤膜转移至阳平板36.C土1.C 计算每100mL水样中大肠菌群数量图1大肠菌群检测程序4. 1. 3 样品稀释:用元菌移液管移取10mL水样至盛有90mL元菌生理盐水的锥形瓶内，充分混匀，根据对样品污染状况的估计，按上述操作依次制成10倍系列等比稀释的样品匀液备检。每份样品选取3个适宜的连续稀释度分别进行检测。4.2 抽滤4.2. 1 加30mL元菌水于滤杯中，充分浸湿滤膜。4.2.2 用元菌量筒量取100mL水样或稀释液，倒入滤杯，开启真空泵，抽滤完10
7、0mL水样后分别用30 mL元菌水冲洗滤杯两次。4.2.3 关闭真空泵，移去滤杯，用消毒慑子轻轻夹取滤膜边缘，将滤膜格栅面向上覆于MI琼脂培养基上，用镜子轻压或滑动滤膜，使其贴紧培养基，防止滤膜边缘翘起或与琼脂之间形成气泡。2 说明:1 滤杯E2 滤膜z3-一一多孔盘54一一抽滤瓶25 缓冲瓶;巴-10-2 3 6 真空泵(或注射器) 4.3 培养5 图2膜过滤装置示意图将培养皿滤膜面向上，置于36.C士1.C培养箱培养24h. 4.4 计数GB/T 28230-2011 6 4.4.1 在暗室或紫外操作室中于366nm紫外线下计数所有发荧光的菌落数以包括蓝绿色荧光菌落和蓝白色荧光菌落)。4.
8、4.2 计数在自然光下呈蓝色但在366nm紫外线下不发荧光的菌落数b.4.4.3 选择总菌落数200，且a+b100的稀释度平板进行计数，如有多个稀释度平板符合计数要求，则选择目标菌落数较多的平板进行计数。4.5 计算与报告结果检样中的大肠菌群数为+b，根据检样的稀释度计算并报告每100mL压舱水样中的大肠菌群数。FFON|0的NNH阁。GB/T 28230-2011 附录(规范性附录)MI琼脂培养基A gbgbgb 严hJvnU唱EA0.1 g 0.32 g 7.5 g 3.3 g 1. 0g 0.2 g 0.1 g 15 g 1 000 mL 成分蛋白陈酵母浸膏卢-D-乳糖4-甲基伞形酣-
9、半乳糖昔CMUGaD(终浓度100g/mL)起基呵|喋-D葡萄糖昔酸(IBDG)(终浓度320g/mL)氧化铀CNaCD磷酸氢二饵CKzHP04)磷酸二氢饵CKHzP04)十二烧基硫酸铀CSLS)脱氧胆酸铀琼脂蒸馆水A.1 头抱磺睫溶液A.2 将0.02g头抱磺院溶于20mL蒸懵水中，用0.22m滤器过滤除菌，现配现用。配制将A.1中成分加热搅拌溶解，121.C高压灭菌15min，冷却至45.C50 .C后，每升加入5mL新制备的头抱磺睫溶液(终浓度为5g/mL)，倾倒50mm培养皿，每皿约5mL, 2 .C8 .C冰箱保存。A.3 侵权必究俨气u-P、uAaauz-nu FHJV-号一价书一定版权专有14.00 T; GB/T 28230-2011 打印日期:2012年4月16H F002A
