1、:才中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN /T 1059. 3-2002 进出口食品平板菌落计数滤膜法Plate count for bacterial colonies in food for import and export-Membrane filter method 2002 -01-16发布2002 - 06 -01实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检痊总局SN/T 1059.3-2002 前本标准是按照GB/T1. 11993(标准化工作导则第1单元:标准的起草与表述规则第1部分:标准编写的基本规定进行编写的。其中平板菌落计数滤膜法中的培养基、培养温度和滤膜法等内容是参考
2、美国公职分析化学家协会(AOAC)(公定分析方法(1995年第16版17.2.0日，结合SN0168 1992(出口食品平板菌落计数样品制备中内容，并在实验的基础上编写而成。本标准的附录A是标准的附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出井归口。本标准由中华人民共和国天津出入境检验检疫局负责起草。本标准主要起草人:陈子红、侯丽萍、唐丹舟、张思传、孙俐。本标准首次发布。1 范围中华人民共和国出入境检验检疫行业标准进出口食品平板菌落计数滤膜法Plate count for bacterial colonies in food for import and export-Membrane filt
3、er method 本标准规定了进出口食品中平板菌落计数滤膜法。iSN/T 1059.3-2002 本标准仅适用于进出口方便面、膨化食品、矿泉水、单晶糖、饮料、辣椒粒、牛奶(需用膜蛋白酶处理)中菌落计数的检验。2 引用标准J / 下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时，所示版本均为有效。所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。SN 0330-1994 出口食品中微生物学检验通则3 抽样按SN0330规定执行。4 检验方法4. 1 方法原理将滤膜放入滤器，过滤样品，使细菌留在膜表面。将滤膜放在膜化大豆-坚牢绿琼脂(TSFA)培养
4、基上培养，产生深、浅绿色菌落，进行计数。4.2 设备和材料4.2.1 滤器:一套，备有预滤器。4.2.2 真空泵。4.2.3 滤膜:有机或水相，孔径为0.45mo4.2.4 培养箱:36C :I: 1 C。4.2.5 水浴箱:35C:I:1C。4.2.6 吸管:1mL、10mL，具刻度。4.2.7 玻璃三角瓶和广口瓶:200mL ,500 mL。4.2.8 试管:17mmX170 mm，玻璃制。4.2.9 玻璃珠:直径5mm。4.2.10 平皿:直径90mm。4.2.11 天平:感量0.1g。4.2.12 均质器。4.3 培养基和试剂4. 3. 1 蛋白陈-吐温80(PT)稀释液(见附录AAl
5、)。中华人民共和国国家质量监督检验检擅总局2002-01-16批准2002- 06-01实施1 SN/T 1059.3-2002 4.3.2 膜化大豆-坚牢绿琼脂(TSFA)(见附录AA2)。4. 3. 3 三(是甲基)胶甲皖Tris缓冲剂(见附录AA3)。4.3.4 膜蛋白酶贮存液(见附录AA4)。4.4 样品制备4.4.1 以无菌操作取有代表性的样品盛于灭菌容器内。如有包装，则用75%乙醇在包装开口处擦拭后取样。4.4.2 样品匀液制备4.4.2.1 固体或半固体食品:以无菌操作取2历5g样品，放入装有225mL PT稀释液的灭菌均质杯内，于80Oor旷/min口，均质1mi口TIl让m户
6、、寸、-加冰水冷却。4.4.2.2 干燥或干粉食品:以无菌操作取25g样品，放入装有225mL PT稀释液的500mL灭菌广口瓶中(瓶内预置适当数量的玻璃珠)。迅速振摇，将样品混匀，制成1: 10的样品匀液。振摇时，幅度30 cm , 7 s内振摇25次，也可用机械振荡器振荡15s代替手摇。4.4.2.3 液体食品:用灭菌吸管吸取25mL样品，放入装有225mL PT稀释液的500mL的灭菌广口瓶中，按4.4.2.2条中所述的方法，迅速振摇，制成1: 10的样品匀液。吸取样品时，吸管插入液面下不要超过2.5cm。吸管内液体要在2s4 s内完全排人稀释液中。不要在稀释液中吹洗吸管。4.4.3 稀
7、释样品匀液4.4. 3. 1 用10mL灭菌吸管准确吸取1: 10的样品匀液10mL放入装有90mL PT稀释液的200mL 灭菌广口瓶中。按4.4.2.2中所述的方法，迅速振摇，制成1: 100的样品液。4.4. 3. 2 分别用10mL灭菌吸管按4.4.3.1条所述方法将样品匀液制成10倍递增PT稀释:夜的样品液如103、104、105.4.4.4 酶处理的食品需要酶处理的食品取1: 10 PT样品匀液10mL加酶原液1mL，在灭菌试管中混合放入35C:!:lC水浴中处理20min30 min，取出过滤。4.5 过滤对每一份试样，选用适宜的三个连续稀释度的样液，每个稀释度的样液分别过滤两次
8、。将灭菌的过滤装置连接于真空抽滤瓶上，以无菌操作将无菌滤膜放在抽滤底座上，用不锈钢夹子固定。以无菌操作加10mL20 mL无菌蒸馆水于滤器中，加入PT样品匀液10mL，打开真空泵，抽吸过滤，再加入10 mL15 mL无菌蒸馆水，抽吸过滤，关闭真空泵。用无菌慑子将滤膜取出。4.6 培养以无菌操作将滤膜取出放于预先干燥的TSFA琼脂平板表面上，滤膜和琼脂表面之间应无气泡。将TSFA琼脂平板，平放入36C土1C培养箱内培养48h。4. 7 计数4. 7. 1 培养后，对每个TSFA琼脂平板上产生的深、浅绿色菌落进行计数。25250个菌落为合适范围。如果不能立即计数，应将平板存放于0C4C，但不得超过
9、24h。4. 7. 2 如只有一个稀释度的两个平板上的菌落在合适范围内，先计算两个平板的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作为每克(毫升)Cg(mL)J样品中平板菌数。4.7.3 如有两个稀释度在合适范围内，先计算每个稀释度两个平板的平均值。再计算两个稀释度的平均值，然后计算每克(毫升)(g(mL)J样品中平板菌落数。4.7.4 当最低稀释度的两个平板上都少于25个菌落时，计数这一稀释度两个平板上的实际菌落数。计算两个平板上的平均菌落数，将平均菌落数乘以稀释倍数，得到估计的平板菌落数。给这个数注上星号(头)，表明该数系从菌落数在25250这一范围之外的平板估计所得。4. 7. 5 当所有平板
10、上的菌落都超过250时，则应将最高稀释度的两个平板的平均菌落数乘以稀释倍2 SN/T 1059.3-2002 数。得到估计的平板菌落数。给这个数注上星号(头)(同4.7.4)。4. 7. 6 如果所有稀释度的平板都没有菌落，则以小于1乘以最低稀释倍数报告平板菌落数。给这个数注上星号)(同4.7.4)。4. 7. 7 同一稀释度的两个平板中，一个有25250个菌落，另-个的菌落多于250个，两个平板都要计数。计算方法同4.7.2。4.7.8 两个连续稀释度中的每个稀释度都有一个平板的菌落数在25250个范围内，而另一个的菌落数高于250或低于25四个平板都要计数。计算方法参照4.7.2和4.7.
11、3。4. 7. 9 某稀释度的两个平板都有25250个菌落，而另一稀释度的两个平板中只有一个平板的菌落数在25250范围内。四个平板都要计数，计算方法参照4.7.2和4.7.3。5 结果报告报告每克(毫升)Cg(mL)样品中平板菌落数或估计数的平板菌落数。NOON-仍-BOFSN /T 1059. 3-2002 附录(标准的附录)培养基和试剂A 同Z蛋白陈吐温80(PT)稀释液a)蛋白脏、1. 0g b)吐温8010.0g c)蒸馆水1 000 mL 将上述成分加热溶解分装90mL于三角瓶中，121C高压灭菌15min。膜化大豆-坚牢绿琼脂(TSFA)a)蛋白陈b)植物蛋白陈(或大豆陈)5.0
12、 g c)氧化铀(NaCl)5.0 g d)坚牢绿0.25 g e)琼脂15 g f)蒸馆水1 000 mL 将上述成分加热潜解分装，121C高压灭菌15min，调整最终pH为7.30 A3 (Tris)缓冲剂(1.0 mol/L)。溶解121.1 g三(在甲基)胶甲皖于500mL 水中，用浓盐酸调节溶液至所需pH值。用水稀释至1L。室温或4C;-6C保存。A4 膜蛋白酶贮存液:用Tris缓冲剂稀释10g膜蛋白酶(DoifcoNo. 0153或等效品)至100mL , pH7.6。如需要加热至35C以助洛，通过WhatmanNo. 1滤纸(或等效品)过滤以除去不溶物质，再用0.45m滤膜过滤除
13、菌。于4C6C保存一周或一18C保存3个月。15.0 g A1 A2 侵权必究m一元A丛-1-nU 乙一。-nhu nhvm nu-号一瑜书一定* 版权专有SN/T 1059.3-2002 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准进出口食品平板菌落计数洁、膜法SN/T 1059.3-2002 9导中国标准出版社出版北京复兴门外三里河北街16号邮政编码:100045电话:6852394668517548 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷* 开本880X1230 1/16 印张1/2字数10千字2002年5月第一版2002年5月第一次印刷印数1-2 000 9号书号:155066.2-14386 定价6.00兀网址版权专有侵权必究举报电话:(010)68533533
