1、中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1590-2005 进出口食品中苏丹I、E、E、N检测方法Determination of Sudan 1 ,Sudan n ,Sudan m and Sudan W in foodstuffs for import and export 2005-05-20发布2005-12-01实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检度总局前言本标准的附录A为资料性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位:中华人民共和国河北出入境检验检疫局。本标准主要起草人:王凤池、马振栋、陈瑞春、吕红英、郭春海。本标准系首次发布的出入境检验检疫行业
2、标准。SN/T 1590-2005 I 1 范围进出口食品中苏丹I、E、E、N检测方法SN/T 1590-2005 本标准规定了进出口食品中苏丹I、E、田、凹的液相色谱(HPLC)测定方法和液相色谱一质谱(HPLC-MS/MS)确证方法。本标准适用于辣椒、调味品、肉制品中苏丹I、E、田、凹的检测2 测定方法2. 1 方法提要样品中的苏丹I、H、皿、凹用正己烧提取，提取液经氧化铝柱净化，甲醇-水溶液洗脱，洗脱液用配紫外可见检测器的高效液相色谱仪测定，外标法定量，或用乙腊提取直接用HPLC测定。对于用HPLC方法检出阳性的样品，采用HPLC-MS/MS方法进行定性确证。2.2 试剂和材料除另有规定
3、外，所用试剂均为分析纯，水为去离子水，配流动相水为超纯水。2.2.1 正己炕。2.2.2 丙酬。2.2.3 乙睛(HPLC级)。2.2.4 甲醇(HPLC级)。2.2.5 三氯甲烧。2.2.6 甲醇-水溶液(98十2):2mL水用甲醇定容至100mL。2.2.7 中性氧化铝:100目200目，5000C灼烧4h，贮于干燥器中备用，使用前1300C活化4h。2.2.8 苏丹I、H、田、目标准品:纯度注98%。2.2.9 标准储备液:分别精确称取苏丹I、H、田、凹标准品各100mg，分别用三氯甲:皖、溶解，最后用正己皖各自定容至100mL.配制成1.0 mg/mL的标准储备液。此榕液在lOC40C
4、下保存。2.2. 10 ?昆合标准中间液:移取苏丹I、H、皿、目标准储备液各5mL至100mL容量瓶中，用正己炕定容至刻度。配制成1昆合标准中间液，浓度为50g/mL。2.2. 11 混合标准工作液:根据需要，取适量混合标准中间液，用甲醇稀释至所需浓度。2.3 仪器和设备2.3.1 高效液相色谱仪配有紫外-可见检测器。2.3.2 高效液相色谱-质谱联用仪。2.3.3 平板摇床。2.3.4 超声披清洗器。2.3.5 均质器。2.3.6 旋涡混和器。2.3.7 固相萃取仪及配件(贮液器，连接头)。2.3.8 净化柱:塑料柱，6. 5 cm X 1. 4 cm (内径)，准确称取3.0g己活化的中性
5、氧化铝填入，敲击，使之填实，安装到固相萃取仪上待用。2.3.9 真空泵。SN/T 1590-2005 2.4 测定步骤2.4.1 提取2. 4. 1. 1 甜椒或红辣椒粉、粉状调味品:称取10g(准确至0.01g)己粉碎好的样品于100mL具塞锥形瓶中，准确加入50mL正己烧，在平板摇床上振荡10min，超声波水浴中超声15min。静置，将提取液过滤，用2.4.2的步骤净化。2.4. 1.2 调味辣椒酱、原味辣椒酱:称取20g(准确至O.01 g)己粉碎好的样品于100mL具塞锥形瓶中，准确加入50mL正己屈，均质2min，超声波水浴中超声15min。静置，将提取液过滤，用2.4.2的步骤净化
6、。2.4.1.3 肉制品:称取20g(准确至0.01g)样品于150mL具塞锥形瓶中，准确加人100mL乙睛，均质2min，超声波水浴中超声15mino静置，将提取液过滤，滤液过0.45m滤膜后进HPLC分析。2.4.2 净化准确移取7.5mL澄清滤液，直接注入氧化铝柱中，以自然滴速通过氧化铝柱，待榕液全部流出后，先加入2mL丙酣到柱中，将贮液器连接到氧化铝柱上，再向贮被器中加入13mL丙酬，淋洗液滴完后用真空泵将柱子抽干。再用15mL甲醇-水溶液(98十2)洗脱，收集洗脱液于离心管中，用真空泵将残余洗脱液抽下合并于离心管中，并用甲醇定容至15mL y昆匀，过0.45m滤膜后进HPLC分析。2
7、.4.3 测定2.4.3. 1 液相色谱条件a) 色谱柱:C18,250 mmX4. 6 mm(内径)，填料粒度5m，或相当者;b) 流动相z乙睛-水(95十日，流速:1. 0 mL/min; c) 检测波长:500nm; d) 柱温:350C;e) 进样量:40L。2.4.3.2 色谱测定根据样液中苏丹I、H、皿、凹的含量情况，选定浓度相近的混合标准工作液，氓合标准工作液中的苏丹I、H、田、凹的响应值应在仪器检测的线性范围内。对混合标准工作液和样液等体积参插进样测定。在上述色谱条件下，苏丹I、H、皿、凹的保留时间分别约为7.35min、11.23 min、15.07min和24.89 min
8、。标准品的液相色谱图参见附录A。2.4.3.3 空白实验除不加试样外，均按上述步骤测定。2.4.3.4 结果计算与表述用色谱数据处理软件外标法或按式(1)计算试样中被测物的残留量:式中:x=生-Ao) C. V -A. m x-一试样中被测物的残留量单位为毫克每千克(mg/kg); A-一样液中被测物的色谱峰面积，单位为平方毫米(mm2); Ao-一空白实验被测物的色谱峰面积，单位为平方毫米(mm2); As-一标准工作液中被测物的色谱峰面积，单位为平方毫米(mm2); c-一标准工作液中被测物的浓度，单位为微克每毫升(g/mU;v-一-样液最终定容体积，单位为毫升(mL);m-一一最终样液所
9、代表的试样量，单位为克(g)。2.4.4 确证对于用HPLC方法检出阳性的样品，采用HPLC-MS/MS方法进行定性确证。2 . ( 1 ) SN/T 1590一20052.4.4.1 液相色i曾条件a) 色谱柱:CJ8，150mmX 2.1 mm(内径)，填料颗粒直径5m或相当柱Fb) 流动相:0.1%乙酸水溶液+乙脯05十8日，流速:0.3mL/min; c) 色谱柱温度:25.C;d) 进样量:15L2.4.4.2 质谱参考条件a) 离子源:ESI正模式;b) 雾化喷嘴压力:35Pa; c) 干燥气流量:9.0L/min; d) 干燥气温度:350.C ; e) 毛细管电压:2582V;
10、f) 撇取器(skimmer)电压:20V; g) 碰撞电压:苏丹I、H、田、W分别为1.0V、1.15 V、1.5V、1.3V。2.4.4.3 定性确证结果的判断进行样品测定时，如果检出的质量色谱峰保留时间与标准样品一致，则通过扣除背景后的样品谱圈中，各定性离子的相对丰度与浓度接近的同样条件下得到的标准溶液谱图相比，误差不超过表1规定的范围，则可判断样品中存在对应的被测物。在上述色谱和质谱条件下，四种被测物的保留时间和定性离子见表2，总离子流图及二级质谱图参见附录A。相对离子丰度允许的相对误差被测物保留时间/min碰撞电压母离子子离子3 测定低限、回收率3.1 测定低限表1定性确证时相对离子
11、丰度的最大允许误差50% 士20%20%至50%士25%10%至20%士30%表2四种被测物的保留时间和定性离子苏丹I苏丹E苏丹田3.2 5. 3 7.6 1. 0V 1. 15 V 1. 5V 249 277 353 232、93、156260、120、156336、197、15610% 土50苏丹N14.0 1. 3V 381 364、224、156本方法测定低限:甜椒或红辣椒粉中苏丹I、E、田、阿定量低限均为1.0 mg/峙，辣椒酱和肉制品中苏丹1、E、田、凹定量低限均为0.5mg/kg。3.2 回收率不同商品回收率如下:辣椒粉中添加水平为1mg/kg、2mg/kg , 5 mg/kg、
12、10mg/kg时，苏丹I回收率为91.5 % 98.2% ;苏丹H回收率为93.5 % 98. 7 % ;苏丹田回收率为85.5%91.4%;苏丹W回收率为92. 8%96. 3%。辣椒酱中添加水平为0.5mg/kg、1mg/kg、2mg/kg时，苏丹I回收率为94.0%99. 5%;苏丹E回收率为93.5%99. 0%;苏丹田回收率为84.4%88. 8%;苏丹凹回收率为89.5%96. 0%。鸡肉制品中添加水平为0.5mg/地、1mg/kg、2mg/同时，苏丹I回收率为95.0%102. 5%;苏丹E回收率为93.0%101. 5%;苏丹田回收率为94.0% 102.5%;苏丹凹回收率为9
13、9.9% 104.0%。3 SN/T 1590一200512.5 10.0 7.5 己50% 士20%20% to 50% 10% to 20% 土25%土30%Table 2 Retention time and diagnostic ions of the four analytes Analyte Sudan 1 Sudan n Sudan rn Retention tiem/min 3.2 5.3 7.6 Isolation Mass 249 277 353 Daughter lon 232、93、156260、120、156336、197、1563 Limit of determin
14、ation and recovery 3. 1 Limit of determination 三二10%:t 50 Sudan N 14.0 381 364、224、156The limit of determination of this method is 1 mg/kg for peppers and chilli powder, O. 5 mg/kg for pepper paste and meat. 3. 2 Recovery Recoveries of different kinds of commodities are as followed. The recovery ran
15、ge of Sudan 1 is 91. 05%-98. 2% ;Sudan n is 93. 5%-98. 7% ;Sudan m is 85. 5% -91.4% ;Sudan N is 92.8%-96.3% ,when fortified in chilli powder at the concentration of 1 mg/ 阔，2mg/kg ,5 mg/kg , 10 mg/kg. The recoverrange of Sudan 1 is 94. 0%-99. 5% ;Sudan n is 93.5%-99.0% ;Sudan m is 84.4% -88.8% ;Suda
16、n N is 89. 5% -96.0%; when fortified in pepper paste at the concentration of 0.5 mg/kg ,1 mg/闸，2mg/kg. The recovery range of Sudan 1 IS 95.0% -102.5%; Sudan n is 93.0% -101.5%; Sudan m is 94.0% -102.5%; Sudan N is 99.9% -104.0% ; when fortified in chicken at the concentration of 0.5 mg/kg , 1 mg/闸，2
17、mg/kg. 12 SN/T 1590-2005 Annex A (informative annex) Chromatogram and mass spectrum chromatogram of the standards 12.5 Pk# 3 4 10.0 FhUAU 哼，民uDE2.5 0.0 2.5 。2 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 Minutes 4 1SudanI ; 2一一-Sudanll; 3Sudanm ; 4-SudanN. Note: Their retention time are 7. 35 min、11.23min、15.0
18、7min and 24. 89 min respectively. Fig A. 1 HPLC chromatogram of the standards Inte XI0 2 1. 5 3 4 1. 0 0.5 0.0 0 8 16 Tlme mm 2 4 6 10 14 12 Fig A. 2 TIC of the standard solution 13 SN/T 1590-2005 14 Intens. i 1. +MS2 (249. 0) , 2. 9-3. 7min 231. 9 6000 4000 248.9 !,il r 1 I l I 2000 o-29 50 100 150
19、 200 250 300 350 m/z Intens. X104 2. 1. 25 1. 00 0.75 0.50 0.25 0.00 50 Intens. 6000 5000 4000 3000 2000 1000 50 Fig A. 3 Sudan 1 Standard mass spectrum chromatogram +MS2(277. 0) , 5.0-5. 5min 260.0 119.9 277.0 100 150 200 250 300 350 m1z Fig A. 4 Sudan n Standard mass spectrum chromatogram +MS2(353
20、. 0) , 7. 3-7. 5min 353.0 L 336.0 15. 8 g6.9 I I |I 1.1 .L且._ . . fII , . . JI. 100 150 200 250 300 350 m1z Fig A. 5 Sudan m Standard mass spectrum chromatogram Intens. I 4. 5000 4000 3000 2000 1000 。II I 50 I I I 100 150 200 223.9 250 SN/T 1590-2005 +S2(381.0). 14. 0-14. 4ntin 381. 1 364.0 I I I I
21、I I I 300 350 Fig A. 6 Sudan N standard mass spectrum chromatogram mCON-omFHZm 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准进出口食晶中苏丹I、E、E、N检测方法SN/T 1590-2005 唾中国标准出版社出版发行北京复兴门外三里河北街16号邮政编码:100045 网址电话:6852394668517548 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷祷印张1.25 字数30千字2005年8月第一次印刷开本880X12301/16 2005年8月第一版* 定价12.00元如有印装差错由本社发行中心调换版权专有侵权必究举报电话:(010)68533533书号:155066.2-16334
