1、每雪中华人民共和国国家标准GB 14755-2010 食品安全国家标准食品添加剂维生素D2(麦角钙化醇)2010-12-21发布2011-02-21实施数码防1)中华人民共和国卫生部发布目IJ 本标准代替GB14755-1993(食品添加剂维生素D2(麦角钙化醇片。本标准与GB14755二1993相比，主要变化如下:一一增加了红外光谱鉴别;GB 14755-2010 一一维生素D2的测定系统适用性试验所用样品出维生素D2改为维生素D3高效液相色谱含量测定方法由内标法改为外标法;洋地黄皂昔试验检查麦角笛醇修改为薄层色谱法;增加了还原性物质指标和试验方法;增加了重金属指标和试验方法;一一增加了碑指
2、标和试验方法。本标准的附录A和附录B为规范性附录，附录C为资料性附录。本标准所代替标准的历次版本发布情况为:一一GB14755-1993。I GB 14755-2010 食品安全国家标准食品添加剂维生素D2(麦角钙化醇)1 范围本标准适用于以麦角笛醇为原料制得的食品添加剂维生素D2。2 规范性引用文件本标准中引用的文件对于本标准的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本标准。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本标准。3 化学名称、分子式、结构式和相对分子质量3.1 化学名称9，10-开环麦角笛-5，7，10(9)，22-四烯-3-醇3.2 分子
3、式C28 H440 3.3 结构式?H3?H3 CHCH=CHCH -CH (CH3) 2 H3C HO 3.4 相对分子质量396.66(按2007年国际相对原子质量)4 技术要求4. 1 感官要求:应符合表1的规定。1 GB 14755-2010 表1感官要求项目要求检验方法色泽无色或白色气味无臭取适量样品置于清洁、干燥的试管中，在自然光线下，观察色泽和组织状态，嗅其气味组织状态针状结晶或结晶性粉末4.2 理化指标:应符合表2的规定。表2理化指标项臼指标检验方法维生素D，(C8 H 0) ,w/ % 98. 0103.。附录A中A.4麦角ml事，由/%主豆O. 2 附录A中A.5比旋光度m
4、(20.C，D)/()dm.kg 1J 十102.O十107.。附录A中A.6质量吸收系数(265nm)/L/(cm g)J 4649 附录A中A.7还原性物质(囚瞠蓝显色试验)，w/%主三0.002 附录A中A.8碑(As)/ (mg/kg) 主主2 附录A中A.9重金属(以Pb计)/(mg!kg): 、20 附录A中A.10 2 A.1 安全提示附录A(规范性附录)检验方法GB 14755-2010 本标准试验方法中使用的部分试剂具有毒性或腐蚀性，按相关规定操作，使用时需小心谨慎。若溅到皮肤上应立即用水冲洗，严重者应立即治疗。在使用挥发性酸时，要在通风橱中进行。A.2 一般规定本标准所用试
5、剂除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和GB/T6682一2008中规定的三级水。试验方法中所用杂质测定用标准溶液、制剂及制品，在没有注明其他要求时，均按GB/T602、GB/T 603之规定制备。A.3 鉴别试验A. 3.1 醋哥浓碗酸呈色试验A. 3. 1. 1 试剂和材料A. 3. 1. 1. 1 三氯甲烧。A.3.1. 1. 2 乙酸面。A.3.1.1.3 硫酸。A. 3.1.2 分析步骤取约0.5mg实验室样品，加5mL三氯甲:皖溶解后，加0.3mL醋昕与0.1mL硫酸，振摇，初显黄色，渐变红色，迅即变为紫色，最后变为绿色。A.3.2 红外光谱试验采用澳化饵压片法，按照GB
6、/T6040进行试验，实验室样品的红外光谱应与对照的图谱一致(对照图谱见附录白。A.4 维生素D2的测定A. 4.1 方法提要用高效液相色谱法，在选定的工作条件下，通过色谱柱使样品分离，用紫外吸收检测器检测，用外标法定量，计算样品中维生素Dz的含量。A.4.2 试剂和材料A. 4. 2.1 正戊醇z色谱纯。3 GB 14755-2010 A. 4. 2. 2 正己烧:色谱纯。A.4.2.3 异辛烧:色谱纯。A. 4. 2. 4 维生素D2对照品。A.4.2.5 维生素D3对照品。A. 4. 3 仪器和设备高效液相色谱仪(HPLC)。A.4.4 色谱分析条件推荐的色谱柱及典型色谱操作条件见表A.
7、1，维生素D3系统适用性试验高效液相色谱图参见图C.1，各组分的相对保留时间参见表C.1。其他能达到同等分离程度的色谱柱和色谱条件均可使用。表.1色谱柱和典型色谱操作条件色谱柱柱长250mm，柱内径4.6mm，硅胶色谱柱流动相正己烧-正戊醇(1000十3)流速2 mL/min 检测器检测波长254 nm A.4.5 分靳步骤A.4.5.1 维生素队对照品系统适应性试验贮备渡的制备称取约25mg维生素D3对照品，精确至0.0001g，置100mL棕色容量瓶中，加80mL异辛烧，用超声处理助溶1mn，避免加热，使完全溶解，再加异辛烧至刻度，摇匀充氮密塞，避光，O.C以下保存。A. 4. 5. 2
8、实验室样品溶洁的制备称取约25mg实验?在样品，精确主0.0001 g，置100mL棕色容量瓶中，加80mL异辛烧，用超声处理助溶1min，避免加热，使完全溶解，再加异辛炕至刻度，摇匀。量取5mL士0.05mL上述溶液，置10 mL棕色容量瓶中，加正己烧至刻度，摇匀。A.4.5.3 维生素Dz对照晶溶液的制备称取约25mg维生素D2对照品，精确至0.0001g，置100mL棕色容量瓶中，加80mL异辛烧，用超声处理助溶1min，避免加热，使完全溶解，再加异辛烧至刻度，量取上述溶液5mL士0.05mL，置10 mL棕色容量瓶中，加正己皖至刻度，摇匀。A.4.5.4 系统适用性试验以硅胶为填充剂的
9、色谱柱，正己烧-正戊醇(1000+3)为流动相，检测波长254nm，流速约为2mL/ mln。量取维生素D3对照品贮备溶液5mL，置具塞玻璃容器中，充氮后密塞，置90.C水浴加热1h，取出迅速冷却，加正己烧5mL土0.05mL，摇匀，置1cm具塞石英吸收池中，在2支主波长分别为254nm 和365nm的紫外光灯下，将石英吸收池斜放成450，并距灯管5cm6 cm，照射5min，使溶液中含有前维生素D3、反式维生素D3、维生素D3和速面醇D3.取此溶液注入液相色谱仪，测定维生素D3的峰值，先后进样5次，相对标准偏差应不大于2.0%，前维生素D3(与维生素D3的比保留时间为0.5)与反式维生素D3
10、(与维生素队的比保留时间约为O.6)以及维生素D3与速笛醇D3(与维生素叭的比保留时GB 14755-2010 间约为1.1)的峰分离度均应大于1.0。A. 4. 5. 5 测定取20L实验室样品溶液注入液相色谱仪，记录色谱图，另取维生素Dz对照品溶液，同法测定。按外标法以峰面积计算出供试品中维生素D2的含量。A.4.6 结果计算根据色谱图计算维生素D2的质量分数叫，数值以%表示，按公式(A.l)计算z式中z1 X A? . . . _ n / 1-二二L一一x 100Yo A1 m2 mj一一对照品溶液中维生素D2的进样量的数值，单位为微克(g); A2 -实验室样品榕液中维生素D2的峰面积
11、的数值;A j -对照品溶液中维生素D2的峰面积的数值Fm 实验室样品溶液中维生素队的进样量的数值，单位为微克(g)。( A.1 ) 取两次平行测定结果的算术平均值为测定结果，两次平行测定的允许绝对差不大于1.5%。A.5 麦角笛醇的测定A. 5.1 方法提要将维生素Dz溶液点样于薄层板仁，经展开，显色后，所得的色谱图与对照品榕液按同法所得的色谱图作对比，对维生素D2进行杂质检查。A.5.2 试剂和材料A. 5. 2.1 角鳖皖氯仿溶液:10 g/L。A. 5. 2. 2 展开剂:环己;皖-乙隧(l十1)。A. 5. 2. 3 维生素D2)(照品。A.5. 2. 4 麦角面目享对照品。A.5.
12、3 分析步骤A. 5. 3.1 对照品溶液的配制称取约50mg维生素D2对照品，精确至0.0002g，用1mL角皇室皖氯仿溶液溶解，得对照品溶液。A. 5. 3. 2 实验室样品溶液的配制称取约50mg维生素D2实验室样品，精确至0.0002 g，用1mL角重烧氯仿溶液溶解，得实验室样品溶液。A.5. 3. 3 麦角笛醇对照溶液的配制称取约5mg麦角笛醇对照品，精确至0.1mg，置于50mL容量瓶中，加角重烧氯仿溶液40mL溶解并稀释至刻度，摇匀。A.5. 3. 4 显色剂的配制取1.0g三氧化锦，加20mL乙眈氯溶解。5 GB 14755-2010 A. 5. 3. 5 测定分别取10L对照
13、品溶液、实验室样品溶液及麦角笛醇对照溶液，分别点于以竣甲基纤维素铀为粘合剂的硅胶G薄层板上，用展开剂暗处展开，晾干，用显色剂显色。实验室样品溶液与对照品溶液的主斑点Rf值及颜色应一致，实验室样品溶液的杂质斑点不得深于麦角筒醇对照溶液相应的斑点。A.6 比旋光度的测定A.6.1 试剂和材料元水乙醇。A.6.2 仪器和设备旋光仪。A. 6. 3 分析步骤取实验室样品适量，精确至0.0002 g，加元水乙醇制成1mL中约含40mg的溶液，其他按GB/T 613-2007规定的方法进行。注2在溶液配制后30min内测定。A.6.4 结果计算比旋光度am(20 oC ，D)按公式(A.2)计算:式中:一
14、一测得的旋光角，单位为度C);m = (20 oC ,D) =一l X p. t一一一旋光管的长度，单位为分米(dm); a一一溶液中有效组分的质量浓度，单位为克每毫升(g/mL)。A.7 质量吸收系数的测定A.7.1 试剂和材料元水乙醇。A. 7.2 仪器和设备紫外分光光度仪。A.7.3 分析步骤.( A.2 ) 称取实验室样品适量，精确至0.0002 g，加乙醇制成每1mL中约含10同样品的溶液，按照GB/T 9721在265nm士1口m的波长处测定吸光度A，求其质量吸收系数。A. 7.4 结果计算根据吸光度A计算维生素D2的质量吸收系数，数值以C). dm2 kg-l表示，按公式(A.3
15、)计算:6 GB 14755-2010 A 百五( A.3 ) 式中:A一一样品溶液的吸光度的数值;b 一光路长度(即吸收池厚度)的数值，单位为厘米(cm); 实验室样品溶液的质量浓度的数值，单位为克每升(g/L)。A.8 还原性物质的测定A. 8.1 方法原理还原性物质在强碱性溶液中能将四嗖蓝还原为有色甲月替(formazan)，与对甲二酣无水乙醇还原物质的标准溶液颜色比较做限量检查。A.8.2 试剂和材料A. 8. 2.1 元水乙醇。A. 8. 2. 2 甲醇。A. 8. 2. 3 冰乙酸。A. 8. 2. 4 四唾蓝甲醇溶液:50mg/mLQ A. 8. 2. 5 起化四甲镀溶液:是化四
16、甲镜水溶液(100g/L)-元水乙醇0+9)。A. 8. 2. 6 对甲二酷无水乙醇溶破:0.2g/mL。A.8.3 分析步黯A. 8. 3.1 实验室样品溶液的制备称取约0.1g实验室样品，精确至0.001g，溶解于无水乙醇中，稀释至10mL，加入0.5mL四瞠蓝甲障溶液和0.5mL主主化四甲镀情液，静置5mi口，加入1.0 mL冰乙酸，摇匀。A. 8. 3. 2 对照溶液的制备量取10mL土0.05mL O. 2g/mL对甲二酣元水乙醇溶液，加入0.5mL四瞠蓝甲醇溶液和0.5 mL是化四甲镀榕液，静置5min，加入1.0 mL冰乙酸，摇匀。A. 8. 3. 3 空白溶液的制备取10mL元
17、水乙醇，加入0.5mL四瞠蓝甲醇溶液和0.5mL起化四甲镀溶液，静置5min，加入1. 0 mL冰乙酸，摇匀。A. 8. 3. 4 测定在525nm波长处，用空白溶液调零，分别测定实验室样品溶液与对照溶液的吸光度，实验室样品溶液的吸光度不得大于对照溶液。A.9 呻的测定取5g士0.01g实验室样品，用干灰化法处理样品。取相同量的氧化镜、硝酸镜与试样同法处理，GB 14755-2010 做试剂空白试验。量取10mL士0.05mL呻标准榕液(含呻2.0g)，同法处理，制备呻限量标准。按GB/T 5009. 762003碑斑法的规定进行。A.10 重金属的测定A. 10. 1 试剂和材料A.10.
18、1. 1 硝酸。A.10. 1. 2 硫酸。A. 10. 1. 3 盐酸。A. 10. 1. 4 甘油。A.10. 1. 5 乙酸镜。A. 10. 1.6 硝酸铅。A.10. 1. 7 硫代乙酷肢。人10.1. 8 氨试液:4001000。A. 10. 1.9 氢氧化铀溶液:c(NaOH)=lmol/L。A. 10. 1. 10 盐酸溶液:c(HCl)=2 mol/L。A.10. 1. 11 盐酸溶液:c(HCl)=7 mol/L。A. 10. 1. 12 氨水溶液:c(NH3 H2 0) = 5 mol/Lo A. 10. 1. 13 酣肤指示液:10 g/L乙醇溶液。A. 10. 1. 1
19、4 乙酸盐缓冲液(pH3.5):取25g乙酸钱，加水25mL溶解后，加7mol/L盐酸溶液38mL, 用2mol/L盐酸溶液或氨水溶液准确调节pH至3.5(pH计)，用水稀释至100mL。A. 10. 1. 15 硫代乙酷胶试液:取4g硫代乙眈肢，精确至0.01g，加水使溶解成100mL，置冰箱中保存。临用前取5.0mL混合液(由1mol/L 15 mL氢氧化铀溶液、5.0mL水及20mL甘油组成)，加上述1.0 mL硫代乙酷肢溶液，置水浴上加热20s，冷却，立即使用。A. 10. 1. 16 铅标准溶液:称取0.160g硝酸铅，精确至0.0002g，置于1000mL容量瓶中，加5mL硝酸与5
20、0mL水溶解后，用水稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。临用前，移取10mL士0.02mL贮备液，置于100mL容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得(每1mL相当于10阔的Pb)。配置与贮存用的玻璃仪器均不得含铅。A.10.2 分析步骤按中华人民共和国药典)2005年版二部附录回H重金属检查法第二法，具体方法如下:取1g士0.01g实验室样品，缓缓灼烧至完全炭化，放冷，加O.5 mL1. 0 mL硫酸，使恰湿润，用低温加热制硫酸除尽后，加0.5mL硝酸，蒸干，至氧化氮蒸气除尽后，放冷，在500.C士50.C炽灼至完全灰化，放冷，加2mL盐酸，置水浴上蒸干后加15mL水，滴加氨试液至对酣酥指示液显中性
21、，再加2mL 乙酸盐缓冲液(pH3.日，微热溶解后，移置纳氏比色管甲管中，加水稀释成25mL;另取配制实验室样品溶液的试剂，置瓷皿中蒸干后，加2mL乙酸盐缓冲液(pH3.5)与15mL水，微热溶解后，移置纳氏比色管乙管中，加2mL士0.02mL标准铅溶液，再用水稀释成25mL;再在甲乙两管中分别加2mL硫代乙酷胶试液，摇匀，放置2min，同置白纸上，自上向下透视，甲管中显示的颜色与乙管比较，不得更深。8 附录(规范性附录)维生素D2红外光谱图B XM叶棋制明注:引自药品红外光谱集第一卷(1995)。国五斗mm|MO-o维生素D2红外光谱圄图B.l飞。GB 14755-2010 mAbs 100
22、 50 。峰序1 2,3 4 5 6 7 10 附录C(资料性附录)系统适用性试验高效液相色谱图和相对保留时间6 YjJ 10 20 图C.1系统适用性试验高效液相色谱图表C.1各峰保留时间和相对保留时间组分名称溶剂峰未知峰前维生素D3反式维生素D3维生素D3速1ia:享D330 口un相对保留时间0.54 0.60 1. 00 1. 11 OFON-m山h叮阁。国华人民共和国家标准食品安全国家标准由维生素D2(麦角钙化醇)食品添加剂GB 14755-2010 中国标准出版社出版发行北京复兴门外三里河北街16号邮政编码:100045唔网址电话:6852394668517548 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷各地新华书店经销 印张1字数21千字2011年2月第一次印刷开本880X 1230 1/16 2011年2月第一版晤书号:155066. 1-41433 18.00元如有印装差错由本社发行中心调换版权专有侵权必究举报电话:(010)68533533定价GB 14755-2010 打印H期:2011年3月16日F002A
