GB 15193.7-2003 小鼠精子畸形试验.pdf

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资源描述

1、ICS 07. 100 c 53 中华人民共和国国家标准GB 15193. 7-2003 代替GB15193. 7 1994 小鼠精子畸形试验Mice sperm abnormality test 2003-09-24发布中华人民共和国卫生部中国国家标准化管理委员会2004-05-01实施发布55 GB 15193.7-2003 前吉同本标准全文强制。本标准代替GB15193. 7 1994小鼠精子畸形试验。本标准与GB15193. 7 1994相比主要修改如下:在“范围”中增加了受试物的具体内容:食品生产、加工、保藏、运输和销售过程中所涉及的可能对健康造成危害的化学、生物和物理因素,检验对象

2、包括食品添加剂(含营养强化剂)、食品新资源及其成分、新资源食品、辐照食品、食品容器与包装材料、食品工具、设备、洗涤剂、消毒剂、农药残留、兽药残留、食品工业用微生物等;在“剂量及分组”中:在高剂量组的设计方法中增加“急性毒性试验给予受试物最大剂量(最大使用浓度和最大灌胃容量)动物无死亡而求不出LO,时,则按以下顺序a)10 g/kg体重gb) 人的可能摄入量的100倍;或c)一次最大灌胃剂量进行设计”;在“操作步骤”中增加了“受试物配制”的内容;将“镜检”改为“阅片”,内容分列为“阅片要求”、“精子畸形的类型”和“阅片注意事项”三部分g“统计方法及结果判定”分列为“数据处理”和“结果判定”。自本

3、标准实施之日起,GB15193. 7 1994同时废止。本标准由中华人民共和国卫生部提出并归口。本标准起草单位z中国疾病预防控制中心营养与食品安全所、浙江省医学科学院。本标准主要起草人:徐晋康、龚幼菊、陈似兰。本标准于1994年首次发布,本次为第一次修订。56 GB 15193.7-2003 小鼠精子畸形试验1 范围本标准规定了小鼠精子畸形试验的基本技术要求。本标准适用于评价食品生产、加工、保藏、运输和销售过程中所涉及的可能对健康造成危害的化学、生物和物理因素的遗传毒性,检验对象包括食品添加剂(含营养强化剂、食品新资源及其成分、新资源食品、辐照食品、食品容器与包装材料、食品工具、设备、洗涤剂、

4、消毒剂、农药残留、兽药残留、食品工业用微生物等。2 原理小鼠精子畸形受基因控制,具有高度遗传性,许多常染色体及X、Y性染色体基因直接或间接地决定精子形态。稿子的畸形主要是指形态的异常,已知精子的畸形是决定精子形成的基因发生突变的结果。因此形态的改变提示有关基因及其蛋白质产物的改变。小鼠精子畸形试验可检测环挽因子对精子生成、发育的影响,而且对已知的生殖细胞致突变物有高度敏感性,故本试验可用作检测环境因子在体内对生殖细胞的致突变作用。3 仪器与试Jl!J全部试J!IJ除注明外,均为分析纯,试验用水为蒸馆水。3. 1 实验室常用设备。3.2 生物显微镜。3.3 甲醇。3. 4 I%2%伊红染色液z称

5、取伊红Ig 2 g,溶于100mL蒸馄水备用。4 实验动物成年雄性小鼠,6周8周龄、体重25g 35 g0动物购买后适应环境3天5天。5 剂量及分组受试物应设三个剂量组,最高剂量组原则上为动物出现严重中毒表现和或个别动物出现死亡的剂量,一般可取1/2LD5,低剂量组应不表现出毒性,分别取1/4和1/8LD,作为中、低剂量。急性毒性试验给予受试物最大剂量(最大使用浓度和最大灌胃容量)动物无死亡而求不出LDso时,高剂量组则按以下顺序:a)10 g/kg体重gb) 人的可能摄入量的100倍;或c)一次最大灌胃剂量进行设计,再下设中、低剂量组。另设溶剂对照组和阳性对照组。每组至少有5只存活动物。阳性

6、物可采用环磷l$t胶40 mg/kg体重60mg/kg体重、甲基磺酸甲酶CMMS)50mg/kg体重或丝裂霉素CCMMCll.o mg/kg 体重1.5 mg/kg体重经口或腹腔注射(首选经口)给予。6 操作步骤6. 1 受试物配制一般用蒸馆水作溶剂,主口受试物不溶于水,可用食用油、医用淀粉、竣甲基纤维素等配成乳化液或悬浊液。受试物应于灌胃前新鲜配制,除非有资料表明以溶液(或悬浊液、乳浊液等)保存具有稳定性。6.2 实验动物的处理57 GB 15193.7-2003 经口给予,连续5天。各种致突变物作用于精子的不同发育阶段,可在接触某种致突变物后不同时间出现精子畸形,故有条件时,可于给受试物后

7、第1、4、10周处死动物,检查精子形态。因为大部分化学致突变物对精原细胞后期或初级精母细胞早期的生殖细胞较为敏感,故一般均是于首次给受试物后的第35天处死。6. 3 标本制备用颈椎脱臼法处死小鼠,取出二侧副辜,放人有适量生理盐水(约1mL)的小烧杯中或放入盛有2mL生理盐水的平皿中。用眼科剪将副辜纵向剪1刀2刀,静止3min 5 min,轻轻摇动。用四层擦镜纸或合成纤维血网袋过滤,吸滤液涂片。空气干燥后,用甲醇固定5min以上干燥,用1%2%伊红染色1h,用水轻冲,干燥。6. 4 阅片6. 4. 1 阅片要求在低倍镜下(用绿色滤光片)找到背景清晰、精子重叠较少的部位,用高倍镜顺序检查精子形态,

8、计数结构完整精子。精子有头无尾(轮廓不清)或头部与其他精子或碎片重叠,或明显是人为剪碎者,均不计算,每只动物至少检查1000个精子。6. 4. 2 精子畸形的类型精子畸形,主要表现在头部,其次为尾部。畸形类型可分为元钩、香蕉形、胖头、元定形、尾折叠、双头、双尾等。6.4.3 阅片注意事项异常精子均应记录显微镜的坐标数,以备复查。并分别记录异常类型,以便统计精子畸形率及精子畸形类型的构成比。判断双头、双尾畸形时,要注意与两条精子的部分重叠相鉴别,判断元定形时要与人为剪碎及折叠相鉴别。7 数据处理每个剂量组应分别与相应的阴性对照组进行比较,如用Wilcoson秩和检验法评价精子畸形阳性的标准是,畸形率至少为阴性对照组的倍量或经统计有显著意义,并有剂量反应关系。8 结果判定一般阴性对照组的精子异常率为0.8% 3. 4%,供参考。但应有本实验室所用实验动物的自发畸形率作参考。58

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