1、ICS 71.040.40 G 76 中华人民11: ./、和国国家标准G/T 14643.1-2009 代替GB/T14643. 1-1993 工业循环冷却水中菌藻的测定方法第1部分:蒙古液形成菌的测定平皿计数法Examination of bacteria and algae in industrial circulating cooling water一Part 1 : Examination of bacteria formed deposits一Standard of plate count 2009-05-18发布中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会201
2、0-02-01实施发布G/T 14643.1-2009 目。吕GB/T 14643(工业循环冷却水中菌藻的测定方法分为以下几个部分:第1部分:蒙古液形成菌的测定平皿计数法二第2部分:土壤菌群的测定平皿计数法-一第3部分:蒙古泥真菌的测定平皿计数法一一第4部分:土壤真菌的测定平皿计数法一-第5部分:硫酸盐还原菌的测定MPN法一一第6部分:铁细菌的测定MPN法本部分为GB/T14643的第1部分。本部分代替GB/T14643. 1一1993(工业循环冷却水中粘液形成菌的测定平皿计数法。本部分与GB/T14643. 11993相比，在技术内容上并元变化，只是对文本结构和文字进行了修改。本部分由中国石
3、油和化学工业协会提出。本部分由全国化学标准化技术委员会水处理剂分会(SAC/TC63/SC 5)归口。本部分负责起草单位:中海油天津化工研究设计院、上海未来企业有限公司。本部分主要起草人:朱传俊、刘昕、张全、白莹、李琳。本部分于1993年首次发布。I 1 范围工业循环冷却水中菌藻的测定方法第1部分:黠液形成菌的测定平皿计数法GB/T 14643的本部分规定了工业循环冷却水中蒙古液形成菌的测定方法。GB/T 14643.1-2009 本部分适用于工业循环冷却水中悬浮的薪泥中的异养菌的测定，也适用于工业循环冷却水中沉积的蒜泥中异养菌的测定。还适用于原水、生活用水及其他水中蒙古液异养菌的测定。2 规
4、范性引用文件下列文件中的条款通过GB/T14643的本部分的引用而成为本部分的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本部分，然而，鼓励根据本部分达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本部分。GB/T 603 化学试剂试验方法中所用制剂及制品的制备(GB/T603二2002，ISO6353-1: 1982 , NEQ) GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法(GB/T6682二2008，ISO3696 :1 987 , MOD) 3 方法提要本法采用25号浮游生物网收集循环冷却水中的蒙古泥，
5、所得的蒙古泥用石英砂充分研磨使细胞分散，再利用平皿计数技术在(29士1)oc培养72h来测定蒙古泥中的异养菌总数。4 试剂和材料本部分所用试剂，除非另有规定，应使用分析纯试剂和符合GB/T6682三级水的规定。试验中所需制剂及制品，在没有注明其他要求时，均按GB/T603之规定制备。4. 1 牛肉膏:生化试剂。4.2 蛋白陈:生化试剂。4.3 氯化锅。4.4 琼脂:生物试剂。4.5 氢氧化锅溶液:40g/L。4.6 盐酸溶液:1+1104. 7 乙醇溶液:75%(体积分数)。4.8 牛皮纸。4.9 医用脱脂棉04. 10 医用脱脂纱布。4. 11 石英砂:210m，._，150m。5 仪器、设
6、备5. 1 25号浮游生物网。GB/T 14643.1-2009 5.2 量筒:25mLo 5.3 量筒:500mL。5.4 转子流量计。5.5 瓷研钵。5.6 无菌箱(室)或超净工作台。5. 7 蒸汽压力灭菌器。5.8 生化培养箱。5.9 电热干燥箱:温度可控制在60oC -280 oC。5.10 刻度吸管:1mL。5. 11 刻度吸管:5mL。5.12 磨口三角瓶:100mL。5.13 容量瓶:1000 mL。5.14 培养皿:内omm。5.15 二角瓶:500mLo 5.16 搪瓷量杯:1000 mL。6 试验前的准备6. 1 培养基的制备称取下列试剂:牛肉膏:3.0go 蛋白陈:10.
7、0go氯化铀:5.0g。琼脂:15.0 g。将上述试剂加水约950mL，在电炉上加热溶解后，趁热用四层医用脱脂纱布过滤于搪瓷量杯中，并用热水补充至1000 mLo用氢氧化铀溶液或盐酸溶液调节pH值至7.2士2，并分装在500mL三角瓶中，每瓶分装量不超过其总容量的2/3。塞上棉塞，用牛皮纸把瓶口包好，用蒸汽压力灭菌器(121士。灭菌15min。6.2 无菌稀释水的制备6.2.1 生理盐水的配制:称取8.5g氯化锅溶解在1000 mL 水中，混匀。6.2.2 将生理盐水分装在100mL磨口三角瓶中，每瓶45mL，每个三角瓶塞子和瓶口间插入一小纸片，塞紧瓶塞，每个瓶子的瓶口均用牛皮纸包扎以防污染，
8、用蒸汽压力灭菌器(121士l)OC灭菌15min。6.3 刻度吸管的灭菌6.3. 1 将洗净并烘干后的吸管粗端塞上医用脱脂棉，棉花量要适宜，长度大约10mm-15 mm，棉花不宜露在口外，多余的棉花可以用火焰烧掉。6.3.2 每支刻度吸管用1条约40mm-50 mm宽的牛皮纸条，以450左右角度螺旋形卷起来，吸管的尖端在头部，粗端用多余的纸条折叠打结，不使散开，标上量度，若干支扎成一束，置电热干燥箱中，于(160士2)OC灭菌2ho 6.4 培养皿的灭菌将洗净并烘干后的培养皿10个左右叠在一起，用牛皮纸卷成一筒，置电热干燥箱中，于(160士2)OC灭菌2ho 6.5 石英砂灭菌将洗净烘干后的石
9、英砂装入磨口三角瓶中，按无菌稀释水的制备中三角瓶包扎及灭菌步骤进行包扎、灭菌。2 GB/T 14643. 1-2009 7 测定步骤7. 1 样品的采集7. 1. 1 采集蒙古泥装置见图1。1一一一转子流量计52一一浮游生物网;3一一J11X-I0截止阔;4一-X43W-I0旋塞阀;5一一量筒。图1采集黠泥装置图7. 1. 2 调节采样装置中阀门，使冷却水的流速控制在0.8m/s左右，水流量在1m3/h左右，然后关上浮游生物网旋塞阀，过滤1m3水。7. 1. 3 关闭水阀，取下浮游生物网，打开旋塞阀，将蒙古泥收集在500mL量筒内，用自来水冲洗滤网，洗涤液也收集在500mL量筒内，沉淀30mi
10、n后倾出上层清液。将剩余浊液转移至25mL量筒内，静止30 min，记录沉淀出的蒙古泥体积。蒙古泥量用V表示，单位为毫升每立方米(mL/m勺，按式(1)计算:吭一吭一一V . ( 1 ) 式中:V2一一一量筒中教泥体积的数值，单位为毫升(mL); V1一一一通过浮游生物网过滤的循环水量的体积的数值，单位为立方米(旷。7. 1. 4 用元菌吸管移去25mL量筒内的上清液，将量筒内的蒙古泥或部分蒙古泥转移至洗净并烘干后瓷研钵中，加入约2g灭过菌的石英砂，充分研磨后转移至1000 mL洗净并烘干后的容量瓶中，用无菌稀释水稀释至刻度，充分混匀，并立即进行测定。7.2 无菌箱(室)灭菌把试验所用的无菌稀
11、释水，无菌培养皿、元菌吸管等用品放入元菌箱(室)内，打开紫外线灯灭菌30 mino 7.3 水样的稀释和接种7.3. 1 蒙古泥水样放人灭过菌的元菌箱(室中，立即用75%乙醇溶液浸泡的医用脱脂棉球擦手，点燃元菌箱(室)内的酒精灯。以下对水样的稀释和接种的操作应在元菌箱(室)内的火焰区进行。7.3.2 选择适宜的稀释度，应使最后一个稀释度接种后平皿上生长的菌落数小于300个。在空白稀释GB/T 14643. 1-2009 水样瓶上标上稀释度数。7.3.3 用10倍稀释法稀释水样，即用5mL元菌吸管吸取5mL水样注人到45mL空白稀释水中充分摇匀，此时稀释度为10-107.3.4 另取一支5mL元
12、菌吸管吸取5mL稀释度为10-1716500 估计3475 313 313 000 3.1X105 5 27 11 5 270 2.7X102 6 。lX10 10 7 306 12 30 600 3.1X104 9 精密度9. 1 由于微生物能以单独个体，双双成对、链状、成簇或一团团等形式存在，而且没有单独一种培养基能满足一个水样中所有细菌的生理要求。所以，由此法所得的菌落数可能要低于其正常存在的活细胞的数目。9.2 标准平皿计数的正确度随着平行样皿的增加而增加，当使用5个平行皿，每皿加1mL样品时测定结果的置信度为95%。5 goNi气的叮艺同阁。华人民共和国家标准工业循环冷却水中菌藻的测定方法第1部分z黯液形成菌的测定平皿计数法GB/T 14643.1一2009国中* 中国标准出版社出版发行北京复兴门外三里河北街16号邮政编码:100045 网址电话:6852394668517548 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷各地新华书店经销导印张o.75 字数10千字2009年7月第一次印刷开本880X 1230 1/16 2009年7月第一版16.00元如有印装差错由本社发行中心调换版权专有侵权必究举报电话:(010)68533533定价* 书号:155066 1-38012 GB/T 14643.1-2009 打印日期:2010年3月26RF017
