1、ICS 65. 020. 30 B 44 GB 中华人民共和国国家标准dEE 4llnHU 4lnunu nunuL nHUn/一ny一?-7AH户hv41t户。户hv户hu4l，nJ内/n/nuvnudnudnHdnHUanME A斗A斗nt叮lAEE,ABEt-JV 干中4E，nRUAAAA吁户hu户hunkuphunJn/nJnJ nudn叫JvnHdnwdAH.an-AAAAIda-aESEAt-,AEE TTTT JffJ/fJ/JIf BBBB GGGG 实验动物微生物学检测方法(2)Laboratory animal一-Microbiological examination -m
2、ethods 2001 - 08 -29发布2002 - 05 -01实施中华人民共和国国家质量监督检验检菇总局发布GB/ T 14926. 15- 2001 前本标准是对GB/T14926.15-1994(实验动物肺炎链球菌检测方法的修订。本标准增加了6.3.4菊糖发酵试验和6.3.5Optochin 试验阳性;对GB/T14926. 15- 1994 中5.3. 3胆盐溶解试验的内容作了详细的补充。54 本标准由中华人民共和国科学技术部提出并归口。本标准起草单位:中国实验动物学会。本标准主要起草人:黄韧。本标准于1994年1月首次发布。1 范围中华人民共和国国家标准实验动物肺炎链球菌检测方
3、法Laboratory animal- Method for examination of Streptococcus pneumonia 本标准规定了实验动物肺炎链球菌的检测方法。本标准适用于小鼠、大鼠、豚鼠、地鼠和兔肺炎链球菌的检测。2 引用标准GB/ T 14926.15-2001 代替GB/T14926.15- 1994 下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时，所示版本均为有效。所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。GB/T 14926.42-2001 实验动物细菌学检测标本采集GB/T 14926. 43- 200
4、1 实验动物细菌学检测染色法、培养基和试剂3 原理肺炎链球菌是溶血性的革兰阳性球菌，且具有特定的生化反应特征，因此，通过血平皿培养和生化试验等，可与其他细菌区别。4 主要设备和材料4.1 普通恒温培养箱。4.2 生物显微镜。5 培养基和试剂5. 1 葡萄糖肉浸液培养基。5.2 血琼脂平皿。5.3 血清肉汤培养基。5. 4 菊糖发酵管。5. 5 英膜染色液。5. 6 革兰染色液。5.7 10%去氧胆酸饷榕液。5. 8 Optochin纸片。中华人民共和国国家质量监督检验检瘦总局2001-08 -29批准2002 - 05 -01实施55 G/ T 14926.15- 2001 (36土1)C12
5、h 检测程序菊糖发酵试验阻盐榕解试验。-uSSE试验英膜染色操作步骤7. 1 果样采取呼吸道分泌物或病灶组织或分泌物。7. 2 分离培养7.2.1 直接分离培养将已接种的血琼脂平皿置(36士l)C培养2448h o 7. 2.2 增菌分离培养将已接种葡萄糖肉浸液培养基置(36土l)C增菌培养12h后，转种血琼脂平皿，置(36土l)OC培养2448 h。7. 3 鉴定7. 3.1 菌落特征血琼脂平皿上形成圆形，扁平，周围有狭窄草绿色溶血环(溶血)菌落。随培养时间的延长，由于自溶作用使菌落呈肚脐状。7. 3- 2 菌体特征56 7 GB/T 14926.15- 2001 革兰阳性双球菌、钝头相对、
6、尖头相背、似矛头状，有时呈短链排列。7.3.3 英膜染色鉴定菌株接种血清肉汤中，(36士l)C培养12h，进行英膜染色，肺炎链球菌在最初几代英膜染色阳性。7.3.4 菊糖发酵试验多数菌株呈阳性反应。7. 3. 5 Optochin试验纯培养物划线接种于血琼脂平皿上，将含有5月、直径6mm的Optochin纸片平放于琼脂表面，(36土l)C培养24h，出现15mm以上的抑菌圈者为阳性;若直径小于15mm，应做胆盐溶解试验来确定。7. 3. 6 胆盐溶解试验取血清肉汤培养物1.0 mL，分装两个试管，各0.5mL。一支加入10%去氧胆酸铀0.5mL，一支加入0.5mL生理盐水作对照。摇匀置于37C
7、温箱3h，每小时观察一次，在3小时内溶液透明者可判断为阳性。在加胆盐前必须把pH调至7.0。7. 3. 7 肺炎链球菌和甲型链球菌的鉴别见表1。表1肺炎链球菌和甲型溶血性链球菌的鉴别比较项目肺炎链球菌甲型溶血性链球菌普通琼脂斜面不生长生长普通肉汤生长特性不生长肉汤清或微混浊，底层有颗粒沉淀0.1%葡萄糖肉汤均匀混浊生长，无沉淀肉汤清微混浊，底部有大量颗粒沉淀10%血清肉汤均匀混浊生长肉汤清徽混浊，底部有大量颗粒沉淀血琼脂平皿上菌落特灰色，半透明，肚脐样，边缘整齐，表面光滑米黄色，不透明，圆形凸起，0.5mm大小，边征湿润，大小为1.0-1.5 mm，a溶血缘整齐，表面光滑，溶血菌体特征阳性双球
8、菌，钝头相对，尖头相背，呈予头阳性球菌，圆形或卵圆形，呈短链或长链排状，短链排列列，似串珠状也有散在菌体菊糖发酵试验多数菌株阳性阴性胆盐溶解试验阳性阴性英膜染色阳性阴性Optochin试验敏感不敏感8 报告结果凡符合上述各项检测结果者作出阳性报告，不符合者作出阴性报告。57 FCON-导.N叮!叮叮.Nm叮CON-5.N叮俨问筒。OONi止.N叮!.N叮FCON-.N白叮!二N叮俨同阁。同阁。同阁。华人民共和国家标准实验动物微生物学检测方法(2)GB/T 14926.1-14926.6-2001 GB/T 14926.8-14926.17 2001 国中GB/T 14926.41-2叫01GB/T 14926.44-14926.49 2001 中国标准出版社出版北京复兴门外三里洞北街16号邮政编码:100045电话:68523946中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷新华书店北京发行所发行各地新华书店经售68517548 普* 印张6字数180千字2002年2月第一次印刷开本880X12301/16 2002年2月第一版印数1-2000峰7巳定价45.00网址书号:155066 1-18097 也略595-547 版权专有侵权必究举报电话;(010)68533533科目GB/T 14926. 1-2001 H
