1、I65.020.30 B 44 道童3中华人民共和国国家标准GB/ T 14926.18 14926. 32- 2001 GB/ T 14926. 5614926. 64- 2001 实验动物微生物学检测方法(4)Laboratory animal- Microbiological examination methods 2001- 08 -29发布2002 - 05 -01实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局GB/ T 14926. 19- 2001 前本标准是对GB/T14926.19-1994(实验动物流行性出血热病毒检测方法的修订。将实验动物流行性出血热病毒检测方法改称为实验
2、动物汉坦病毒检测方法。删除了GB/T14926.19-1994中5检测方法和结果判定的内容，增加了检测病毒抗体的酶联免疫吸附试验和免疫荧光试验。4 本标准由中华人民共和国科学技术部提出并归口。本标准起草单位:中国实验动物学会。本标准主要起草人:贺争鸣。本标准于1994年1月首次发布。1 范围中华人民共和国国家标准实验动物汉坦病毒检测方法Laborator y animal- Method for examination of Hantavirus (HV) 本标准规定了汉坦病毒(HV)的检测方法、试剂等。本标准适用于小鼠、大鼠HV的检测。2 引用标准GB/ T 14926 . 19-2001
3、代替GB/T14926.19- 1994 下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时，所示版本均为有效。所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。GB /T 14926.50一2001实验动物酶联免疫吸附试验GB/T 14926. 52-2001 实验动物免疫荧光试验3 原理根据免疫学原理，采用HV抗原检测小鼠、大鼠血清中HV抗体。4 主要试剂和器材4. 1 试剂4. 1. 1 ELISA抗原4. 1. 1. 1 特异性抗原在生物安全柜内，用Hantaan型或Seoul型毒株感染的E6细胞，当特异性荧光达+十+时，即可收获培养物。冻
4、融三次或超声波处理后，低速离心去除细胞碎片，上清液再经超速离心浓缩后制成ELlSA抗原。4. 1.1. 2 正常抗原E6细胞冻融破碎后，经低速离心去除细胞碎片而获得的上清液。4. 1. 2 抗原片在生物安全柜内，用Hantaan型或Seoul型毒株感染E6细胞，每23d更换维持液，培养710 d，用IFA法测定细胞内特异性荧光。当荧光达+时，将细胞用膜酶分散，用PBS洗涤，涂片。室温干燥的同时，在紫外线下20cm处照射30min，冷丙酣固定10min，-20C保存。4. , . 3 阳性血清用自-丙内脂灭活HV抗原，免疫清洁或SPF小鼠或大鼠所获得的抗血清。4. .4 阴性血清中华人民共和国国
5、家质量监督检验检疫总局2001-08 -29批准2002- 05-01实施5 GB/ T 14926.19-2001 清洁或SPF小鼠或大鼠血清。4.1.5 酶结合物辣根过氧化物酶标记羊或兔抗小鼠、大鼠IgG抗体。用于检测相应动物血清抗体;辣根过氧化物酶标记葡萄球菌蛋白A(SPA)，用于检测小鼠血清抗体。4.1.6 异硫氨酸荧光素标记羊或兔抗小鼠、大鼠IgG抗体，用于检测相应动物血清抗体。4.2 器材4.2.1 酶标仪。4.2.2 荧光显微镜。4. 2.3 3TC培养箱或水浴箱。5 检测方法5.1 采用ELISA方法(见GB/T14926.50一2001)进行血清学检测。5.2 采用IFA方法
6、(见GB/T14926.52-2001)进行血清学检测。6 结果判定对阳性检测结果，选用同一种方法或另一种方法重试。如仍为阳性则判为阳性。7 结果报告根据判定结果，作出报告。6 CON-3.N叮lg.Nm叮CON-s.N叮Fj.N叮H阁。H国。华人民共国家标准实验动物微生物学检测方法(4)GB/ T 14926. 18- 14926. 3-2001 GBj T 14926.56- 14926.64- 2001 国和中 中国标准出版社出版北京复兴门外三里河北街16号邮政编码:100045电话:6852394668517548 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷新华书店北京发行所发行各地新华书店经售4峰印张4字数102千字2002年2月第一次印刷开本880X12301/ 16 2002年2月第一版印数1-2000定价35.00元* 书号:155066 .1-18099 网址版权专有侵权必究举报电话:(010)68533533* 595- 548 科目 GB/ T 14926.18-2001
