1、I65.020.30 B 44 道童3中华人民共和国国家标准GB/ T 14926.18 14926. 32- 2001 GB/ T 14926. 5614926. 64- 2001 实验动物微生物学检测方法(4)Laboratory animal- Microbiological examination methods 2001- 08 -29发布2002 - 05 -01实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局GB/ T 14926. 26-2001 前本标准是对GB/T14926.26-1994(实验动物小鼠脑脊髓炎病毒检验方法的修订。对检测方法未作改动j仅对原标准的个别文字作了修
2、改。本标准由中华人民共和国科学技术部提出并归口。本标准起草单位:中国实验动物学会。本标准主要起草人:屈霞琴。本标准于1994年1月首次发布。25 1 范围中华人民共和国国家标准实验动物小鼠脑脊髓炎病毒检测方法Laboratory animal-Method for examination of Theilers mouse encephalomyelitis virus (TMEV) 本标准规定了小鼠脑脊髓炎病毒(TMEV)的检测方法、试剂等。本标准适用于小鼠TMEV的检测。2 召1.1目标准GB/T 14926.26-2001 代替GB/T14926.26- 199 4 下列标准所包含的条文
3、，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时，所示版本均为有效。所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。GB/ T 14926.50一2001实验动物酶联免疫吸附试验GB/T 14926.51- 2001 实验动物免疫酶试验GB/ T 14926. 52-2001 实验动物免疫荧光试验GB/T 14926.54- 2001 实验动物血凝抑制试验3 原理根据免疫学原理，采用TMEV抗原检测小鼠血清中TMEV抗体;或根据TMEV在一定的条件下，能凝集人0型红细胞，这种凝集红细胞的能力可被特异性抗体所抑制的原理，检测小鼠血清中TMEV抗体。4 主要试剂和器材
4、4. 1 试剂4.1.1 ELISA抗原4. 1. 1. 1 特异性抗原TMEV(GDvn株)感染小鼠，待发病后取脑，研磨，制成10%悬液，3000 r/min离心10min后取上清液接种BHK21细胞，吸附1.52 h，加维持液培养45d左右，当细胞病变达十+十时收获。冻融三次或超声波处理后，低速离心去除细胞碎片，上清液再经超速离心浓缩后制成ELISA抗原。4. 1. 1. 2 正常抗原BHK21细胞冻融破碎后，经低速离心去除细胞碎片而获得的上清液。4.1.2 抗原片TMEV(GDvn株)感染BHK21细胞，培养45d，病变达+十+时，将细胞用膜酶分散，用PBS洗涤，滴片。室温干燥后，冷丙酬
5、固定10min，-20C保存。中华人民共和国国家质量监督检验检疲总局2001-08-29批准2002 - 05 -01实施26 GB/ T 14926. 26- 2001 4. 1. 3 血凝素脑腔接种(0.02mL/只)14-21d龄小鼠5-7d后，无菌取脑，研磨，制成10%悬液，冻融2-3次，1 000 r/min离心10min，上清中加入等量的0.5%膜酶，4.C可短期保存。4. 1. 4 阳性血清TMEV抗原兔疫SPF小鼠所获得的抗血清。4. 1. 5 阴性血清SPF小鼠血清。4. 1. 6 酶结合物辣根过氧化物酶标记羊或兔抗小鼠IgG抗体;或辣根过氧化物酶标记葡萄球菌蛋白A(SPA)
6、。4.1.7 异硫氨酸荧光素标记羊或兔抗小鼠IgG抗体。4. 2 器材4.2. 1 酶标仪。4.2.2 荧光显微镜。4.2.3 普通显微镜。4. 2.4 3TC培养箱或水浴箱。5 检测方法5.1 采用ELISA方法(见GB/T14926. 502001)进行血清学检测。5.2 采用IFA方法(见GB/T14926.52-2001)进行血清学检测。5.3 采用IEA方法(见GB/T14926.51-2001)进行血清学检测。5.4 采用HAI方法(见GB/T14926.54-2001)进行血清学检测。6 结果判定对阳性检测结果，选用同一种方法或另一种方法重试。如仍为阳性则判为阳性。7 结果报告根
7、据判定结果，作出报告。27 CON-3.N叮lg.Nm叮CON-s.N叮Fj.N叮H阁。H国。华人民共国家标准实验动物微生物学检测方法(4)GB/ T 14926. 18- 14926. 3-2001 GBj T 14926.56- 14926.64- 2001 国和中 中国标准出版社出版北京复兴门外三里河北街16号邮政编码:100045电话:6852394668517548 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷新华书店北京发行所发行各地新华书店经售4峰印张4字数102千字2002年2月第一次印刷开本880X12301/ 16 2002年2月第一版印数1-2000定价35.00元* 书号:155066 .1-18099 网址版权专有侵权必究举报电话:(010)68533533* 595- 548 科目 GB/ T 14926.18-2001
