1、ICS 65. 020. 30 B 44 GB 中华人民共和国国家标准dEE 4llnHU 4lnunu nunuL nHUn/一ny一?-7AH户hv41t户。户hv户hu4l，nJ内/n/nuvnudnudnHdnHUanME A斗A斗nt叮lAEE,ABEt-JV 干中4E，nRUAAAA吁户hu户hunkuphunJn/nJnJ nudn叫JvnHdnwdAH.an-AAAAIda-aESEAt-,AEE TTTT JffJ/fJ/JIf BBBB GGGG 实验动物微生物学检测方法(2)Laboratory animal一-Microbiological examination -m
2、ethods 2001 - 08 -29发布2002 - 05 -01实施中华人民共和国国家质量监督检验检菇总局发布GB/ T 14926.4- 2001 前本标准是对GB/T1492.6.4-1994(实验动物皮肤病原真菌检验方法的修订。本标准增加了猴类毛痛菌形态描述以及转种皮肤癖菌鉴别琼脂等相关内容。本标准由中华人民共和国科学技术部提出井归口。本标准起草单位:中国实验动物学会。本标准主要起草人:范薇。本标准于1994年1月首次发布。13 1 范围中华人民共和国国家标准实验动物皮肤病原真菌检测方法Laboratory animal- Method for examination of pat
3、hogenic dermal fungi 本标准规定了实验动物皮肤病原真菌的检测方法。本标准适用于小鼠、大鼠、豚鼠、地鼠、兔、犬和猴皮肤病原真菌的检测。2 引用标准G/ T 14926.4- 2001 代替G/T14926.4- 1994 下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时，所示版本均为有效。所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。GB/ T 14926.42-2001实验动物细菌学检测标本采集GB/ T 14 926.43-2001 实验动物细菌学检测染色法、培养基和试剂3 原理皮肤病原真菌在培养基上有特定的生长、形态和
4、生理生化特征;寄生于毛发上可见明显的感染抱子。4 主要设备和材料4. 1 接种刀。4. 2 无菌接种罩。4. 3 28C恒温培养箱。4.4 生物显微镜。5 培养基及试剂5. 1 葡萄糖蛋白陈琼脂(沙氏培养基)。5.2 皮肤癖菌鉴别琼脂(DTM)。5.3 氢氧化饵二甲基亚枫液。5. 4 乳酸酣棉蓝染色液。中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局2001-08 -29批准14 2002 - 05 -01实施6 检测程序直接涂片7 操作步骤7. 1 采样取皮毛、鳞屑。7. 2 直接检查GB / T 14926.4- 2001 刮取动物皮毛沙氏斜面菌落形态观察涂片镜检结果报告取标本置于载玻片并加氢氧化伺
5、二甲基亚枫液一滴，盖上盖玻片，置lO15min后，轻压盖玻片，吸去周围被体，置显微镜下观察。7.3 分离培养将标本分三点接种于沙氏斜面，放置28C恒温箱中培养，714d观察菌落形态，并将培养物涂片镜检。7. 4 涂片镜检取载玻片并加乳酸酣棉蓝染色液一滴，用接种针(环)取培养物置染色液中，然后加盖玻片，镜检。7. 5 鉴定7. 5. 1 根据菌落形态及镜检结果，参照以下皮肤病原真菌形态特征，确定菌种。可引起动物皮肤瘤病的病原真菌主要有以下四种，它们的形态学特点是:7. 5. 1. 1 石膏样毛瘤菌(Tricho户hytonmentagrophytes) 本菌在葡萄糖蛋白陈琼脂上28C培养，生长迅
6、速。根据菌落形态，大致可分为以下2种类型。羊毛状或绒毛状型:白色羊毛状菌丝充满斜面，绒毛状菌丝短而整齐，整个菌落只占斜面的1/31/2.培养基背面颜色为淡黄或棕黄色。镜检只见较细的，分隔菌丝和卵圆形小分生袍子，小分生抱子有时集聚成葡萄状，偶见球拍菌丝和结节菌丝，无螺旋菌丝和大分生抱子。粉末状或颗粒状型:菌落表面为粉末状，色黄、充满斜面，培养基背面为棕黄或棕红色，镜捡可见多种菌丝。如螺旋菌丝、球拍菌丝、结节菌丝等。小分生抱子呈球状，常聚成葡萄状。可见棒状大分生抱子，28个细胞，为(4060)mX(59)m，外壁薄而光滑。菌种鉴定可依据菌落和镜检特征。7. 5. ,. 2 石膏样小抱子菌(M比ro
7、s户orumgypsium ) 本菌在葡萄糖蛋白陈琼脂上，28C培养，生长快，菌落初呈白色，渐变为淡黄色至棕黄色粉末状菌落。培养基背面呈棕色。镜检可见很多大分生抱子，46隔，(l213)mX (4060)m大小，呈纺锤形，壁薄，粗糙有刺。菌丝较少。可见少数小分生抱子，单细胞，(35)mX (2. 53. 5)m，呈棍棒状、15 G/ T 14926.4-2001 亦可见球拍状菌丝、破梳状菌丝、结节状菌丝及厚壁抱子。菌种鉴定主要依据菌落形态，大分生抱子等。菌落应与石膏样毛痒菌鉴别。? 5. 1. 3 羊毛状小抱子菌(Microspornlanosum) 本菌在葡萄糖蛋白豚培养基上，28C培养，生
8、长快，菌落开始为绒毛状，2周后呈羊毛状并充满斜面，菌落中央趋向粉末状。菌落颜色由白色渐变为淡棕黄色，反面呈桔黄或红棕色。镜检可见直而有隔的菌丝体，以及很多中央宽大，两端稍尖的纺锤形大分生于包子，大小为(15-20)mX(60125)m、壁厚、表面粗糙有刺，尤其是抱子的尖端部分，多隔，一般4-7隔，偶见12隔者。小分生抱子较少，单细胞，呈棍棒状，(2.53. 5)mX (4-7)m。可见球拍状菌丝、破梳状菌丝、结节菌丝和厚壁抱子。在米粉培养基上，室温培养、菌丝较密，日久变为粉末状菌落，培养基呈棕黄色，镜检可见很多大分生抱子。菌种鉴定主要依据菌落状态及大分生抱子的形态。? 5. 1. 4 猴类毛癖
9、菌(Trichophytonsimii) 在沙氏琼脂培养基室温培养生长快。菌落表面平或稍有皱榴和隆起，粉末状，边缘不整齐，呈羽毛状。正面白色、淡黄色或粉红色，背面黄色或红棕色，中央常有紫色小点。外观与石膏样毛癖菌相似。镜检可见较多棒状大分生抱子，薄壁而光滑，约5lO个分隔，每隔大小不等，间隔处收缩明显，后期大分生抱子内的个别细胞扩大，壁增厚，形成厚壁抱子，又称内生厚壁抱子。内生厚壁抱子两侧的细胞常常变空破裂。游离的厚壁抱子呈凸透镜状，常带有破裂细胞的残留物，具特征性。小分生抱子侧生或顶生，短棒状，螺旋菌丝间或存在。7.5.2 转种皮肤瘤菌鉴别琼脂(DTM)，DTM上四种皮肤癖菌均可使培养基由黄
10、变红。8 结果报告凡符合上述各项检测结果者作出阳性报告，不符合者作出阴性报告。16 FCON-导.N叮!叮叮.Nm叮CON-5.N叮俨问筒。OONi止.N叮!.N叮FCON-.N白叮!二N叮俨同阁。同阁。同阁。华人民共和国家标准实验动物微生物学检测方法(2)GB/T 14926.1-14926.6-2001 GB/T 14926.8-14926.17 2001 国中GB/T 14926.41-2叫01GB/T 14926.44-14926.49 2001 中国标准出版社出版北京复兴门外三里洞北街16号邮政编码:100045电话:68523946中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷新华书店北京发行所发行各地新华书店经售68517548 普* 印张6字数180千字2002年2月第一次印刷开本880X12301/16 2002年2月第一版印数1-2000峰7巳定价45.00网址书号:155066 1-18097 也略595-547 版权专有侵权必究举报电话;(010)68533533科目GB/T 14926. 1-2001 H
