1、ICS 65. 020. 30 B 44 GB 中华人民共和国国家标准dEE 4llnHU 4lnunu nunuL nHUn/一ny一?-7AH户hv41t户。户hv户hu4l，nJ内/n/nuvnudnudnHdnHUanME A斗A斗nt叮lAEE,ABEt-JV 干中4E，nRUAAAA吁户hu户hunkuphunJn/nJnJ nudn叫JvnHdnwdAH.an-AAAAIda-aESEAt-,AEE TTTT JffJ/fJ/JIf BBBB GGGG 实验动物微生物学检测方法(2)Laboratory animal一-Microbiological examination -m
2、ethods 2001 - 08 -29发布2002 - 05 -01实施中华人民共和国国家质量监督检验检菇总局发布GB/ T 14926.45- 2001 前本标准规定了犬布鲁杆菌的检测方法。由于犬的布鲁杆菌具有S型和R型抗原，本标准写明了两种抗原的检测方法及判定标准。本标准由中华人民共和国科学技术部提出并归口。本标准起草单位:中国实验动物学会。本标准主要起草人:黄韧。 73 中华人民共和国国家标准实验动物布鲁杆菌检测方法Laboratory animal- Method for examination of Brucella sp. 1 范围本标准规定了实验动物布鲁杆菌的检测方法。本标准适
3、用于犬布鲁杆菌的检测。2 引用标准GB/ T 14926. 45- 2001 下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时，所示版本均为有效。所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。GB/ T 14926.42-2001实验动物细菌学检测标本采集GB/ T 14926.43- 2001 实验动物细菌学检测染色法、培养基和试剂3 原理S(光滑)型和R(粗糙)型布鲁杆菌是犬必需排除的病原菌。从布鲁杆菌标准抗原(R型和S型)与犬血清试管凝集效价，可以判定犬是否感染布鲁杆菌。4 主要设备和材料普通恒温培养箱5 培养基及试剂5. 1 布鲁杆菌
4、标准抗原(R型和S型)。5.2 布鲁杆菌标准阴性、阳性血清。5.3 生理盐水。中华人民共和国国家质量监督检验检瘟总局2001-08-29批准2002 - 05 -01实施74 GB / T 14926.45-2001 6 检测程序血消倍比稀释加入标准抗原37C温箱118-24h后室温静置2h7 操作步骤7. 1 采样s抗原效价50阳性、抗原效价160限性取血、分离血清。7.2 S抗原试管凝集试验7. 2.1 血清稀释参照表1进行。s抗原效价50可疑R抗原效价160可疑结果判定取小试管5只，置于试管架上，标明编号。第1管内加入生理盐水0.84mL，第25管加入0.5 mL。取待检血清0.16mL
5、加入第1管内，rl昆匀，取0.5mL加入第2管内，混匀，取0.5mL加入第3管内如此稀释至第5管，弃去0.5mL。此时各管血清稀释倍数为1:6. 25 , 1 : 12.5 ,1: 25 , 1 : 50, 1 : 100。7.2. 2 加入抗原将各管加入标准抗原0.5mL，混匀，此时各管血清稀释倍数为1:12.5, 1: 25 , 1 : 50 , 1: 100 , 1 : 200。具体操作见表1。置37C温箱1824h，取出后室温静置2h，观察结果。75 G/ T 14926.45- 2001 表1布鲁杆菌S抗原试管凝集试验操作方法试管编号1 2 3 4 5 生理盐水，mLO. 84 0.
6、 5 0. 5 0. 5 O. 5 待检血清，mL0.16万0. 5) O. 5) 0. 5) o. 5)弃去0.5标准抗原，mL0.5 0.5 O. 5 0.5 O. 5 稀释度1/12. 5 1/25 1/ 50 1/100 1/200 7.3 R抗原试管凝集试验7. 3. 1 血清稀释参照表2进行。取小试管5只，置于试管架上，标明编号。第1管内加入生理盐水0.95mL，第25管加入0. 5 mL。取待检血清0.05mL加入第1管内，混匀，取0.5mL加入第2管内，混匀，取0.5mL加入第3管内如此稀释至第5管，弃去0.5mL。此时各管血清稀释倍数为1: 20 , 1 : 40, 1 :
7、80, 1 : 160 , 1 : 320。7. 3. 2 加入抗原将各管加入抗原0.5mL，混匀，此时各管血清稀释倍数为1: 40, 1 : 80, 1 : 160 , 1 : 320 , 1 : 640。具体操作见表2。置37C温箱1824h，取出后室温静置2h，观察结果。表2布鲁杆菌R抗原试管凝集试验操作方法试管编号1 2 3 4 生理盐水，mLO. 95 O. 5 0.5 0. 5 待检血清，mL0.05万0. 5) O. 5万0.5) 标准抗原，mL0.5 O. 5 0.5 0. 5 稀释度1/40 1/80 1/160 1/320 7.4 对照管的制作每次试验须作三种对照z阴性血清
8、对照:阴性血清的稀释和加抗原的方法与待检血清相同。阳性血清对照:阳性血清须稀挥到原有的滴度，加抗原的方法与待检血清相同。抗原对照:试验中所用的适当稀释抗原0.5mL，加0.5mL石炭酸生理盐水。7. 5 比浊管的配制每次试验须配制比浊管作为判定清亮程度(凝集反应程度)的依据。5 O. 5 O. 5万弃去0.5O. 5 1/640 配制方法:取本次试验用的抗原稀释液，加入等量的0.5%生理盐水作倍比稀释，然后按表3配制比浊管。表3比浊管配制试管号2 3 抗原稀释液，mL0. 00 O. 25 0. 50 生理盐水，mL1. 00 O. 75 0. 50 清亮度，%100 75 50 凝集度标记+
9、 + + 7. 6 结果判定76 结果判定标准如下:+:液体完全透明，管底出现大片的伞状沉淀。+:液体几乎透明，管底出现明显的伞状沉淀。+:液体不甚透明，管底出现片状沉淀，振商时易碎成小絮片状。+:液体不透明，管底有松散沉淀。4 5 O. 75 1. 00 0. 25 0. 00 25 。+ GB/ T 14926. 45- 2001 一:液体不透明，管底无伞状沉淀，菌体下沉呈圆点状。? 6. 1 对S抗原，待检血清凝集效价在1: 50达到+或以上时，均判为阳性反应;凝集效价在1 : 25达到十十或1: 50达到+咱才，均判为可疑反应。7. 6. 2 对R抗原，待检血清凝集效价在1: 160达
10、到十十或以上时，均判为阳性反应;凝集效价在1 : 80达到十十或1: 160达到十吨才，均判为可疑反应。? 6. 3 可疑反应犬，间隔34周须重新采血，再次检验，如凝集价不断上升，可判为阳性，若重检仍为可疑反应，同时该犬群中既无本病流行情况，又无临床病例时，则可判为阴性。8 结果报告凡符合上述检测结果者作出阳性报告，不符合者作出阴性报告。77 FCON-导.N叮!叮叮.Nm叮CON-5.N叮俨问筒。OONi止.N叮!.N叮FCON-.N白叮!二N叮俨同阁。同阁。同阁。华人民共和国家标准实验动物微生物学检测方法(2)GB/T 14926.1-14926.6-2001 GB/T 14926.8-14926.17 2001 国中GB/T 14926.41-2叫01GB/T 14926.44-14926.49 2001 中国标准出版社出版北京复兴门外三里洞北街16号邮政编码:100045电话:68523946中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷新华书店北京发行所发行各地新华书店经售68517548 普* 印张6字数180千字2002年2月第一次印刷开本880X12301/16 2002年2月第一版印数1-2000峰7巳定价45.00网址书号:155066 1-18097 也略595-547 版权专有侵权必究举报电话;(010)68533533科目GB/T 14926. 1-2001 H
