1、中华人民共和国国家标准活化乳中乳过氧化物酶体系保存生鲜牛乳实施规范Code of practlce for tbe preservatlon of raw and fresb mllk by actlvatlnll幽elactoperoxidase system 1 主要内容与适用范围GB/T 15550-95 本标准规定了生鲜牛奶(包括水牛奶，下同)挤下后，在贮存、搜集和运输到乳品加工厂期间利用乳过氧化物酶体系防止其细菌性腐坏的方法.本标准适用于利用乳过氧化物酶体系保存生鲜牛奶防止牛奶腐坏变质的技术要求。2 引用标准GB 1268化学试剂硫氯酸销GB 2760食品添加剂使用卫生标准GB 66
2、84 化学试剂30%过氧化氢GB 6914 生鲜牛乳收购标准3 术语3. 1 乳过氧化物酶Oactoperoxidase)代号为LP，存在于牛奶的乳清中，含铁的乳清蛋白质，约为乳清蛋白质的1%。牛奶中LP约为10-30g/mL. LP的特性是对热比较稳定。普通巴氏杀菌法(62C30min或72C15 s)不能使其丧失活力，但80C2.5s即可使其破坏。3.2 乳过氧化物.体系(lactoperoxidasesystem) 代号为LPS，天然存在于生鲜牛奶包括水牛奶)中和人类唾液中，为乳过氧化物酶、硫佩酸盐与过氧化氢三种物质所组成的一种抗菌体系。3.3 过氧化氢(hydrogenperoxide
3、) 化学分子式为民0，为一种强氧化剂。100%浓度的过氧化氢18C时比重为1.446 5. 3.4 过碳酸销(sodiumpercarbonate) 为干燥、白色、结晶细粉末状化合物，极易溶于水，在水中可以缓慢地放出过氧化氢，因而它是一种强氧化剂。目前国外己用它做牛奶保鲜剂的主要成分，分子式为2Na，CO， 3比0，.3.5 硫佩酸盐。hiocyanate)化学分子式为SCN-，也可写成CNS-，为动物所有组织和分泌物中存在的阴离子.牛奶中SCN含量为2-7(1-15)ppm.SCN具有微弱的毒性和蓄积毒性，用作牛奶保鲜剂时，必须严格遵照本实施规范执行，严禁滥用。国东技术监督局1995-04-
4、19批准1995占12-01实施609 GB/T 15550- 95 4 方法原理乳过氧化物酶在生鲜牛奶中的浓度相当高，足够满足其形成LPS达到抗菌的需要(0.5月/mL)。在有H，O，的条件下，促使SCN被氧化成为亚硫佩酸(HOSCN)。在牛奶的pH值(pH6.46.的条件下，亚硫氨酸会分离，以亚硫氨酸根离子(OSCW)为主要存在形式。这种离子专门和细菌细胞表面游离的硫氨基因(SH)化合，致使细菌的几种与生命代谢有关的酶丧失活力，阻碍了细菌的代谢和增殖的能力。这种抗菌的硫氨酸盐氧化物在中性pH值条件下不稳定，容易自发地分解为硫氧酸盐。分解反应的速度决定于温度，温度较高时分解较快。奶的巳氏消毒
5、可以保证这种活性氧化产物的残余完全除净。乳汁刚离乳房时，硫氨酸盐的氧化程度很小，但通过添加低微浓度的过氧化氢J可以促进这种氧化。使用高浓度(300800ppm)H，O，保存生牛奶时，会毁坏奶中的乳过氧化物酶，阻止硫氯酸盐的氧化，利用H，O，本身的杀菌作用抗菌。SCN与H，O，化合，以等摩尔化合。如H，O，浓度较低，则有部分SCN得不到氧化，OSCW产量减少，保鲜的效力也相应地减弱;如H，O，浓度较大，则会产生存在时间比OSCN-更为短暂的较高的含氧酸，如氟亚硫酸(HO，SCN)和佩硫酸(HO，SCN)，在奶中分别分解为O，SCN-和O，SCN。其杀菌力虽较OSCN为强，但极不稳定，存在时间太短
6、，所以保鲜的效力仍然减弱。当提供的H，O，为等摩尔时，LPS的抗菌作用在定限度内和SCN浓度呈正相关。应用此法保鲜时，需要添加SCN以保证奶内具有的SCN水平达到所需求的抗菌作用。5 保鲜剂的制备5. 1 保鲜剂为硫氨酸销和过氧化氢或过碳酸纳组成，硫氨酸纳和过氧化氢须分别不低于GB2168和GB 6684中分析纯等级。过碳酸销因缺少国家标准，暂时规定不得低于联合国ECFA第35届会议制订的过碳酸纳规格标准以附录A)。注，) jECFA为联合国粮农组织/世界卫生组织联合食品添加剂专家委员会.5. 2 保鲜剂按形态分国态和液态两种，具有同等保鲜效果。5.2. 1 固态保鲜剂由硫氧酸销和过碳酸纳组成
7、。5.2.1.1 硫氨酸纳添加量z每kg生鲜牛奶加入量15mg。5. 2. 1. 2 过碳酸销添加量z纯度为85%时，每千克生鲜牛奶加入量30.8mgo 5. 2. 1. 3 包装g上述两种药剂必须分开，用食品级半透明塑料膜分别包装，真空封口$或加乳糖等适量的填充剂压成片剂，用水泡眼塑料膜封装防潮。注明药剂名称和重量。5.2.2 液态保鲜剂由硫氨酸销溶液和过氧化氢溶液组成。5.2.2.1 硫氟酸锅溶液配和tl:称取15.0g硫氨酸纳倒入100mL定容瓶内，加蒸馆水50mL摇荡，待溶解后再加蒸馆水至定容瓶J度处，然后将溶液分装无毒塑料瓶或玻璃瓶内，封口.瓶上注明药剂名称和浓度(15g/100 m
8、L)。5. 2. 2. 2 过氧化氢溶液配制:用移液管吸取30%过氧化氢溶液19.6mL，移入100mL定容瓶内加蒸馈水至刻度处，然后将溶液分装无毒塑料瓶或茶色玻璃瓶内，封口。瓶上注明药剂名称和浓度(8.5日/100 mL)。5.2.2.3 以上两种溶液装箱时必须附使用说明，箱上印商品名称、厂名、封箱日期、有效期限、贮存运输时应注意事项(如防潮、防压等。5. 3 液态或固态保鲜剂均应贮藏于阴暗、低温处(35C为宜)。液态保鲜剂须经常用新配制的溶液对照检查其保存牛奶的效力，效力下降时应及时更换。5.4 液态保鲜剂中过氧化氢溶液易分解，在35C冰箱中保存期不应超过两个月，30(;以下室温中不宜超过
9、两周。硫氨酸销溶液在35C冰箱中贮藏4个月或室温中贮藏3个月都不会影响保鲜效果。固61 (1 GB/T 15550-95 态保鲜剂中硫佩酸纳太易潮解，加工片剂时应注意工艺问题。用胶囊分装的硫氨酸纳离开密封袋后，室温内贮存朔不宜超过3个月。6操作方法 6. 1 在奶中加入硫佩酸销，回态、液态均可，但只能用种，不可二者同时都用。加入剂量2如固态，则依照5.2.1.1项规定办理，如液态则用5.2. 2. 1项配制的硫氨酸钢溶液每10kg奶中加1.0 mL.然后用洁净的搅拌器搅拌约1mn，使其混合均匀。6. 2 在奶中加入过碳酸销或过氧化氢，两者之中同样也只能加一种。如入剂量2加过碳酸锅须依照5.2.
10、1.2项规定办理g加过氧化氢则用5.2. 2. 2项配制的过氧化氢溶液每10kg奶中加1.0 mL。再搅拌2,._ 3 min，使其完全溶解并均匀分布于生鲜奶中。6. 3 硫氟酸销和过碳酸销(或过氧化氢添加时必须依照上述先后次序分别进行，不可颠倒，也不可以先混合，后加入或同时加入。6. 4 添加保鲜剂应在奶挤出后2或3h之内进行。7 使用的规定7. 1 牛奶收购中心(站)、点或奶牛场因无冷却设施，或其他原因，必须用本方法处理生鲜牛奶，否则奶即会腐坏时才使用.7.2 本方法不能让个体农民、牧民自己操作，只能在收奶中心、收奶点和国营农牧场使用。操作人员必须经过培训，考试及格者方能上岗。使用本办法处
11、理过的生鲜牛奶在向乳品加工厂交售时必须进行说明.7.3 乳品厂加工搜集来的经过LPS方法处理的生鲜牛奶.应按照本方法的规定使用。乳品厂应建立有适当的控制方法(详见8章)，以监督检查本方法的应用。7.4 本方法抑菌的效果决定于奶的贮存温度。卫生等级好的生奶在不同的贮存温度条件下，用LPS方法保鲜的有效时间见表1, 表I贮存温度，C 有效保鲜时间30 7-自h25 11-12 h 20 16-17 h 15 24-26 h 10 48 h左右3-5 5-7昼夜7. 5 应用LPS方法保存的生鲜牛奶，饮用和加工前必须经过加热消毒。7.6 应用LPS方法保存生鲜牛奶单位须不排除应用正常的预防措施和管理
12、常规以保证生鲜牛奶的良好质量及卫生标准.8 使用的控制l8. 1 在采用LPS保存生鲜牛奶方法实施地区，乳品厂收奶时必须进行控制检测.如酸度滴定，美兰测定，活菌总数测定和SCN浓度测定等。611 GB/T 15550-95 8.2 因SCN-在反应中没有消耗，用LPS方法处理的奶送达乳品厂时.SCW浓度应为10.74ppm+奶中天然SCN浓度后者可以测定当地未处理的鲜奶求得。8.3 应不定期地随机采取奶样测定SCN浓度.测值超出规定范围，必须查明原因，情节严重者应拒绝收奶.8.4 保鲜剂药品应由乳品厂统一定购和分发，并负责监督检查.612 GB/T 15550-95 附录A过高睡酸铀技术规格要
13、求补充件)我国尚无这种化学试剂的国家标准.参考联合国J耳FA第35届会议制订的过碳酸纳规格标准要求如下:A1 别名s碳酸纳过氧水化物，过氧碳酸锅。A2定义z化学名称过碳酸锅C. A.S编号:15630-89-4 化学式:2Na,CO, 3H,0 , 相对分子质量:314.0 分析纯度g有效氧不少于13%(相当纯度85%)A3 说明g干燥、白色、结晶细粉末状.注意z为强力氧化剂，应避免接触眼睛和皮肤。A4 功能和用途z抗微生物增效弗(乳过氧化物酶/硫氨酸盐/过氧化物抗微生物的生奶保鲜体系的组成部分) A5 特性gA5.1 鉴定测试z溶解度z易溶于水(商业品溶液不清澈)险度:pH为10.5左右(1
14、%榕液)纳的检测g阳性通过A5.2 纯度测试z碑:不超过3mg/kg 重金属s不超过10mg/kg(如Pb)A6分析方法zA6.1 程序:用量筒仔细加100mL硫酸榕液。(H，SO，)= 1. 8 mol/L)于600mL烧杯中，用称样皿(tared watchglass)准确地称取大约4g样品。设此样品重量为mg.将称样皿放入烧杯中，烧杯上盖一表玻璃(clockglass) .摇匀，使样品溶解。将溶液移入-500 mL容量瓶中，用蒸馆水冲洗表玻璃和烧杯壁，并将冲洗液全部倒入容量瓶中，再用蒸馆水稀释至刻度处，充分混合。取100mL硫酸溶液(c(H，SO，)= 1. 8 mol/L)加入-600
15、 mL锥形烧瓶中，并加高锺酸饵溶液MtkMn0卢0.1mo阳滴定至呈现暗淡持久粉红色。用安全移液管加入25.0mL样品溶液并充分混合囚用高锺酸饵溶液MtKMn04)tOImoi/L滴定至再呈现暗淡持久粉红色。设滴定结果为VmL。A6.2 计算样品中有效氧的含量计算如式(A1): 有效氧(如02%=Vx c X 8 X 500 X100=E三二三上主. .( A1 ) 10 X 1 000 X 25 X m 式中:c一一高锺酸饵榕液之物质的量浓度，mol/L，m 样品重量.g，V一一高锺酸饵溶液之用量，mL. 613 GB!T 15550-95 附录B奶中辘.圈盐(SCN-)的分析(补充件)B1
16、 原理2奶经过分离脱脂，加入三氯乙酸(TCA)脱蛋白后，再加入离铁复合物，在460nm波长下，测定吸光度，可测出其中SCW含量，可测定出最小的浓度为12ppm。B2 试剂溶液B2. 1 20 % (m!V)三氯乙酸(TCA)溶液.用20gTCA(分析纯溶于100mL蒸馆水中，过滤即得。B2. 2 硝酸铁试剂g取16.0克硝酸铁CFe(NO，)， 9H20J(分析纯)溶解于50mL硝酸溶液。但NO，)=2 mol/L)中，用蒸馈水稀释至100mL。配好的溶液应贮存于黑暗冷凉地方。注，1)硝酸溶液Cc(HNO，)2mol/Ll之配制法g取138.5毫升65%HNO, (分析纯用燕偏水稀释成1000
17、 mL. B3 测定.取4mL奶离心脱脂后加入2.0mL20%TCA溶液，混合均匀后，静置(最好在35.C冰箱内不少于30分钟，然后过滤。取消澈的滤液1.5 mL加入1.5 mL硝酸铁试剂，混合后，在460nm波长下测定吸光度，同时用1.5 mL硝酸铁试剂加蒸馆水1.5 mL混合均匀后做空白对照。测定必须在加入硝酸铁试剂后10min之内进行.因为颜色复合物不稳定，稍久即变.将所得结果与56个已知的不同浓度(如5、10、15、20和30ppm)的SCN溶液用同样处理所得结果标准)相比，即可求出奶中SCN-的浓度。附加说明g本规范由中华人民共和国农业部提出。本规范由中国农业科学院畜牧研究所起草。本规范主要起草人王鹏.本标准参照采用联合国食品法典委员会(CAC)批准的国际奶联(IDF)制订的利用乳过氧化物酶体系保存生奶实施规范和粮农组织/世界卫生组织联合食品添加剂专家委员会(JECFA)第35届会议(1989)制订的C.A. S 15630-89过碳酸纳规格标准儿614
