1、GB/T 16345-1996 前古口本标准非等效采用居外标准。本标准的附录A是提示的附录。本标准由卫生部卫生监督司提出。本标准负责起草单位z卫生部食品E生监督检验所F参加起草单位z北京市卫生防疫站、中国预防医学科学院环境卫生监测所。本标准主要起草人t杨祖英、张平伟、孙津、姚孝元、郑兰液。本标准自卫生部委托技术阳口单位卫生部食品卫生监督检验所负责解释。中华人民共和国国家标准G/T 1 6345 -1 996 饮料中乙酷磺胶酸铮(安赛蜜)的测定Determination of acesulfame K in bererage 1 范围本标准规定了饮料中乙酿磺胶酸押的测定方法。本标准适用于汽水、可
2、乐型饮料、果汁、果茶等食品中乙酷礁胶酸锦的测定。也适用于糖精铀的测定。本法取样量为2.5g时，最低检ili限为乙酷磺胶酸饵、糖精纳各50mg/kg(L)。2 原理样品中乙酷磺腰酸梆、糖精纳经高效液相反相柱C18分离后，以保留时间定性，峰高或峰面积定量。3试剂有机溶剂需熏蒸。3. 1 甲醇:分析纯。3. 2 乙睛:分析纯。3. 3 O. 02 mol/L硫酸镀榕攘:称取硫酸镀2.642g，加水溶解至1000 mL。3.4 硫酸溶液:10%。3. 5 中性氧化铝:屋析用，100200目。3.6 乙酷磺黯酸饵、糖精纳标准储备液:精密称取乙酷磺胶酸饵、糖精锅各0.1000 g，用移动相溶解后移入100
3、mL容量服中，并用移动相稀释至刻度，即含乙酷磺按酸饵、糖精纳各1mg/mL的溶液。3. 7 乙酌磺牍酸僻、糖精纳标准使用液:吸取乙酷磺腰酸愣、糖精纳栋准储备被2mL于50mL容量瓶，加移动相至刻度，然后分黠吸取此液1mL、2mL、3mL、4mL、5mL于10mL容量瓶中，各加移动相至刻度，即得各含乙勤磺胶酸挥、糖精饷0.004mg/mL、0.008mg/mL、0.012mg/mL、0.016mg/mL、0.020 mg/mL的、混合标准液系列。3. 8 移动棺:0.02mol/L硫酸镀(740800mL) +甲醇(170150mL)+乙精(9050mL)十10%H2S04(1 mL)。4 仪器
4、4. 1 高效液相色谱仪。4.2 届声清洗仪(溶剂脱气用)。4.3 离心矶。4.4 抽滤瓶。4.5 G3耐酸漏斗。4.6 微孔捷膜:0.45m。4.7 层析柱，用10mL注射器筒代替较好，内装3cm高的中性氧化铝。中华人民共和国卫生部1996-06-19批准1996-09-01实施G/T 16345-1996 5 分析步骥5. 1 样品处理5. 1. 1 汽水:梅样品温热，撞拌除去二氧化碳或超声脱气。吸取样品2.5mL于25mL容量瓶中。如移动相至揭度，摇匀后，溶被通过微孔捷膜过墟，撞戒备作HPLC分析用。5.1.2 可乐型饮料:将样品握热，搅拌除去二氧化碳或超声脱气，吸取日除去工氧化碾的样品
5、2.5mL , 通过中性氧化铝柱，待样品液流至柱表面对，用移动相洗脱，收集25mL洗脱攘，摇匀后超声脱气，此液备作HPLC分析用。5. ,. 3 果茶、果汁类食品z吸取2.5mL样品，加水约20mL tl昆匀后，离奇15min(4 000 r/min)，上清液全部转入中性氧化铝柱，待水溶液流至柱表面时，用移动相挽脱，收集搅脱液25mL.握匀后，超声脱气，此被作HPLC分析用。5.2 测定5.2. HPLC参考条件分析柱:Spherisorb C18、4.6mmX150 mm，粒度5m.移动相:0.02 mol!L硫酸镀(740800mL)+甲醇(l70150 mL)十乙精(9050mL)十10
6、%H2S04(l mL)。披长:214nm. 流速:0.7mL/mino 5.2.2 标准曲线:分别进含乙酷确脏酸僻、糖精铀0.004mg/mL、0.008mg/mL、0.012mg/mL、0.016 mg/mL、O.020 mg/mL t昆合栋准溶液各10L，进行HPLC分析，然后以峰菌积为纵坐标，以乙酷璜按酸饵、糖精铀的含量为横坐标.!l!J标准曲线。5.2.3 样品测定:进5.1项下的样品处理后的样品潜液10L，瓣定其峰面积，从标准曲线查得测定液中乙酷磺胶酸押、糖精铀的量。HPLC色i普雷如下z2 3 1 乙航磺胶酸御，2糖精销，3一咖啡因川一天门冬院苯丙氨酸甲醋图1HPLC色谱图6 结
7、果6. 1 计算GB/T 1 634 5 -1 996 c X 1 000 X=HH. ( 1 ) V. m X V X 1 000 式中:X一一样品中乙酷磺胶酸押、糖精铀的含量.g/kg(g/L); c一一由栋准曲线上查得进样液中乙酷磺胶酸伸、糖精铀的含量.mg/mL;Vj一一样品稀释被总体积.mL;V2一-HPLC测定时进样的体积.mL;m一一样品质量.go6.2 检出限仪器检出限O.04g;方法检出限:乙酷磺胶酸饵、糖精纳各0.004mg/mLCg).标准曲线范黯乙酷磺胶酸伸、糖精纳各为O.004 mg/mLO. 020 mg/mL。方法回收率为88.0%105%，平均回收率为92.12
8、%、Sx=4.8.棺对标准差CR.S. D)=5. 0%。A1 方法评价GB/T 16345 1996 甜录A(提示的附录)方法评价本标准规定了用高效被相法测定饮料中乙酌磺胶酸挥、糖精锅，并能同时测定咖啡因、天门冬酷苯丙氨酸甲醋，且简化样品处理，国内外未见同时测定这四种物质的报导。A2 方法验证A2.1 性层析慌脱掖的研究样品通过中性氧化铝小柱后，比较了水、移动相两种洗脱剂，结果表明水不能洗脱乙曹先磺胶酸饵、糖精锵，而移动相能洗脱乙酷磺胶酸挥、糖精锅、咖啡因、天门冬酌苯丙氨酸甲醋。A2.2 乙酷确胶酸押、糖精铀在中性氧化铝柱上流出曲线吸取100mg凡的加标乙酣磺牍酸饵、糖精铀的可乐，通过日用少
9、量水润湿的中性氧化铝小柱，然后以流动相搅脱，连续收集7管，每管5mL，用HPLC测定每管中乙酷磺股酸僻、糖精锅量。结果表明，从第4管起均未检出乙酷磺胶酸挥、糖精制。A2.3 HPLC移动相的研究本标准研究了乙酸锻缓冲锻+甲醇、乙酸镀缓冲被+异丙醇系统，硫酸镀缓冲液十甲醇系统，试验结果表明疏酸镀缓冲液+甲醇系统能分离乙酷璜腰酸伺、糖精纳、咖啡困、天门冬酷苯丙氨酸甲醋。见表A1。表A1移动相试验表Rt 移动相乙酸磺胶酸绑糖精俐咖啡因天门冬酷苯丙氨酸甲酶0.02 mol/L硫酸镀+甲醇十10%硫酸(1)700十300十13.010 3.637 9.002 10.870 (2)720十280十12.8
10、70 3.479 11. 197 13.582 (3)750+ 250+ 1 3.292 4.622 13.960 16.320 0.02 mol/L硫酸镀+甲醇+乙脂+10%硫酸(4)750+ 200+50+ 1 3.329 4.435 9.734 14.52白(5)740+ 170+90+ 1 3.969 5.050 9.915 15.620 从表A1看出移动相(5)较好。A2.4 标准酣线在试验条件下.取不间破度的乙酷磺股酸梆、糖精锅混合标准使扉液O.004 mg/mL、0.008 mg/mL、0.012mg/mL、0.016mg/mL、O.020 mg/mL，各进掉10L，进行HPLC
11、分析，然后以峰面积对乙蘸磺殷酸钢、糖精铀放度作图，画标准曲线。乙酌确肢酸饵的E归方程为r=0.998，Y=99264.4十3.34XI07X;糖精铀的回归方程为r=0.998，Y且161944+7.26X 10X。乙酌磺胶酸饵、糖精锅的线性遗围是OO.020 mg/mLo A2.5 回收试验选择不含乙酷横股酸愣、糖精铀的汽水、果汁、果茶进行加标试验，分别加入50mg/L , 100 mg/L的GB/T 16345-1996 两个不同浓度，依法操作，栅得回收率为88%105%.平均回收率为92.12%.Sx口4.8.相对标准差(R.S.D)=5.0%。A3 验证结果本标准委托北京市卫生防疫站、中国预防医学科学院环境卫生监测所验证，验证时采用巳加入100 mg/L的乙酷磺胶酸钢、糖精铀的可乐饮料为统一样品。两单位平均测得值为:乙酷璜胶鼓愣浓度为105.6 mg/L.回收率为105.6%.Sx =4.97.相对标准建(R.S. D)为4.71%;糖精锵测得浓度为98.3 mg/L.回收率为98.3%.Sx =2.45.柜对标准差(R.S.D)为2.49%。
