1、GB/T 16346一1996本标准非等效果用国外标准。本标准的附录A是提示的附录。本标准由卫生部卫生监督司提出。前本标准负责起草单位:卫生部食品卫生监督检验所;参加起草单位t河北省卫生防疫站、部晦市卫生防疫站。本标准主要起草人:杨祖英、李良学、焦淑婷、王平、贾丽华。本标准由卫生部委托技术归口单位卫生部食品卫生监督检验所负责解释。中华人民共和国国家标准食品中诱惑红的测定GB/T 16346 -1996 Determination of allura red in foods 1 范围本标准规定了食品中诱惑红的腿走方法。本标准适用于糖果包衣等食品中诱惑红的栅定。本方法的取样量10g时，最低检出限
2、为25mg/kg。2 原理诱惑红在酸性条件下被聚酷胶粉吸附，而在碱性条件下解吸附，再用纸色谱法进行分离后，与标准比较定性、定景。3试J3. 1 石油酷:沸程30-60C。3. 2 甲醇。3. 3 聚酷牍粉(尼龙的:200目。3. 4 硫酸:1+10。3.5 氮氧化销:50 g/L。3.6 海沙:先用盐酸0+10)煮沸15min.用水洗至中性，再用氧氧化纳(50g/L)煮沸15min.用水洗至中性，再于105C干燥，贮子具塞瓶中保存，备用。3. 7 乙醇榕液:50%(V /V)。3. 8 乙醇-氨溶液:取2mL的氨水，加70%(V /V)乙醇至100mL 3.9 pH6的水:用20%的拧穰酸娓烹
3、pH603. 10 拧穰酸溶液:200 g/L。3. 11 鸽酸纳搭液:100 g/L。3. 12 诱惑红的标准溶掖:准确称取0.025g诱惑红，加水溶解，并定容至25mL.即得1mg/mL。3. 13 诱惑红的际准使用洛液:吸取诱惑红的标准榕被5.0mL于50mL容量瓶中，加水稀释到50 mL.即得0.1mg/mL。3. 14 展开剂3. 14. 1 丁酣+丙隅+水+氨水(7+3+3+0.5)。3.14.2 正了醇+无水乙醇+1%氨水(6+2+3)。3.14.32.5%拧穰酸锅十氨水十乙醇(8十1十2)。3.15 仪器3.15.1 可见分光光度计。3.15.2 微量注射器.10、50L。3.
4、15.3 展开槽。中华人民共和理卫生部1996-019批准1996-001实施3.15.4 电吹风机。3.15.5 捧纸:中速滤纸，纸包谱启。3.15.6 恒温水浴锅。3.15.7 台式离心机。4 分析步骤4. 1 样品的处理GB/T 16346-1996 4. 1. 1 汽水:将样品加热去二氧化碳后，称取10.0g样品于烧杯中，然后用20%拧攘酸调pH景酸性，加入O.51. 0 g聚酷胶勒吸附色素，将吸附色素的架酷腊粉全部转到漏斗中过滤，用pH4的酸性热水洗襟多次(约200mL)，以洗去糖等物质。若有天然色素，用甲醇甲酸溶破洗揉13次，每次20mL，至洗穰无色为止。再用70C的水多次陇海至流
5、出液中性。洗海过程必需充分搅拌然后用乙醇氨溶液分次解吸色素，收集全部解吸壤，于水洛上躯除氨，蒸发至2mL左右，转入5mL的容量瓶中，用50%的乙醇分次洗涤蒸发皿，洗涤模并入5mL的容量瓶中，用50%的乙醇定容至刻度。此被留作纸色谱用。4. 1. 2 硬糖1称取10.0g的己粉碎的样品，加30mL的水，洒热榕解，若样品潜液的pH值较高，扉拧攘酸溶液(3.10)调至pH4左右。以下操作从加入0.51.0g聚酷股粉暖附色素起，接4.1. 1条操作。4.1.3 糕点:称取10.0g己粉碎的样品，加入30mL石油酷提取脂肪，共提三次，然后用电吹风吹干，倒入漏斗中，用乙醇-氮擂掖解吸色素，解吸被于水浴上蒸
6、发至20mL，加入1mL的鹊酸销薛液沉淀蛋白，真空抽墟，用乙醇-氨将军被解吸油纸上的诱惑红，然后将捷液于水浴上挥去氨，调pH呈酸性，以下从加入0.51.0 g聚酌黯粉吸附色素起，按4.1. 1条操作。4.1.4 冰棋淋:称取10.0g已均匀的样品于烧杯中，加入20g海沙，15mL石油酷提取脂肪，提取2次，倾去石油酶，然后在500C的水椅上挥去石油酶，再加入乙醇-氨榕商解吸诱惑红，解吸液倒入100mL的蒸发皿中，直至解吸搜无色。将解吸榄于水浴上挥去乙醇，使体棋约为20mL时，加入1mL硫酸。十10) , 1 mL鸽酸纳溶液沉淀蛋臼，放置2min，然后用乙醇-氨溶被调至pH呈碱哇，将溶被转入离心管
7、中，5000 r/min，离心15min，倾出上清掖，于水踏上挥去乙醇，然后用拧攘酸搭液(3.10)调pH呈酸性，以下自加入0.5-1.0g聚酷腹粉吸附色素起，按4.1.1条操作。4.2 定性取色谱用纸，在距底边2cm起始线上分期点310L的样品处理坡、1mL色素标准液，分别挂于盛有3.14. 1、3.14. 2、3.14.3展开剂的展开槽中，用上行法展开，待溶剂前沿展至15cm处，将掳纸取出空气中晾干，与栋准斑比较定性。4.3 定量4. 3. 1 标准曲线的制备吸取0.0、O.2、0.4、O.6、0.8、1.0 mL诱惑红标准使府瞧，分别置于10mL比色管中，各加水稀释到刻度。用1cm比包杯
8、，以零管调零点，于被长500nm处，测定吸光度，绘棋标准曲线。4.3.2 样品的测定取色谱用纸，在距离践边2cm的起始线上，点0.20mL样品处理掖，从在至有点成条状。纸的右边点诱惑红的标准浩掖1L，依法展开，取出晾干。将样品的色带剪下，用少量热水挽搔数次，洗掖移入10 mL的比包管中，加水稀释至黯度，海匀后，与郭准管同时在500nm处，测定吸光度。5 结果5. 1 计算:x= _A X 1 000 t . ( 1 ) m X VdV1 X 1 000 式中:x一一一样品中的诱惑红的含量，g/kg;GB/T 16346-1996 A一一测定用样品中诱惑红的质量，mg;m 样品质嚣，如V1 -样
9、品解吸后总体积，mL;V2 样品纸层析用体积，mLo结果的表述:报告算术平均值的二位有效数字。5.2 栓出限:纸色谱最低检出限2吨。方法最低检出限为25mg/峙，标准曲线线性范围为O12mg/L，方法回收率为82%99%，相对标准差为2.8%。A1 方法原理GB/T 16346 1996 甜景A(提示的附录)方法评价样品中的诱惑红以聚酷脏粉吸附，经乙醇氨溶被解析处理，用纸色谱进舒分离后，与标准比较进行定性、定量。A2 方法评价本方法最低检出限为25mg/kg，添加J糖果、汽水、糕点、冰漠淋25mgo/挝、50.mg/怡、100mg/峙的诱惑红时，其平均回收率82%99%，相对标准差为2.8%。
10、A2.1 展开剂的选择本标准试验了3种展开剂，即3.14. 1 , 3. 14. 2和3.14.3。经试验，发现展开剂3.14.1可以将诱惑红与目前我国允许使用的几种红色素分开。但不能分离诱惑红与亮蓝。展开剂3.14.3可以分离诱惑红与亮蓝，见表Al.表A1展开剂分离着色剂情况表诱惑红克莱红服脂红赤面军红亮蓝tE蓝日落黄拧橡黄展开剂3.14.10.68 0.36 0.42 0.82 0.69 0.48 。.620.31 展开剂3.14.20.38 。.150.23 0.30 。.300.05 展开剂3.14.30.47 0.40 0.62 0.22 0.96 0.56 0.67 A2.2 最大
11、吸收波长的选择z以20吨/mL的诱惑红溶液，用1cm比色地，定搜长440nm-560 nm的吸光度，以吸光度为纵坐标，以波长(nm)为横坐标，面吸收曲线，求得资惑红的最大吸收被长为500nm。A2.3 诱惑红标准曲线z诱惑红在0-12mg/L的范围内符合浪由比尔定律，成直线，其线性关系的回归方程式为Y=0.0023十0.5132 X ,Y=O. 999 9,a=0. 002 3,b=0. 5132 0 A3 方法验证结果本标准委托词北省卫生防疫站、嘟嘟市卫生防疫站验证，验证单位为糖果、饮料、糕点、冰琪淋各拥100 mg/kg诱惑红，每种样品两个单位各测3份结果，测得回收率为83%-101%，其实验室间的重复性Y=ll. 54，再现性R=18.48，三个实验室所有数据经科克伦法和狄克逊法栓验，未发现异常值，都可以接受。方法的精密度符合要求。
