1、ICS 65120B 46 a雪中华人民共和国国家标准GBT 1 9542-2007代替GBT 19542-2004饲料中磺胺类药物的测定高效液相色谱法Determination of sulfonamides in feeds-High-performance liquid chromatography2007-06-2 1发布 2007-09-0 1实施宰瞀职紫瓣警瓣瞥翼发布中国国家标准化管理委员会厘111前 言GBT 1 9542-2007本标准是GBT 195422004饲料中磺胺二甲基嘧啶和磺胺间甲氧嘧啶的测定高效液相色谱法的修订版。本标准与GBT 19542-2004主要差异如下：
2、补充了磺胺嘧啶、磺胺喹恶啉、磺胺甲恶唑三种磺胺药物的测定；增加了净化步骤。本标准自实施之日起代替GBT 19542-2004。本标准由中华人民共和国农业部提出。本标准由全国饲料工业标准化技术委员会归口。本标准起草单位：国家饲料质量监督检验中心(北京)。本标准主要起草人：李兰、杨曙明、索德成、田河山、范理、赵根龙。本标准所代替标准的历次版本发布情况为：GBT 19542-2004。饲料中磺胺类药物的测定高效液相色谱法GBT 19542-20071范围本标准规定了用高效液相色谱仪测定饲料中磺胺类药物：磺胺嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺甲恶唑、磺胺喹恶啉含量的方法。本标准适用于配合饲料、
3、浓缩饲料、添加剂预混合饲料中磺胺类药物的测定。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GBT 6682分析实验室用水规格和试验方法GBT146991饲料采样3原理试样中磺胺类药物经乙腈振荡提取后，用碱性氧化铝小柱净化，注人高效液相色谱仪反相色谱系统中进行分离，用紫外检测器或二极管矩阵检测器检测，外标法计算磺胺类药物的含量。注；该方法最低定量限分别为t磺胺嘧啶、磺胺问甲
4、氧嘧啶5 mBkg，磺胺二甲基嘧鸵、磺胺甲恶唑、磺胺喹恶啉2mgkg。4试剂和溶液除非另有规定，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和符合GBT 6682规定的三级用水。41冰乙酸：优级纯。42乙腈：色谱纯。43乙腈：分析纯。44甲醇：色谱纯。45流动相：在1 000 mL容量瓶中加入750 mL去离子水，移取冰乙酸(41)3 mL加入水中，与250 mL乙腈(42)混合、摇匀，过o45 pm滤膜，脱气，备用。46磺胺嘧啶标准品：纯度应大于97。47磺胺二甲基嘧啶标准品：纯度应大于97。48磺胺间甲氧嘧啶标准品：纯度应大于97。49磺胺甲恶唑标准品：纯度应大于97。410磺胺喹恶啉标准品：纯度应大
5、于97。411磺胺嘧啶标准溶液4111磺胺嘧啶标准贮备液：准确称取已知纯度的磺胺嘧啶标准品100 mg，精确至0000 l g，置于100mL棕色容量瓶中，加乙腈(42)超声使之完全溶解，并定容至刻度，摇匀，该溶液中磺胺嘧啶浓度为1 mgmL，于一16保存可使用6个月。4，112磺胺嘧啶标准中间液：准确移取磺胺嘧啶标准贮备液(41】1)5mL于50mL棕色容量瓶中，用乙腈(42)定容至刻度，该溶液中磺胺嘧啶浓度为100,ugmL，于4保存可使用1个月。】GBT 19542-20074113磺胺嘧啶标准工作液：准确移取磺胺嘧啶标准中间液(4ii2)5 mL于50 mL棕色容量瓶中，用流动相(45
6、)定容至刻度，该溶液中磺胺嘧啶浓度为i0-gmL，当日使用。412磺胺二甲基嘧啶标准溶液；配制过程同磺胺嘧啶。413磺胺间甲氧嘧啶标准溶液：配制过程同磺胺嘧啶。4。14谈胺甲恶唑标准溶渡：配制过程同磺胺赡啶。415磺胺喹恶啉标准溶液4151 磺胺喹恶啉标准贮备液：准确称取已知纯度的磺胺喹恶啉标准品i00 mg，精确至0000 l g，置于i00 mL棕色容量瓶中，加甲醇(44)超声使之完全溶解，并定容至刻度，摇匀，该溶液中磺胺喹恶啉浓度为1 mgmL，于一1 6保存可使用6个月。4152磺胺喹恶啉标准中间液：准确移取磺胺喹恶啉标准贮备液(4151)5 mL于50 mL棕色容量瓶中，用乙腈(42
7、)定容至刻度，该溶液中磺胺喹恶啉浓度为100zgmL，于CC保存可使用1个月。4153磺胺喹恶啉标准工作液：准确移取磺胺喹恶啉标准中间液(4152)5 mL于50 mL棕色容量瓶中。用流动相(45)定容至刻度，该溶液中磺胺喹恶啉浓度为i0,ugmL，当日使用。注：着单独罚定各组分也可配制标准工作液使测定组分的浓度在20 ng100 ng之间。416磺胺类药物混合标准工作液分别移取磺胺类药物标准中间液各5 mL于50 mL棕色容量瓶中，用流动相(45)定容至刻度，该溶液中磺胺药物的浓度均为i0 FgmL，当日使用。注：若同时测定可配制混合标准工作液。5仪器51实验室常用仪器设备。52具塞锥形瓶：
8、150 mL。53振荡器。54高效液相色谱仪：紫外检测器或二极管矩阵检测器。55针头过滤器：备孔径为045,um有机微孔滤膜。56碱性氧化铝SPE小柱：1 000 mg12 mL、120A。6试样的选取和制备61按GBT145991采样。62选取有代表性饲料样品至少500 g，四分法缩减至i00 g，磨碎，全部通过40目筛，混匀，装入密闭容器中，避光低温保存，备用。7分析步骤71试液的制鲁711提取称取配合饲料、浓缩饲料、添加剂预混合饲料样品2 g(精确至0001 g)，置于具塞锥形瓶(52)中，加入50 mL的乙腈(43)，于振荡器(53)振荡提取30 rain，过滤，滤液备用。712净化准
9、确吸取试液(711)：配合饲料10 mL20 mL；浓缩饲料、添加剂预混合饲料2 mL，移入用10 mL乙膪淋洗过的碱性氧化铝小柱(55)中，令其自然流速流出。待试渡(711)全部漉出后，吹于，用两次2 mL流动相(45)洗脱，收集洗脱液，并过045zm的滤膜，滤液上机测定。72色谱条件721色谱柱：具有C，e填料的柱子(粒度为5 pm)，柱长250mm，内径46mm。2GBT 19542-2007722流动相：25乙腈水(45)，以10 mLmin流速洗脱。723进样量：20“L。724检测器：紫外检测器或二极管矩阵检测器，检测波长270 nm。若单独测定磺胺嘧啶检测波长为268 nm；磺胺
10、二甲基嘧啶检测波长为266 nm；磺胺间甲氧嘧啶检测波长为271 11m；磺胺甲恶唑检测波长为268 nm；磺胺喹恶啉检测波长为246 nm。8定量测定按高效液相色谱仪说明书调整仪器操作参数。向液相色谱柱中注入待测定磺胺标准工作液或混合标准工作液(416)及试样溶液(71)，得到色谱峰面积响应值，用外标法定量。9结果计算91试样中每种磺胺的含量分别按式(1)计算： 一号黼m一i对再了 “式中：，试样中每种磺胺的含量，单位为毫克每千克(mgkg)Pi试样溶液峰面积值；v样品的总稀释体积，单位为毫升(mL)；Ci标准溶液浓度，单位为微克每毫升(-gmL)y。标准溶液进样体积，单位为微升(pL)；P。标准溶液峰面积平均值；m试样质量，单位为克(g)y试样溶液进样体积，单位为微升(pL)。92平行测定结果用算术平均值表示，保留三位有效数字。10 I复性同一分析者对同一试样同时两次平行测定结果的相对偏差不大于10。
