1、ICS 65. 120 B 46 届国和国国家标准-=H工-、中华人民GB / T 23877-2009 饲料酸化剂中拧橡酸、富马酸和乳酸的测定高效液相色谱法Determination of citric acid , fumaric acid and lactic acid in feed acidifier一High performance liquid chromatography 2009-05-26发布中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会2009-10-01实施发布GB/T 23877一2009前本标准的附录A为规范性附录，附录B为资料性附录。本标准由全国饲
2、料工业标准化技术委员会(SAC/TC76)提出并归口。本标准起草单位z上海市饲料质量监督检验站、上海市农业科学院农产品质量标准与检测技术研究所。本标准主要起草人z赵志辉、黄志英、顾赛红、杨海锋、林蔬、自冰、雷津、凤慰熙。山ytitilid-iytaa唱|414441414tIZ呼J遁i、，1431!lli-1!i1川可飞pdvtht晴I l EVKB匠，K怪v再EVEEFEKUPr(;8/1、23877-2009l 范围饲料酸化剂中拧橡酸、富马酸和乳酸的测定高效液相色谱法本标准规定了测定饲料酸化剂咿忏摆醋、富马酸和手L眼含暨峙州相色谱法，本标准适用于饲料酸化剂*拧悻酸、茂，坠融响制悔的测定.本
3、方法的定量限为r拧.1暗8001g/kg、富马酸8.0mg/高唱酸il1!1g/kg2 规范性引用文件 3 原理4 试剂和材料传仪进行测定.夕|、除非另有说明4. 1 乙睛:色谐纯。4.2 磷陆z包谱tL出现.定俨!水.4. 31四/瞅瞅:阳l. ()lJ mL盹融(4.G) ，周符合巾，丁b2础理的结1+J;J磁m-)1-i二谷主1 000 mL. 4. 4 拧l*般号Xt品:纯度卢日飞.5%/ 4. 5 宵马酸标准品:纯度注9D.3*4.6 拧出融标准陆如;在:准确辑11)(拧1i憾事且庵品。.5吨F零f5u rnL在培瓶中.JI:j水;在解十足咨主失1皮.此帘j在浓度为lr.G m g.
4、 mL.-t飞在创刊即在.保存期3个月。4. 旨马酸标准情得掖z准确称取1).10扩.g富吨般标准品于100mL容量瓶中，用水溶解到足:j.主纠皮.此i苦地除度为1.0 mA( IHL.,! -c条!下F附蒲.保存期3个月。4. 8 !fLI交际准储备Pt:制备在1际主方法见附录八.4.9 Lt合际i住储备谊z取10.0mL拧tj:股标准i迦备液(4.的，1.0 mL富马酸标准储备搜(-1.门和1UIld. 乳酸标准储备浓(L8l于=0mL容量JIIi中.用水定容至J度.混匀。4.C条件下储藏，保存期1个J.J. 4. 10 昆合标准工作破:准确吸取O.1U mL、0.25mL、O.50 mL
5、、1.00 mL、2.50 mL、5.00 mL 10. 00 1址，泪合体也储备淑(1. 9)于10.,) mL夺最瓶中，用水定容至刻度，棍匀。此为1昆合标准工作液.现配现用合GB/T 23877-2009 5 仪器和设备5. 1 实验室常用仪器设备。5.2 分析天平:感量为0.0001 g。5.3 超声波清洗器。5.4 微孔捷、膜z孔径0.45m.5.5 高效液相色谱仪配有紫外检测器或二极管阵列检测器)。6 试样的制备按GB/T14699. 1规定，取有代表性的样品1kg，四分法缩减取200g，装人磨口瓶中备用。7 分析步骤7. 1 试样溶液制备称取试样1g5 g(精确至0.0001 g)
6、，置于100mL容量瓶中，加60mL水，在50.C水浴中超声提取20min，冷却至室温，用水定容至刻度，摇匀，过滤。取滤液稀释，使最后稀释液中各种有机酸的浓度均落在4.10的工作曲线之内。取部分稀释液过0.45m滤膜，滤液作为试样溶液。7.2 高效液相色谱条件色谱柱:C18柱，长250mm，内径4.6mm，粒度5m(极性色谱柱)。柱温:35.C。流动相:乙腊+磷酸溶液(4.3)=2.5+97.5(体积比。流速:1. 0 mL/ min. 检测波长:210nm。进样量:20L。7.3 渡相色谱测定分别取混合标准工作液(4.10)和试样溶液(7.1)，按7.2列出的条件进行液相色谱分析测定。以混合
7、标准工作液作多点校准，并用色谱峰面积积分值定量。测定中应调整试样溶液的浓度，使拧撵酸、富马酸和乳酸的积分值分别落在标准曲线的相应范围内。8 结果计算与襄述试样中拧攘酸、富马酸和乳酸的含量X，以质量分数表示，按式(1)计算:cX V x x=X100% . ( 1 ) 式中zC一一由标准曲线得出的试样液中拧橡酸或富马酸或乳酸的浓度，单位为微克每毫升(g/mL);V一一试样液总体积，单位为毫升(mL);一-稀释倍数Em一一试样的质量，单位为克(g)。测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留3位有效数字。9 重复性在重复性条件下，完成两个平行测定的结果的相对偏差不大于5%。2 GB/T 23877-
8、2009 附录A规范性附景乳国量标准储备溶渡的制备和标定A. 1 试剂和衔A. 1. 1 乳霞，鲍度约为90%.A. 1. 2 O. 1 mol/L氢氧化制标准滴定溶液=按GB/T601配制和标定.A.1.3 1%酣瞰指示剂槽液:1g酣歌溶于60mL 95%乙醇中，用水稀释至100mL. A.2 倪和罐A. 2.1 电热套，500mL. A. 2.2 圃底烧瓶，500mL. A. 2.3 球形降.管:100mL. A.3.备和标定称取乳酸约3.0g于500mL圆底烧瓶中，加270mL水，装上球形冷凝管，接通冷却水，加热回流15 h，冷却至室温.移取20mL榕液，加40mL60 mL水及0.2m
9、L 1%酷敢指示剂，用0.1mol!L氢氧化锦标准滴定溶液滴定至徽红色30s不褪色，记录消耗0.1mol!L氢氧化销标准滴定溶液的毫升数(Vt) 乳醺标准储备液的浓度C.，单位为微克每毫升(g/mL)，按式(A.l)计算zC. = C X (已-Vz) X 90.08 X 式中zc 一一氢氧化销榕液的浓度，单位为摩尔每升(mol!L); V1一一滴定乳酸榕液所消耗氢氧化铀标准滴定溶液的体积，单位为毫升(mL);Va一-空白试验时所消耗氢氧化铀标准滴定溶液的体飘，单位为毫升(mL)，Vo一一乳酸榕液的体积，单位为毫升(mL)，90.08一一乳酸的摩尔质量.此标准储备液在4C下可保存3个月。( A.l ) GB/T 23877-2009 附录B资料性附景拧橡酸、富马酸和乳醺标准晶的色谙圄拧橄酸、富马酸和乳酸标准品的色谱图见图B.1.AU t富马.t1. 0.080 0.070 0.060 乳醺0.050 0. 040 0.030 0. 020 0.010 0.0 1. 00 2. 3. 4.00 5.00 6.00 7. 00 8.00 9. 10.00 11. 12.00 mtn 固B.l标准藩灌色谱圈版钗专有侵钗必究* -兀aa 。-nU J.-nu -aaT uhAV E- 号-价书一定
