1、ICS 65. 120 B 46 中华人民共和国国家标准GB/T 23882-2009 饲料中L抗坏血酸-2-磷酸醋的测定高效液相色谱法Determination of L-a创scor内.旬by泸1-嗣-2，蝇Hi袍ghpe町rfor口.manceli问qu旧lidchro咆oma剖to句graphy2009-05-26发布中华人民共和国国家质量监督检验检夜总局中国国家标准化管理委员会2009-10-01实施发布中华人民共和国国家标准饲料中b抗坏血酸也-磷酸醋的测定高效液相色谱法GB/T 23882-2009 祷中国标准出版社出版发行北京复兴门外三里河北街16号邮政编码:100045网址电话
2、:6852394668517548 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷各地新华书店经销骨开本880X 1230 1/16 印张0.5字数8千字2009年8月第一版2009年8月第一次印刷骨书号:155066 138470 定价14.00元如有印装差错由本社发行中心调换版权专有侵权必究举报电话:(010)68533533GB/T 23882-2009 目。吕本标准的附录A为资料性附录。本标准由全国饲料工业标准化技术委员会(SAC/TC76)提出并归口。本标准起草单位z国家饲料质量监督检验中心(武汉)、北京桑普生物化学技术有限公司、帝斯曼维生素上海)有限公司。本标准主要起草人:屈和j文、施文娟、虞哲高
3、、杨海鹏、何风琴、黄婷。I , 卢范围饲料中L抗坏血酸-2-磷酸醋的测定高效液相色谱法本标准规定了饲料中L-抗坏血酸2-磷酸醋的高效液相色谱检测方法。GB/T 23882-2009 本标准适用于水产用配合饲料、浓缩饲料、添加剂预混合饲料中L-抗坏血酸亿甲磷酸醋含量的测定，方法检出限为2mg/kg(以L-抗坏血酸计)，定量限为10mg/kg(以L抗坏血酸计。2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文
4、件，其最新版本适用于本标准。3 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法GB/T 14699. 1饲料采样GB/T 20195动物饲料试样的制备原理试样中的L-抗坏血酸-2-磷酸醋用磷酸盐缓冲溶液提取，离心，过滤，过滤液用高效液相色谱仪进行测定，外标法定量。4 试剂和溶液除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和符合GB/T6682规定的二级水的水。4. 1 甲醇:色谱纯。4.2 磷酸。4.3 磷酸二氢御。4.4 四了基硫酸氢钱。4.5 磷酸盐缓冲溶液:54 g磷酸二氢饵溶于900mL水中，用磷酸(4.2)调至pH3.0后，用水稀释至1000 mL。4.6 流动相:称取6.8g磷
5、酸二氢饵(4.3)，0.5g四丁基硫酸氢镀(4.4)，置于1000 mL容量瓶中，加入约700mL水，待全部溶解后，加人75mL甲醇(4.1)，用水定容至刻度，摇匀，过0.45m滤膜，超声脱气。4.7 L-抗坏血酸-2-磷酸黯标准储备液(以L抗坏血酸计=100g/mL):准确称取三-环己胶-抗坏血酸-2-磷酸醋Ctris-( cyclohexyl-ammonium) ascorbic acid-2-phosphateJ (C24 H48 N3 09 P纯度99.0%)标准品0.0158 g(标准品以L-抗坏血酸计，换算因子为O.318 4)用磷酸盐缓冲溶液(4.5)溶解并定容于50 mL棕色容
6、量瓶中。保存在4QC冰箱中，有效期一个月。4.8 L抗坏血酸-2一磷酸醋标准工作液:分别移取L一抗坏血酸-2-磷酸醋标准储备液(4. 7) o. 50 mL, 1. 00 mL, 2. 00 mL, 5.00 mL, 10.0 mL置50mL棕色容量瓶中，用磷酸盐缓冲溶液(4.5)定容，即以L抗坏血酸计浓度为1.00g/mL， 2.00g/mL，4.00g/mL，10.0g/mL，20.0g/mL标准工作液。当日配制。GB/T 23882-2009 5 仪器和设备5. 1 高效液相色谱仪，配有紫外或二极管阵列检测器。5.2 离心机:3500 r/mino 5.3 超声波水浴。6 采样按照GB/
7、T14699. 1的规定执行。7 试样制备按GB/T20195制备试样，磨碎，通过0.45mm孔筛，混匀，装人密闭容器中，避光低温保存备用。8 分析步骤8. 1 提取称取一定量的试样含L-抗坏血酸-2-磷酸醋(以L-抗坏血酸计)约1mgJ，精确至0.1mg，置于100 mL容量瓶中，加入约70mL磷酸盐缓冲溶液(4.5)，于超声波水浴中超声处理15min，用磷酸盐缓冲溶液(4.5)定容至刻度(V)。取适量溶液3500 r/min离心5min，离心后上清液经过0.45m滤膜过滤，滤液用于高效液相色谱分析。8.2 测定8.2.1 液相色谱参考条件色谱柱:C18柱，长250mm，内径4.6mm，粒径
8、5m，或性能相当者。柱温:室温。流速:1.0 mL/min。检测波长:250nmo 进样量:20L。8.2.2 标准曲线的绘制向基线平稳的HPLC分析仪连续注入L-抗坏血酸-2-磷酸醋标准工作液(4.的，浓度由低到高，以峰面积-浓度作图，得到标准曲线回归方程。8.2.3 定量测定注入待测样液(8.1)，其中L-抗坏血酸-2-磷酸醋的峰面积响应值应在标准曲线线性范围内，超过线性范围则应稀释后再进样分析。依据峰面积，从标准曲线中得到待测样液中L抗坏血酸-2-磷酸醋的浓度(C)。有关色谱图参见附录A。9 结果计算试样中L-抗坏血酸-2-磷酸醋的含量(以L-抗坏血酸计)X，以质量分数表示，单位为毫克每
9、千克(mg/kg) ，按式(1)计算:2 . ( 1 ) 式中zc一由标准曲线而得的试样液中L一抗坏血酸-2-磷酸醋的浓度(以L-抗坏血酸计)，单位为微克每毫升g/mL); V一试样定容体积，单位为毫升(mL);m一一一试样质量，单位为克(g); n-稀释倍数。测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留三位有效数字。10 重复性G/T 23882-2009 同一实验室由同一操作人员使用同一仪器完成的两个平行测定结果的相对偏差不大于15%。gON!N伺NH筒。GB/T 23882-2009 附录(资料性附录)L-抗坏血酸-2-磷酸醋色谱图A 髓筐嚣N翻哥峙辐tJ三-环己胶一L-抗坏血酸-2一磷酸醋标准工作液的色谱图见图A.10mV 3.132 2.7903.440 1. 990 100 50 150 A.l 。10 IDln 8 图A.l三-环己殷-L-抗坏血酸-2-磷酸醋标准工作液的色谱图L-抗坏血酸之一磷酸酶样品试液的色谱图见图A.20mV I 1.15 6 4 2 。留窿擎tNf窿.哩崎喝J9. 198 10 5 。A.2 12 min 10 8 6 4 2 。L-抗坏血酸-2-磷酸醋样品试液的色谱图图A.2侵权必究* 版权专有书号:155066 1-38470 14.00元定价:GB/T 23882-2009 打印日期:2009年10月14日
