1、ICS 65. 120 B 46 中华人民共和国国家标准2009心5四26发布GB/T 23883一2009饲料中蔑麻碱的测定高效液相色谱法Determination of ricinine in feeds一High performance Iiquid chromatography 2009-10-01实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局岱企中国国家标准化管理委员会c(.IJ 中华人民共和国国家标准饲料中蔑麻碱的测定高效法相色谱法GB/T 23883-2009 9导中国标准出版社出版发行北京复兴门外三里河北街16号邮政编码:100045网址电话:6852394668517548 中国
2、标准出版社秦皇岛印刷厂印刷各地新华书店经销骨开本880X 1230 1/16 印张0.5字数7千字2009年8月第一版2009年8月第一次印刷骨书号:155066 1-38471 定价14.00元如有印装差错由本社发行中心调换版权专有侵权必究举报电话:(010)68533533GB/T 23883-2009 目。昌本标准的附录A为资料性附录。本标准由全国饲料工业标准化技术委员会(SAC/TC76)提出并归口。本标准起草单位:中国农业大学、农业部饲料效价与安全监督检验测试中心(北京)。本标准主要起草人:王宗义、张丽英、杨文军、贺平丽、李冰颖。I G/T 23883-2009 范围饲料中蔑麻碱的测
3、定高效液相色谱法本标准规定了用高效液相色谱法测定饲料中离麻碱(化学名为3-氨基-4-甲氧基-N-甲基亿F毗院酬，分子式为C8H8N202，摩尔质量为164.16 g/mol)的方法。本标准适用于草麻柏、配合饲料和浓缩饲料中蔑麻碱的测定。本法的检测限为5mg/kg o 2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注目期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法GB/T 20
4、195动物饲料试样的制备3 原理用甲醇提取试祥中草麻碱，经固相萃取净化，高效液相色谱分离，紫外检测，外标法定量。4 试剂和溶液除特殊注明外，本标准所用试剂均为分析纯，水符合GB/T6682二级用水规定。4. 1 无水甲醇4.2 乙腊色谱纯。4.3 1 %(体积分数氨水溶液移取1.0 mL浓氨水溶液于100.0mL容量瓶中，用水定容至刻度。4.4 30%(体积分数)的甲醇溶液移取30mL甲醇于100.0mL容量瓶中，用水定容至刻度。4.5 蘑麻碱标准晶纯度大于99%。4.6 蘑麻喊标准溶液4.6.1 蔑麻碱标准储备液:称取蔑麻碱标准品适量，用甲醇溶解，配制成浓度为1.00 mg/mL标准储备液，
5、于-180C条件下储存。有效期为6个月。4.6.2 蔑麻碱标准工作液1:用甲醇逐次稀释蔑麻碱标准储备液至最终浓度分别为5.0g/mL、10g/mL、20g/mL、30g/mL和40g/mL的标准工作液。有效期为30d。4.6.3 草麻碱标准工作液1I:用30%甲醇(4.4)逐次稀释储备液至最终浓度分别为O.5g/mL、2.0g/mL、5.0g/mL、10g/mL和20g/mL的标准工作液。有效期为30d o 5 仪器与设备5. 1 分析天平z感量为0.0001 g。1 GB/T 23883-2009 5.2 离心机:转速大于3000 r/mino 5.3 恒温水浴。5.4 涡旋振荡器。5.5
6、定量滤纸。5.6 固相萃取小柱:亲水亲油平衡型聚合物填料，30mg ,l mL，或性能相当者。5. 7 固相萃取装置。5.8 氮吹仪。5.9 高效液相色谱仪z配有紫外检测器。6 试样制备按照GB/T20195的规定制备试样，粉碎过孔径。.45mm目筛，充分混匀，装瓶，备用。7 测定步骤7. 1 提取准确称取蔑麻柏试样0.5g(精确至0.0001 g)或饲料试样5g(精确至0.001g)于50mL带螺口离心管中，加20mL甲醇，拧紧盖子，于75oc水浴中提取4h(约每30min取出于涡旋振荡器上振荡30 s)。取出于离心机上以3000 r/min离心10min，将上层清液通过带有定量滤纸的50m
7、L漏斗过滤于50mL容量瓶中，残渣再分别用20mL和10mL甲醇按上述方法提取10min，离心，合并提取液，最后用无水甲醇定容至刻度。对于蔑麻柏试样，取上述提取液过0.45m滤膜，可直接上机测定;饲料试样提取液则需作进一步净化处理。7.2 净化移取提取液(7.1)2.00 mL于10mL试管中，于氮气吹干仪上吹干，加入2.00mL氨水溶液(4.3)，于涡旋振荡器上振荡30So 将固相萃取柱(5.6)置于国相萃取装置上，依次用1.0 mL甲醇和1.0 mL水活化;110载1.00 mL该试样溶液，控制流速不超过1.0mL/min;用1.0mL水淋洗小柱，抽干1min;最后用1.00 mL 30%
8、的甲醇(4.4)洗脱，加压，完全收集洗脱液到进样瓶中。7.3 测定7.3.1 色谱条件色谱柱:C18填料，长150mm，内径3.9mm，粒度5m，或相当者。流动相:乙脂+水=10十90。流速:1. 0 mL/mino 进样体积:20Lo检测波长:308nm。7.3.2 定量方法使用蔑麻碱标准工作液1(4.6.幻，以峰面积对浓度的工作曲线，对草麻柏样品进行外标法定量;同样使用草麻碱标准工作液ll(4.6.3)，以峰面积对浓度的工作曲线，对饲料样品进行外标法定量。蔑麻碱标准品的色谱图参见附录Ao8 结果计算试样中草麻碱质量分数(mg/kg)按式(1)计算:2 G/T 23883-2009 式中zc
9、一一为根据工作准曲线计算的上机试样溶液蓝麻碱浓度，单位为微克每毫升(g/mL); V一一为提取溶液体积，单位为毫升(mL);m一一为试样质量，单位为克(g)。测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留3位有效数字。9 重复性在重复性条件下，完成两次平行测定结果的相对偏差不大于10%。( 1 ) goNi的的NH阁。GB/T 23883-2009 附录(资料性附录蔑麻破标准品的色谱图A 蔑麻碱标准品的色谱图如图A.l所示。AU 5.0 4.0 3.0 2.0 1. 0 0.0 10.00 8.00 6.00 4.00 2.00 t/min 侵权必究书号:155066 1-38471 定价z14.00元骨版权专有革麻碱标准品的色谱图图A.l打印日期:2009年10月14日G8/T 23883-2009
