1、ICS 65. 120 B 46 中华人民主t./、道国和国国家标准G/T 28716-2012 饲料中玉米赤霉烯自同的测定免疫亲和柱净化-高效液相色谱法Determination of zearalenone in feed-High performance liquid chromatographic method with immunoaffinity column clean-up 2012-09-03发布中华人民共和国国家质量监督检验检痊总局中国国家标准化管理委员会2013-02-01实施发布中华人民共和国国家标准饲料中玉米赤喜烯酣的测定免症亲和柱净化-高效擅相色谱法GB/T 287
2、16-2012 号峰中国标准出版社出版发行北京市朝阳区和平里西街甲2号(100013)北京市西城区三里河北街16号(100045)网址总编室:(010)64275323发行中心:(010)51780235读者服务部:(010)68523946中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷各地新华书店经销9号开本880X 1230 1/16 印张o.5 字数8千字2012年11月第一版2012年11月第一次印刷峰书号:155066. 1-45784定价14.00元如有印装差错由本社发行中心调换版权专有侵权必究举报电话:(010)68510107GB/T 28716-2012 前言本标准按照GB/T1. 1-20
3、09给出的规则起草。本标准由全国饲料工业标准化技术委员会(SAC/TC76)归口。本标准起草单位:中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所、农业部饲料质量监督检验中心(南昌)、浙江大学饲料科学研究所、北京中检维康技术有限公司、北京市兽药饲料监察所。本标准主要起草人z饶正华、李兰、果旗、文虹、余东游、王雄、魏秀莲、孙志文。I 1 范围饲料中玉米赤霉烯酣的测定免疫亲和柱净化-高效液相色谱法GB/T 28716-2012 本标准规定了饲料中玉米赤霉烯酣含量的免疫亲和柱净化高效液相色谱的测定方法。本标准适用于饲料中玉米赤霉烯酣的测定。本标准的检测限为2g/峙，定量限为10g/kg。2 规范性引用文件
4、下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法GB/T 14699. 1饲料采样GB/T 20195动物饲料试样的制备3 原理试样经乙腊水提取后，提取液用磷酸盐缓冲榕液稀释，用免疫亲和柱进行净化。净化提取液用反相高效液相色谱荧光检测器进行测定，外标法定量。4 试荆除非另有说明，所有试剂均为分析纯;实验室用水符合GB/T6682中二级水规定，标准溶液和流动相用水符合一级水规定。4. 1 乙睛:色谱纯。4.2 甲醇:色谱纯。4.3 氢氧化铀潜
5、液:c(NaOH)=0.2mol!L。4.4 提取剂一-乙睛+水(8十2):将800mL乙睛(4.1)与200mL7.).混合均匀。4.5 磷酸盐缓冲潜液(PB曰:将8g氯化铺、1.16g磷酸氢二纳、0.2g磷酸二氢伸、0.2g氯化饵溶解至1000mL水中，用氢氧化铀洛液(4.3)调节pH至7.4。4.6 玉米赤霉烯酣标准品，玉米赤霉烯酣含量99.5%。4. 7 流动相z量取460mL乙睛(4.1)至1000 mL的容量瓶中，加入460mL水和80mL甲醇(4.2)。混合均匀并通过0.45m滤膜，备用。4.8 玉米赤霉烯酣标准储备液(50g/mL):称取5.0mg玉米赤霉烯酣标准品(精确至0.
6、1mg)于100 mL容量瓶中，用乙腊(4.1)溶解并定容至刻度。此标准贮备液在冷冻(-18.C)密封情况下保存，可使用1年。4.9 玉米赤霉烯酣标准中间液(5.0g/mL):准确移取10.0mL玉米赤霉烯酣标准储备液(4.8)于100 mL容量瓶中，用乙腊(4.1)稀释并定容至刻度。该溶液保存于2.C-8 .C冰箱里，可使用6个月。G/T 28716-2012 4.10 玉米赤霉烯酣标准工作液:玉米赤霉烯酣标准中间液用流动相(4.7)稀释，制备5个玉米赤霉烯酣标准浓度的溶液。准确移取适量玉米赤霉烯酣标准中间液，用流动相(4.7)稀释成浓度分别为0.02g/mL、0.05g/mL、o.10g/
7、mL、0.50g/mL、1.0g/mL的标准工作液。玉米赤霉烯酣标准工作液储藏在2.C8 .C冰箱里，可使用6个月。5 仪器和设备除实验室常用设备外，还需要以下仪器和设备z5.1 玉米赤霉烯酣免疫亲和柱z柱容量二三2g玉米赤霉烯酣。5.2 振荡器:200r/min。5.3 氮吹仪:30.C60.C。5.4 高速均质器:18 000 r/min22 000 r/min. 5.5 高效液相色谱仪:配有荧光检测器。5.6 真空装置或空气压力泵z能与免疫亲和柱配合使用。5. 7 政璃微纤维滤纸:直径11cm、孔径1.5m，元荧光特性。5.8 试验筛:1mm孔径。6 试样制备按GB/T14699. 1采
8、样;按GB/T20195制备样品，实验室样品应能完全通过1mm试验筛(5.的。7 分析步骤7. 1 提取称取试样40.0g于250mL具塞锥形瓶中，加入4.0g氯化铀及100.0mL提取fij(4.4)，于振荡器(5.2)上振荡60min，或于高速匀质器(5.4)匀质2min后，用定量滤纸过滤，准确移取10.0mL滤液并加入40.0mL PBS溶液(4.5)稀释，用玻璃纤维滤纸(5.7)过滤1次2次，至滤液澄清，备用。7.2 净化将免疫亲和柱连接于10.0mL玻璃注射器下。准确移取10.0mL样品提取液(7.1)注人玻璃注射器中，将空气压力泵(5.6)与玻璃注射器连接，调节压力使溶液以不大于2
9、mL/min流速缓慢通过免疫亲和柱，抽干。分别以10.0mL纯水淋洗柱子两次(对颜色较重的样品，第一次改用10.0mL 10%甲薛水溶液清洗柱子一次)，保持流速不大于2mL/min3 mL/min，并抽干。准确加人1.5 mL甲醇(4.2)洗脱，流速不大于2mL/min，收集洗脱液于55.C氮气吹干，用1. 0 mL流动相(4.7)溶解残渣，涡旋混匀，过0.45m滤膜，上机测定。注z玉米赤霉烯酣免疫亲和柱的使用要求按厂家说明执行。7.3 测定7.3.1 液相色谱测定参考条件7.3. 1. 1 色谱柱:C18柱，长150mm，内径4.6mm，粒度5m，或相当者。7.3. 1. 2 流动相:见4.
10、7.2 7.3. 1. 3 流速:0.8mL/mino 7.3. 1.4 检测波长:激发波长274nt町发射波长440nmo 7.3. 1. 5 进样量:20L。7.3. 1.6 柱温:30 .C. 7.3.2 色谱测定GB/T 28716-2012 分别取相同体积样液和标准溶液注入高效液相色谱仪，在上述色谱条件下测定试样的响应值(峰高或峰面积。经过与玉米赤霉烯酣标准溶液谱图比较响应值得到试样中玉米赤霉烯酣的浓度。标准品色谱图参见图A.1。8 结果8. 1 计算试样中玉米赤霉烯酣含量以质量分数X计，单位为微克每千克(g/kg)，按式(1)计算:式中zR一一试样溶液峰面积值;Pi X V X C
11、 X V x = A , . _ _ . X 10 P., X mXVi V一一样品的总稀释体积，单位为毫升(mL);C 标准榕液浓度，单位为纳克每毫升(ng/mL); V.，二一一标准溶液进样体积，单位为微升(L); P一一标准榕液峰面积平均值;m 试样质量，单位为克(g); Vi 试样溶液进样体积，单位为微升(L)。8.2 结果表示检测结果以两次测定值的算术平均值表示;计算结果表示到小数点后一位。9 重复性. ( 1 ) 在重复性条件下，获得的玉米赤霉烯酣的两次独立测试结果的绝对差值不大于其算术平均值的15%。N-ON|FhNH阁。G/T 28716-2012 附录(资料性附录)玉米赤喜烯酣标准晶色谱圄A 玉米赤霉烯酣标准榕液(200g/mL)的色谱图见图A.10 t/min 玉米赤霉烯酣10.0 7.5 Hm.咀2.5 5.0 响应值95.0 一10.00.0 42.5 玉米赤毒蜡嗣标准溶遭(200.g/mL)色谱固圄A.1侵权必究A& 。nt-严hu-4-EAE-nhu nhUE nphu Fhu -i-E E-号一价书一定* 版权专有14.00 ft 28716-2012 打印日期:2012年12月18日F008AOO
