1、ICS 17. 180 A 60 远自中华人民11: 和国国家标准GB/T 28873-2012 纳米颗粒生物形貌效应的环境扫描电子显微镜检测方法通则General guide of environmental scanning electron microscopy for biological effects on topography induced by nanoparticles 2012-11-05发布2013-02-15实施ant)1S37 伊076DJt-，F部/叮川、叹号七￥喜/iijl!?/ 中华人民共和国国家质量监督检验检班总局中国国家标准化管理委员会发布GB/T 288
2、73-2012 目。昌本标准按照GB/T1. 1-2009给出的规则起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准由中国科学院提出。本标准由全国纳米技术标准化技术委员会(SAC/TC279)归口。本标准负责起草单位:国家纳米科学中心。本标准参加起草单位:中国科学院电工研究所、中国人民解放军第二军医大学。本标准主要起草人:韩东、韩立、陈佩佩、谢家仪、杨勇骥、殷伯华、孙全梅、精卫国、初明璋、金麟、李静。I GBjT 28873-2012 纳米颗粒生物形貌效应的环境扫描电子显微镜检测方法通则警告:本标准并未指出所有可能的安全问题。在应用本标准之前，使用者有
3、责任采取适当的安全和健康措施，并保证符合国家有关法规规定的条件。1 范围本标准规定了环境扫描电子显微镜检测纳米颗粒与生物样品相互作用的技术和规范。本标准适用于应用扫描电子显微镜的低真空和环境真空模式，进行纳米颗粒生物效应研究中生物样品形貌的分析(颗粒的范围可扩展至亚微米级和微米级)。2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GBjT 19619-2004 纳米材料术语GBjT 21636-2008微术分析电子探针显微分析(EPMA)术语GBjT 23414-200
4、9微术分析扫描电子显微术术语3 术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3. 1 环境扫描电子显微镜environmental scanning electron microscope ; ESEM 在其工作时，其样品室气压可在1Pa5 000 Pa之间变化。因此，不能直接探测到发射的二次电子，图像是通过探测气体放大的电子、环境扫描电子探测器、探测离子、光电效应或者探测其他信号(如背散射电子或者吸收电流)来获得。3.2 3.3 3.4 3.5 生物形貌效应biological effect on topography 与纳米颗粒作用后，生物样品形貌的改变。低真空模式low vacuum mode
5、 镜筒在高真空，而样品室的压力在10Pa130 Pa时，对样品表面进行检测。环境真空模式environmental vacuum mode 镜筒在高真空，而样品室的压力在10Pa4 000 Pa范围内，对样品表面进行检测。含水生物样晶hydrous biological sample 表面无多余水分存在、内部含水、不易变形的新鲜样品。1 G/T 28873-2012 4 基本原理用聚焦的高能电子束照射生物样品表面的微小区域，到达样品的电子与样品的原子发生碰撞，产生大量携带有样品表面信息的二次电子和背散射电子等信号。控制电子束在样品表面以光栅形式进行扫描，扫描时探测器(二次电子或背散射电子探测器
6、)收集的电子信号随之变化，电子信号经探测单元处理后，在显示器上形成生物样品的表面形貌和结构的电子图像。ESEM的两个关键技术使直接观察生物样品成为可能。首先，ESEM采用多级压差光阑技术，形真境环图/ t八、1川川i飞备扫点设境界器环临仪tnt / -仨二二6 纳米颗粒作用后的生物样品制吾三一二三二/6. 1 低真空操作模式下的样品制备6. 1. 1 与纳米颗粒作用之后的生物样品(组织或细胞)先用2.5%戊二醒溶液固定2h4 h，后用磷酸盐缓冲液(0.2mol/L , pH值为6.87. 4)清洗3次;再用1%饿酸溶液固定2h4 h，磷酸盐缓冲液(0.2 mol/L , pH值为6.87. 4
7、)清洗3次。每次磷酸盐缓冲液清洗时间均为15min20 min。6. 1. 2 分别用浓度为30%、50%、70%、85%、95%的乙醇将样品脱水各一次，每次15min20 mino 100%的乙醇脱水2次，每次15min20 min。6. 1. 3 乙酸异戊醋置换生物样品2次，每次15min。6. 1. 4 二氧化碳临界点干燥仪干燥生物样品。6. 1. 5 样品表面不需导电处理，直接置于样品室内进行观察。2 GB/T 28873-2012 6.2 环境扫描操作模式下的样品制备纳米颗粒与生物含水样品作用之后，用滤纸去除表面多余水份，置于样品室内，直接进行检测。对易变形生物样品可先给与2.5%戊
8、二醒和1%俄酸双固定，然后用磷酸盐缓冲液(0.2mol/L , pH值为6. 87. 4)清洗3次，每次磷酸盐缓冲液清洗时间均为10min，再用去离子水清洗2次，每次清洗时间为10 s。最后用滤纸去除表面多余水分，置于样品室，进行检测。7 样品检测流程7. 1 打开样品室向环境扫描电镜样品室注/氮气，打开样品室。飞/ / 7.2 选择及安装相应摇头/ 吟吟环境真空探头。/ 7.3安装制矿 / / 7.3. 1 低真空模式，用导电胶或胶带，如银胶、碳胶或碳胶带，将样品固定在样品台土。7.3.2 环境真空模式，安装相应的冷台和/或水循环系统，将样品装在特制的样品台上，选择合适的温度，预冷。/径和工
9、作距离。拣境靠在模式下还需选择温度二5.C60 C，从而达到适合的湿度(_-/-般描荐为85%)。、飞二二、飞/扩选择 _,/_./ 较小7.7 视野选择在低倍下选择合适的视野，寻找纳米颗粒生物效应后的细胞及生物组织表面的形貌。7.8 放大及聚焦放大到所需倍数，聚焦(在照相所需倍数两倍以上聚焦)。7.9 高倍下消像散7. 10 照相并储存图像3 GB/T 28873一-20128 检测结果报告检测结果报告需包括以下内容:a) 检测报告的唯一编号;b) 送样人姓名，单位、地址及联系方式;c) 送检样品名称、送检日期和送检目的;d) 仪器条件、检测参数(工作距离、加速电压、放大倍数、样品室压力、样
10、品台温度和样品室湿度he) 检测结果和必要的说明(附图片); f) 检测报告负责人的签字:g) 检测报告的页码;h) 检测报告的日期;i) 实验室名称和地址。检测报告发布可参考附录A。4 GB/T 28873-2012 附录A(资料性附录)纳米颗粒生物形貌效应的环境扫描电子显微镜检测报告报告编号:送样单位:送样日期:样品名称:送样目的:检测要求:送样人姓名:送样人联系电话:送样人E-mail地址:测量条件:仪器型号:仪器条件:加速电压:工作距离:样品室压力:放大倍数:样品台温度:样品室湿度z检测结果:检测结果(附图片): 必要的说明:检测单位(公章): 检测人姓名:审核人姓名:检测日期2年月日
11、报告书共页检测单位地址:检测单位联系电话:5 GB/T 28873一-2012参考文献lJ P. Chen, L. Chen, D. Han, J. Zhai , Y. Zheng and L. Jiang , Wetting behavior at micro-/ nanoscales: direct imaging of a microscopic water/ air/ solid three-phase interface. Small. 2009 , 5 , 908-912. 2J Y. Zheng,D. Han, J. Zhai and L. Jiang. ln situ inve
12、stigation on dynamic suspending of microdroplet on lotus leaf and gradient of wettable micro-and nanostructure from water condensation. Appl. Phys. Lett. 2008 , 92 , 084106. 3J CEN ISO/TS 27687 :2008 Nanotechnologies-Terminology and definitions. 4J A. F. Miller, A. M. Donald. lmaging of anisotropic
13、cellulose suspensions using environ mental scanning electron microscopy. Biomacromolecules. 2003 , 4 , 510-517. 5J C. Habold, S. Dunel-Erb, C. Chevalier, P. Laurent, Y. Le Maho , J. -H. Lignot. Obser vations of the intestinal mucosa using environmental scanning electron microscopy (ESEM ) ; compar i
14、son with conventional scanning electron microscopy ( CSEM ) . Micron. 2003 , 34 , 373-379. 6J 汤雪明，戴书文.生物样品的环境扫描电镜观察.电子显微学报，2001 , 20 , 217-223. 7J 何黎平.几种新鲜生物样品的环境扫描电镜观察.电子显微学报，2003 , 22 , 669-670. 8J A. M. Donald. The use of environmental scanning el巳ctronmicroscopy for imaging wet and insulating rn
15、aterials. Nat. Mater. 2003 , 2 , 511-516. 6 NON|的hNH益。华人民共和国家标准纳米颗粒生物形貌效应的环境扫描电子显微镜检测方法通则GB/T 28873-2012 国中晤中国标准出版社出版发行北京市朝阳区和平里西街甲2号(100013)北京市西城区三里河北街16号(100045)网址总编室:(010)64275323发行中心:(010)51780235读者服务部:(010)68523946中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷各地新华书店经销导印张O.75 字数12千字2013年2月第一次印刷开本880X12301/16 2013年2月第一版每书号:155066. 1-45969定价16.00元如有印装差错由本社发行中心调换版权专有侵权必究举报电话:(010)6851010728873-2012 打印日期:2013年3月7日F002A
