1、ls己|中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN /T 1059. 1-2002 进出口食品中沙门氏菌滤膜筛选法Salmonella in food for import and export Membrame filter screening method 2002 -01-16发布2002 - 06 -01实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局SN/T 1059.1-2002 前本标准是按照GB/T1.1-1993(标准化工作导则第1单元:标准的起草与表述规则第1部分:标准编写的基本规定进行编写的。本标准中沙门民菌滤膜筛选法中的培养基、培养温度和滤膜法等内容是参考美国公职分析化学家
2、协会(AOAC)(公定分析方法)(1995年第16版17.9.09)样品制备，采用SN0170-1992(出口食品沙门氏菌属(包括亚利桑那菌)检验方法)，并在实验的基础上编写而戚。本标准的附录A是标准的附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准由中华人民共和国天津出入境检验检疫局负责起草。本标准主要起草人:陈子红、侯丽萍、唐丹舟、张思传、孙俐。本标准首次发布。范围中华人民共和国出入境检验检疫行业标准进出口食品中沙门氏菌滤膜筛选法Salmonella in food for import and export Membrame filter screening method 本标
3、准规定了进出口食品中沙门氏菌滤膜筛选法。SN/T 1059.1-2002 本标准仅适用于进出口方便面、膨化食品、矿泉水、单晶糖、牛奶、饮料、禽肉、椒粒中沙门氏菌筛选。2 引用标准下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时，所示版本均为有效。所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。SN 0170-1992 出口食品沙门氏菌属(包括亚利桑那菌)检验方法SN 0330-1994 出口食品中微生物学检验通则3 抽样按SN0330规定执行。4 试验方法4. 1 方法原理将滤膜放入滤器，过滤样品。由于滤膜的作用而使沙门氏菌保留在膜表面上。将滤
4、膜放在EF-18培养基上培养，沙门民菌形成绿色、蓝绿色、蓝色或黄色菌落。4.2 设备和材料4.2.1 滤器:一套，备有预滤器。4.2.2 真空泵。4.2.3 滤膜:有机或水相，孔径。.45mo4.2.4 培养箱:36 C :1: 1 cC ,42 C :1: 1 cC。4.2.5 水浴箱:45 cC :1: 1 c , 37 C士1C 0 4. 2. 6 吸管:1mL、10mL，具刻度。4. 2. 7 玻璃三角瓶和广口瓶:250mL、500mL。4.2.8 试管:17mmX170 mm，玻璃制。4.2.9 玻璃珠:直径5mm。4.2.10 平皿:直径90mm。4.2.11 天平:感量0.1g。
5、4.2.12 均质器。中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局2002-01-16批准2002 - 06 -01实施SN/T 1059.1-2002 4.3 培养基和试剂4. 3. 1 蛋白陈-吐温80(PT)稀释液(见附录AAl)。4. 3. 2 四硫磺酸盐肉汤(加腆和煌绿)(见附录AA2)。4. 3. 3 EF-18琼脂(见附录AA3)。4.4 样品制备及增菌培养4.4.1 如为冷冻产品，应在45C以下不超过15min，或在2C5CC不超过18h解冻。若不能及时检验，应置于一15C左右保存。非冷冻而易腐的食品，置于4C冰箱保存。4.4.2 以无菌操作，称取25g (mL)样品，置于灭菌均质杯
6、内，加入25mL PT稀释液，以8OOO 10 000 r/min均质1min，放入装有200mL PT稀释液的500mL灭菌广口瓶，混合均匀，如pH低于6.6，用灭菌1mol/L氢氧化铀溶液，调pH至6.8:l: 0. 2，放入3TC水浴培养4h(以增菌液达到37C时算起)，进行前增菌;其后，移取10mb转种于盛有100mL四硫确酸盐肉汤(加腆和煌绿)的250mL灭菌广口瓶内，摇匀，42CC:l:1C培养20h :l: 2 h，进行选择性增菌。4.5 过滤和培养将灭菌的过滤装置连接于真空抽滤瓶上，以无菌操作将无菌滤膜放在抽滤底座上，用不锈钢夹子固定。以无菌操作加10mL20 mL无菌蒸儒水于
7、滤器中，用灭菌吸管取选择性增菌液1mL放入滤器中，打开真空泵抽吸液体。再加入10mL15 mL无菌蒸锢水抽取液体，抽干后关闭真空泵，打开底座夹，以元菌慑子取出滤膜，将滤膜移至预先干燥好EF-18琼脂平板表面上，滤膜与琼脂表面之间应元气泡，在42C:l:1cC培养1824h，无菌落生长则为阴性。4. 6 典型或可疑菌落的鉴定典型沙门氏茵茵落既不是水滴样又不是粘液状，一般呈绿色、蒲翠绿色或蓝绿色，有时呈蓝色(赖氨酸阳性菌和商糖阴性菌)和黄色(赖氨酸阴性菌和萧糖阳性菌)。从平板上挑选3个典型或可疑菌落，按照SN0170-，-1992中第4章进行生化和血清学鉴定。5 报告结果5.1 报告阳性结果沙门氏
8、菌检出/25g。5.2 报告阴性结果沙门氏菌未检出/25g。2 SN/T 1059.1-2002 附录A(标准的附录)培养基和试剂A1 蛋白腺-吐温80(PT)稀释液a)蛋白陈b)吐温801. 0g 10.0 g c)蒸馆水1 000 mL 将上述成分加热溶解，于121C高压灭菌15mino A2 四硫磺酸盐肉汤(加腆和煌绿)A2.1 基础肉汤制备a)多价蛋白陈5.0 g b)胆盐1.0 g c)碳酸钙10 g d)硫代硫酸饷(5个分子水)30 g e)蒸馆水1 000 mL 将上述成分混合加热煮沸(沉淀不会完全溶解)，冷却至45C储存于冰箱(5C8C)内备用。A2.2 腆-腆化饵潜液制备将5
9、g腆化押搭解于5mL灭菌蒸馆水中，加入6g棋溶解后，用灭菌蒸馆水稀释至20mL备用。A2.3 煌绿溶液制备称取煌绿染料0.1g溶解于灭菌的蒸锢水中井稀释至100mL，备用。A2.4 使用在使用的当天，将20mL腆-腆化饵搭液，10mL煌绿溶液加人1000 mL基础肉汤中，缓慢震荡将沉淀悬浮起来。并以无菌操作以10mL分装于17mmX170 mm灭菌的试管内，不要加热，使用前保持温度在25C350C。A3 EF-18琼脂a)际蛋白陈5.0.g b)酵母浸膏3.0 g c) L-赖氨酸盐酸盐10.0 g d) D-葡萄糖2.5 g e)庶糖15 g f)硫酸镜(MgS04 7HzO) 1. 5g
10、g)胆盐1. 5 g h)磺胶H比睫0.3 g i)澳靡香草酣蓝铀盐0.03 g j)琼脂15.0 g k)蒸馆水1 000 mL 加热搅拌至煮沸，完全溶解。本培养基不需高压灭菌，冷却至45C 50 C 0配制新生霉素榕液，溶解0.15 g新生霉素于10mL水中，用0.45m滤膜过滤除菌。于保温的1000 mL EF-18琼脂基础中加入。cc。|OUCSN/T 1059.1-2002 1. 0 mL除菌的新生霉素溶液，混匀。将培养基倾注于陪替氏皿中，每皿20mL，凝固后培养基的最终pH应为6.8:l: 0. 1。未使用的新生霉素于C6CC，贮存备用。注意:正确调节pH是该培养基效能的关键。用平
11、面探头测定固体培养基pH。也可在倾注陪替氏平皿前，以无菌操作，用灭菌的1mol/L盐酸或氢氧化铀调节pH至6.6士O.1。Lhdq侵权必究阳-元A哇-i-nHU 乙-nu-户hunu-号一价书一定9峰版权专有中华人民共和国出入境检验检疫行业标准进出口食品中沙门氏菌滤膜筛选法SN/T 1059.1-2002 当&中国标准出版社出版北京复兴门外三里河北街16号邮政编码:100045电话:6852394668517548 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷9毛开本880X12301/16 印张1/2字数10千字2002年5月第一版2002年5月第一次印刷印数1-2000* 书号:155066. 2-l4384 定价6.00元网址版权专有侵权必究举报电话:(010)68533533
