1、中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1683-. 2005 蜜蜂微抱子虫病诊断方法ProtocoI of diagnosis for nosemosis of bees 2005-09-30发布2006酬。5酬。1实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检痊总局060509000057 SN/T 1683-2005 前言本标准参考了世界动物卫生组织(OIE)棋定的陆生动物诊断试验和疫苗标准手册)(2004版)。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。命本标准起草单位:中华人民共和留北京出入境检验检疫局。本标准起草人:张兆平、王小丽、黄少康。本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准
2、。I SN/T 1683-2005 蜜蜂微子包子虫病诊断方法1 范围本标准规定了蜜蜂微抱子虫病的诊断及鉴别方法。本标准适用于蜜蜂和蜂蜜的微拍子虫(Nosemis)的检测。2 原理蜜蜂微抱子虫病是由蜜蜂微抱子虫(Nosemaais Zander，1909)引起的蜜蜂成蜂的原虫病。对蜜蜂检验时，蜂微范子虫抱子常与真菌抱子、脂前球、花粉粒相混淆，须进行鉴别诊期。3 设备、材料和试剂3. 1 设备3. 1. 1 普通光学显微镜。3. 1.2 普通低速离b机。3. 1.3 电子天平(0.001g)。3. 1.4 普通冰箱。3.2 材料3.2. 1 慑子。3.2.2 解剖剪。3.2.3 酒精灯。3.2.4
3、 打火机。3.2.5 记号笔。3.2.6 50 mL烧杯。3.2.7 胶头滴管。3.2.8 研钵。3.2.9 直径9cm培养皿。3.2. 10 长1m，粗约5cm的木棒。3.2. 11 离心管。3.2. 12 载玻片。为1最样一来口nu 以4叶唱口nu nu 口nu 止万量数玉蜂批样一来部全4叫咱口hnu 纯引学等知A或学%L于化纯UM小职学如例慢性乙咐酸阻比强词水酿盐丹样ku主且剂元乙浓苏王采拙3试样蜂斗JJJJAU采J-9qJvqJW内dqdqIMtztt写MqM写写回叫3呵3a4A-a斗SN/T 1683-2005 基础，每增加10只，采样量增加1只。一批蜂王数量大于100只时，按每批总
4、蜂王数的30%采样。4. 1. 2 采样方法对蜂王采用活体采样法。即抓取待检蜂王，将其放人培养血内，立即用烧杯扣上，作好标记，待排出最无色透明的粪便后，将蜂王放回原群，用盖玻片直接刮取粪便，倒扣在或玻片上啦!成涂片。4.2 生产蜂群4.2. 1 采样比例根据生产蜂群数最决定采样比例。100群蜂以下按蜂群数的15%20%采样，101200群蜂按蜂群数的10%15%采样，201300群蜂按蜂群数的10%采样，300群蜂以上按蜂群数的5%采样。4.2.2 采样方法从待检蜂群中随机采取活工蜂或死工蜂20只，放入烧杯内盖好，记录群号。检验前先将活蜂用乙酷处死或置于冰箱冷冻室内冷冻10min。4.3蜂蜜4
5、.3. 1 采样比例一批蜂蜜重量小于等于10t，应从总件数中采取7个样，每个样50g;一批蜂蜜蠢蠢为11t50 t , 应从总件数中采取8个样，每个样50g;一批蜂蜜重量大于50t，应从总件数中采取9个样(最多10个样)，每个样50gO 4.3.2 采样方法取样前先用木棒搅匀待检蜂蜜，再称取样品50g，标记待检。5 实验室诊断5. 1 对蜂王的检验取蜂王粪便涂片，置于400X600X光学显微镜下观察。5.2 对生产蜂群的检验5.2. 1 对处死后的活体蜂样品，拉取其中肠放入研钵中，加2mL3 mL蒸锚水研磨成悬浮液，取一漓滴于载玻片上，盖上盖玻片，置于400X600X光学显微镜下观察。5.2.
6、2 对干燥的死蜂样品，先剪去蜜蜂的头胸部，取其腹部研碎，按照5.2.1的方法制成悬浮液，镜检。5.3 对蜂蜜的栓验5.3.1 直接涂片检验法取待检蜂蜜1份，用蒸馆水稀释一倍，涂片镜检。5.3.2 沉集检验法取待检蜂蜜l份，如蒸惚7.(9份，以800g离心6min，弃上清蔽，取沉集物涂片镜检。5.4 鉴别诊断5.4. 1 酸处理用以区分微拍子虫子包子和真菌踊子。在可能混有真商于抱包子的涂片上小心滴加1滴浓盐酸，置3切OOC下静置20mi町mr俨产句旬白-、白、.、不变o5.4.2 酒精乙黯等量混合液处理用以区分微抱子虫子包子和脂肪球。将可能混有脂肪球的涂片滴加几滴酒精乙酿等量?昆合液，待蒸发干后
7、，再加1滴蒸铺水，盖片镜检，则脂肪球消失，微拍子虫子包子尚存。5.4.3 苏丹E染色处理用以区分微于缸子虫子包子和真菌抱子、脂肪球及花粉粒。在可能混有脂肪球和花粉粒的涂片上加几滴苏丹血染色液染色5min，再滴加1漓蒸馆水，盖片镜检，结果为微抱子虫子包子不着色，真商抱子最浓淡不等的红色，脂肪球橙黄色，花粉粒呈蓝黑色。SN/T 1683-2005 5.4.4 与马氏管变形虫区别显微镜下蜂微拍子虫子包子与马氏管变形虫大小相似，直径约6m7mo但形状不一致，马氏管变形虫呈球形，蜂微拖子虫抱子呈椭圆形。6 结果到定6. 1 显微镜下看到长约5m7m，宽约3m4m，边缘发暗的椭圆形粒子，综合鉴别诊惭结果，判定为蜜蜂微面子虫病阳性。6.2 显微镜下没有看到6.1中所述抱子形态，判定为蜜蜂微子包子虫未检出。的CON-的FH在中华人民共和国出入境检验检疫行业标准蜜蜂微子包子虫病诊商方法SN月1683-2005中国标准出版社出版北京复兴门外王旦河北街16号邮政编码:100045网址电话:6852394668517548 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷专非头开本880X 1230 1/16 印张0.5字数6千字2006年1月第一版2006年1月第一次印刷印数1-20009毛书号:155066 2-16607 定价6.00元SN/T 1683-2005
