1、中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1723.1-2006 马铃薯白线虫检疫鉴定方法Inspection and identificatin of the white potato cyst nematode, Globodera pallida (Stone) Behrans 2006皿01皿26发布060712000085 2006-08-16实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局SN/T 1723分为两部分:一一马铃薯白线虫检疫鉴定方法:一一马铃薯金线虫检疫鉴定方法。本部分为SN/T1723的第1部分。本部分的附录A为资料性附录。前吉本部分由国家认证认可监督管理委员会提
2、出并归口。本部分负责起草单位:中国检验检疫科学研究院。SN/T 1723.1-2006 本部分参加起草单位z中华人民共和留辽宁出入境检验检疫局、中华人民共和国江苏出入境检验检疫局和中华人民共和国上海出入境检验检疫局。本部分起草人:葛建军、姜丽、流培垠、戚龙君。本部分系首次发布的出入境检验检疫行业标准。I 1 拮黯SN/T 1723的本百的检疫鉴定方法。本部分适用于输丁附中马铃薯白线虫的检气2 去摇摇性引用文件SN/T 1723. 2-2 3 符号下列符号适用于马铃薯白线虫检疫鉴定方法n一一测计的线虫样本数目L一一虫体体长(m或mm)S，-口针长度(m)4 原理马铃薯白线虫学名:Globoder
3、 异名:H eteroder, 英文名:whitep 分类地位:线虫i、囊线虫属(Globodera马铃薯白线虫的马铃薯自线虫的寄主范5 仪器、周具及药品5. 1 仪器、用具SN/T 1723.1-2006 ，以及对马铃薯白线虫、土的植物繁殖材料( Heteroderidae)、球胞的依据。.光学显微镜、解剖镜、t_:温箱、漂浮筒、20目网筛、60目网筛、100目罔筛、500吕网筛、酒精灯、烧杯、1000 mL二三角瓶、毛笔、毛剧。5.2 药品酒精、丁香油、过氧化氢、中性树胶、福尔马林(40%)、冰乙酸、甘油、三乙醇脑、乳酷油、硫酸镜、蒸馆水。SN/T 1723.1-2006 6 现场检在与抽
4、样6.个现场检疫检查马铃薯种薯、食用马铃薯薯块的带土情况，肉眼观察薯块基本不带土壤，则对进境的马铃薯薯块进行随机抽样，带回实验室检验;肉眼观察发现薯块带有土壤，应将带有土壤的所有薯块带回实验室进行检查。查看带根、土的茄属植物及其他带根、土的植物繁磕材料的带土情况，收集上述植物繁殖材料和运输工具上可能携带的土壤，连商植物繁殖材料一并带回实验室检查。6.2 抽样6.2.1 抽样方法棋盘式或五点式随机抽样。抽样时应注意上、中、下层的代表性。6.2.2 抽样比例以品种为单位，按总件数的10%抽样，每件按种薯总数的5%10%抽样。7 实验室检验7. 1 土壤的收集使用毛刷将马铃薯等块菜和根上的土壤剧下来
5、，尤其注意收集薯眼等内凹表面的土壤;若马铃薯种薯等繁殖材料的带土量小，应用水将马铃薯块茎上沾附的少蠢土洗刷下来。7.2 线虫分离7. 2. 1 Fenwick唰Oostenbrink漂浮法此方法一般用于检验100g以上的泥土。具体的分离步骤如下:将现场采集到的土样铺子干净的浅瓷盘内，置于通风无陆光处风干，用于或用小的困木棍)将泥土轻轻压碎，用孔径为3mm的标准筛过筛，除去泥土中棍杂的植物组织和程砂等杂物后备用;将漂浑筒和下筛淋湿;漂浑筒内灌满清水;在上筛中放置风干的土壤样品100g左右，用强水流冲洗，使土样全部被淋洗至漂浮筒内;进入筒内的土牧因较重而逐渐下沉，而较轻的胞囊和一些有机杂物则陆续向
6、上漂浮，经1min2 min后摆浮于筒白水面之上;再由上筛加水至漂浮筒内，使漂浮于筒口的胞囊和杂物沿水槽流到下筛(100目)上面;将下筛内含胞囊的残留物冲洗至1000 mL的三角瓶内，往瓶内加清水，直至瓶口处;静置片刻，待漂浮物浮于被西时，将漂浮物倒入装有滤纸的漏斗中过滤，待滤纸晾于后即可镜检。7.2.2 简易漂浮法分离钱虫收集的土壤数量在100g以下时可采用此方法分离胞囊。将上述泥土倒入2000mL的三角瓶中，加少量水可用10%的硫酸镜溶被代替水作漂浮被使用效果更佳)后至水深5cm左右后充分摇晃使之呈悬浮跤，然后边加水边摇动，加水直至接近瓶口处。静置片刻，待三角瓶颈部的水变清时，将三角瓶瓶口
7、的漂浮物递过20目和100吕的套筛。彻底冲洗20目筛网，使所有的胞囊被冲到100目的筛网上。将100吕筛网上的收集物轻轻地倒入装有滤纸的漏斗中过掠，待滤纸琼干眉即可在解剖镜下检查是否有晦囊。7.2.3 直接过筛分离胞囊马铃薯薯块上马铃薯胞囊线虫的分离尽量使用该方法。将洗涤马铃薯薯块的泥水洗涤液倒入20目一100自一500目的王层套筛中，然后用水喷淋冲洗，使杂质留在20目的粗筛内，而跑囊则会被冲到100目的筛网中，500目的网筛用于收集跑囊线虫的2龄幼虫、雄虫和其他蠕虫形线虫。将100目筛网上的胞囊和残余物冲洗入三角瓶内，一并倒人装有滤纸的漏斗中过滤，待滤纸琼干后镜检。将500目网筛上的收集物冲
8、洗到小培养皿中镜检。弓!SN/T 1723.1-2006 7.3 镜检晾于后的掠纸可在解剖镜下检查，寻找胞囊。若发现胞囊，则用竹针或眉笔或0号狼毛笔将其挑至凹政片上或装有白色滤纸的小培养血中。并在显微镜下对胞囊的虹朋板进行鉴定。胞囊的旺院板制作方法见SN/T1723.2一2006的甜录Bo8 马铃害自钱虫的鉴定特征8. 1 形态特征8. 1. 1 雌虫虫体近球形，具突出的颈部。白色，一些群体经4周6周呈奶油色，当雌虫死亡时，变成亮褐色。头部具有融合的唇和1或2个明显的唇片。颈部环纹不规则，大多数体壁变成网纹型脊，头骨架发育弱。无刻线。口针锥部约为口针长的50%，与针干部区别明显，口针基部球向后
9、倾斜，口针套管约为口针长的75%。中食道球大，几乎环形，瓣门新月形。排泄孔明显，位于颈蕃部。双卵巢充满整个体腔。阴门横裂，周匍角质层轻橄环形凹陷，形成胡门膜孔。阴门口位于两个绵的唇突状新月形区域之间。虹门与阴门膜孔间角质层有12个平行的脊，少数交叉相联(见周口。3 空运习N-4iNOOOE 1011 5011 一.,. H一一-幼虫尾部:1一一幼虫侧区;J-雄虫前端;K一一雄虫头部;L一一雄虫尾区)商观:M一一雄虫尾部侧丽观;N一一雄虫虫体中部假区;B一-Jijt虫头部;C一一-Jlltill.头部顶面观;D一-Jijt虫整体;E一一一幼虫接体;F一一幼虫插端:G一一幼虫头部;宁、。一一企IE
10、虫整体。马铃薯白线虫(Globodera pallida ) 囱1SN/T 1723.1-2006 8. L2 胞囊新胞囊亮褐色，近球形具突出的颈。新胞囊的朋门区可能是完整的，但较老的胞囊标本的部分或全部阴门膜孔丢失，形成1个单环膜孔型Csingle circular fenestra)阴门摸孔。无阴门桥、下桥和其他内腺突，无泡状突，但在民门区域有时有小突黑色的或变厚的阴门体。旺门明显。元亚晶层。8. 1. 3 雄虫蠕虫语，尾短、末端钝圈，热力杀死呈C或S形，后部卷曲90018000角质层具明显的环纹，侧区四条刻线延伸至尾部末端，外刻线在眠在困线但由刻线工醋，纹去音在维缩_.Q._或工个环纹，
11、头骨架严重骨化。口针发育良好，口食道球椭圈形，具有强壮的新月小见图1)。8. 1. 4 工龄幼虫蠕虫形，但在卵内折叠成4折。角显向前的突起，口子20%体长处。半月体明显，26个环纹。尾部渐变细，末端自T 1723. 2-2006的附录C中图8.2 测计健8.2. 1 雌虫口针长的70%。中食道腺垂体延伸至排。单精巢，顶交合刺，引带Cn=25):L口27.4m士1.1m，头基部宽5.2m土o.5m，口针基球至背食道腺开口距离为5.4m士1.1m，头顶到中食道球瓣门距离67.2m十18.7盟，中食道球瓣门至排地孔的距离/牛毛汁?二71. 2m士21.9m， 门膜孔平均直径24.8m士3.7阴门与旺
12、门问角质层的脊数12.8.2.2 胞囊Cn=25) :LC不包括颈)口5径24.5m士5.0m，月工门至阴门盆直径)口2.1士0.908.2.3 雄虫Cn=50) ;L口1198m士头部高6.8m士0.3m，St=头顶至中食遵球瓣96.0m土7.176.4m土14.5m，尾长5.2引带长11.3m士1.6m。8.2.4 二龄幼虫44.6m士1.9m，20m，阴门膜孔直阴门盆近缘的距离/12. 3m士O.5m， 3.4m士1.0m，排泄孔至头顶距离Cn=50) :L=486m土23m，排泄孔处体宽19.3m士0.6m，头基部宽10.6m士0.5m，头部高5.5m士O.1m，St=23.8m士1.
13、0m，口针基部球至背食道腺开口距离为2.7m士O.9m，头端至中食道球瓣门68.7m士2.7m，中食道球瓣至排地孔至距离39.9m士3.3m，排1世孔至头端距离108.6m土4.1m，尾长51.1m士2.8m，胚门处体宽12.1m士0.4m，透明尾长26.6m土4.1mo 5 SN/T 1723.1 2006 8.3 与相似种的区别马铃薯白线虫与马铃薯金钱虫在形态上极为相似，两个种的主要区别见SN/士1723.2一2006的即录Co9 结果判定以胞囊或雌虫的形态学作为该线虫鉴定的主要依据，2龄幼虫和雄成虫作为鉴定的辅助依据。符合上述形态特征和测计值的可鉴定为马铃薯白线虫。10 样品的保存10.
14、 1 样品保存样品经登记，经手人签字，妥善保存2个月。如发现马铃薯白线虫，该样品至少需保存6个月，以备复验、谈判和仲裁。保存期满后，发现马铃薯白线虫的，需作销毁处理。10.2 钱虫标本的保存截获的马铃薯白线虫的胞囊、雌虫、雄虫和幼虫可制作成标本，永久保存。6 SN/T 1723.1-2006 附录A(资料性附录)玛铃薯白线虫的寄虫、分布、生活史和传播途径A.1 马铃薯自线虫的警主马铃薯古线虫的寄主程自较窄，最主要的农业寄主作物有马铃警、茄子和番茄。A.2 马铃薯白线虫的分布马铃薯白线虫亦是世界性分布的重要病原线虫，在全世界五大洲56个国家有分布。欧洲:比利时、奥地和、保加利亚、法罗群岛、白俄罗
15、斯、斯洛伐克、丹麦、芬兰、法国、德国、希踏(仅克里特岛)、匈牙科、冰岛、爱尔兰、意大利、卢森堡、马耳伪、荷兰、英国、挪威、波兰、葡萄牙(本土)、俄罗斯、英国(英格兰、苏格兰、海峡群岛、商班牙包括加那利群岛、瑞典、瑞士和前南斯拉夫。亚洲:塞浦路斯、印度(喜马揩尔邦、喀拉拉邦、恭米尔纳德邦)、巴基斯坦。非洲z阿尔及利亚、南非、突尼斯和加那利群岛。大洋洲z新西兰。北美圳:加拿大(纽芬兰)。中南美洲:整个安第斯离海拔地区:巴拿马、厄瓜多尔、陶根廷、玻利维亚、秘鲁、智利、哥伦比亚和委内瑞拉。A.3 玛铃薯白线虫的侵染借环和生活史在寄主根部分泌物的剌激下，从土壤中线虫胞囊内赔化出的马铃薯白线虫的2龄幼虫侵
16、入到寄主根内，在根的中柱鞠、皮层或内皮层的一组细胞中取食，将其转变成大的合跑体转移细胞，此后线虫在此营固定性内寄生生活，并完成其余的发育过程;经蜕皮，2龄幼虫变为3龄幼虫、4龄幼虫，而从3龄幼虫开始出现性别的分化，雄性幼虫仍为蠕虫状，那雌性幼虫的身体开始膨大;4龄雌性幼虫再蜕皮变为雄性成虫，虫体的后部不断路大，撑破根表皮露出根外，仅杀和颈部由着于提内;蠕虫状活泼运动的雄虫与雌虫交配后死亡，商雄虫继续留在根上，即在其中发育。雌虫穿出根表层时呈白色，在雌虫完全成熟时，其表皮变硬、变褐色从而成为保护壳，这就是胞囊，内含大量的卵;至此，胞囊一般从根表面脱落掉入土中，其内的卵可以立即癖化，侵害作物或保持
17、休眠成为未来作物的初侵染源;黯革质的胞囊可抵抗化学物和干旱，使得该线虫在土壤内越冬、滞育及度过不良环境，在无寄主茄属植物存在的情况下，胞囊可在土壤中存活多年并仍有侵染能力。A.4 马铃薯白线虫的传播途径马铃薯白线虫以2龄幼虫在土壤内作短距离的移动，农事操作、农具和交通工具可将农田中的土壤带走，从而近距离传播马铃薯白线虫;马铃薯种薯、苗木、花卉鳞球茎、消费或加工用马铃薯块茎上沾附的土壤可将马铃薯白线虫的胞囊传播到新的马铃薯生产地区，因此，施囊是马铃薯白线虫远距离传播的主要途径。goNi气的NhHH军中华人民共和国出入境检验检疫行业标准马铃薯白线虫检鉴定方法SN月1723.12006告告中国标准出版社出版北京复兴门外三里河北街16号邮政编码:100045同址电话:6852394668517548 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷争舍开本880X12301/16 印张O.75 字数13千字2006年4月第一版2006年4月第一次印刷印数12000定价8.00元9岳书芳:155066 .会167791-2
