1、SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1988-2007 进出口动物源食品中头子包氨节、头子包匹林和头子包瞠琳残留量检测方法液相色谱-质谱/质谱法Determination of cefalexin, cephapirin and cefazolin residues in foodstuffs of animal origin for import and export-LC-MS/MS method 2007-08-06发布2008-03-01实施品也带中华人民共和国发布国家质量监督检验检菇总局中华人民共和国出人搅检验检疫行业标准迸出口动物源食品中头ru氨韦、头子11!林和头
2、范睡琳残留量检测方法液相色谱-质谱/质谱法S:-I/T 1988-2007 4峰中国标准出版社出版北京复兴门外三里河北街16号邮政编码，100045网址电话，6852394668517548 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷.峰开本880X12301/16 印张1.25 字数31千字2007年11月第一版2007年11月第一次印刷印数1-2000善书号，155066.2-18273 定价12元SN/T 1988-2007 前古同本标准的附录A和附录B均为资料性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准由中华人民共和国辽宁出入珑检验检疫局、中华人民共和困深圳出入境检验检疫局、中华人
3、民共和国青海出人统检验检疫局负责起草。本标准主要起草人.林绞宣、李一尘、岳振峰、于灵、王宏伟、萤f书峰、薄海波。本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准。1 范围进出口动物源食品中头子包氨节、头子包匹林和头子包瞠琳残留量检测方法液中目色i昔-质i昔/质谱法SN/T 1988-2007 本标准规定了动物源食品中头抱氨节、头抱匹林和头子包毕驻且剑俨液相色i酋串联质i苦测定方法。本标准适用于肌肉、肝脏、肾脏E鸡蛋和牛奶中头泡氨节、头泡匹、和头抱.t悻残留景的检测和确证。II 2 规范性引用文件-_，. .) / ,. 4 方法提要5 试剂和材料除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为GB/T6682规
4、定用水。5.1 乙腊z高效液相色谱级。5.2 甲醇z高效液相色谱级。5.3 甲酸z高效液相色I晋级。5.4 氯化的。5.5 氢氧化钩。5.6 磷酸二氢御。5.7 磷殷氢三御。SN/T 1988-2007 5.8 固相萃取小柱:Vaters oa5is HLB固相萃取小柱，500mg，或相当者。使用前用甲醉，水预处理。5.9 O. 1 moI!I.氢氧化纳z称取4g氢氧化纳，并用水稀释至1000 mLo 5. 10 乙肪+水(lS十2，体积比)0 5. 11 乙腊十水(30+70，体积tt)0 5.12 0.05 moI汀，磷回去赴缓冲溶液(pH= 8.白。称取8.7 g i!股氢二仰，超纯水溶
5、解，稀释至1 000 mLo调节pH值至8.5士0.105.13 O. 025 mol/L磷酸盐缓冲济液(pH= 7.川。称取3.4g li持自主二氢衍，超纯水溶解，稀释至1 000 mI.。调节pHjil至7.0土0.105.14 0.01 mol/L乙酸饺济液(pH=4.5):称取0.77g乙酸钱，超纯水溶解、稀释至1000 mL，用甲E空调节pH值至4.5士0.105. 15 头抱氨节、头子包匹林、头抱瞠叶中标准品:纯度大于等于95%。5. 16 头抱氨节、头子包匹林、头子包略琳标准储备溶液z分别称取适量标准品(5.1日，分别用乙脂水溶液(5. 11)溶解定容至100mL，浓浓浓度为10
6、0g/mL，置于180C冰箱避光保存.5. 17 头抱氮爷、头于1匹林、头也略叶中混合标准储备液=分别吸取远班的头子臼氮窄、头抱匹林、头抱略琳的标准储备液于100mI.容量瓶中，用磷酸盐缓冲济液(5.13)定窑至主IJ度，配成混合标准储备液。使得混合标准储备液中头子包氨窄、头抱匹林、头抱瞠琳的浓度分别为200ng/mL、100ng/mL、50ng/mL。置于4l:冰箱i!l光保存。5. 18 混合标准工作液z将混合标准储备液逐级稀释2，5，10，20.100倍，用磷酸盐绞冲溶液(5.13)定容，配成一系列混合标准工作液。置于冰箱避光保存，用于制作工作出l线。6 仪器和设备6. 1 高效液相色i
7、忏质i甘/质谱仪3配有电喷雾离子源。6.2 旋转蒸发器。6.3 固相萃取装置。6.4 离心机。6.5 均质L6.6 淤涡混合器，6.7 pH 计。6.8 氮吹仪。7 测定步骤7. 1 提取7. 1. 1 动物肝脏、肾脏、肌肉组织、鸡蛋称取5.00g已粉碎样品(鸡蛋样品称取10.00g)于50mL肉心管中，加入15mL乙脐水溶液(5.10)，均质提取30s , 4 000 r/min离心5min，请液转移至50mL 勾心管中，另取一离心管，加入10 mL乙M水溶液(5.10)，洗涤均质器刀头;用玻棒拘碎肉心11-巾的沉淀，加入上述洗涤均质器刀头溶液，在派涡混合器上振荡1min , 4 000 r
8、/min离心5mn.上消液合并至50mL离心管中，重复用10mI. 乙脐水溶液(5.10)洗涤刀头和提取一次，合并至50mI.离心lf巾，定容至40mL.取20mL人100mL 鸡心瓶。7. 1. 2 牛奶称取10.00g样品于50mL离心管中，加入20mL乙1币，均质提取305，4000r/min离心5min，i市2 SN/T 1988-2007 液转移至50mL离心管中g另取一离心管，加入10mL乙月汗水溶液(5.10)，洗涤均质器刀头;用破棒捣碎离心管中的沉淀，加入上述洗涤均质器刀头熔液，在扭曲涡混合器上振荡1min , 4 000 r/min离心5 min，上消液合并至50mL离心管中
9、，重复用10mL乙脂水济液(5.10)洗涤刀头和提取一次，合并至50 mL离心告中，定容至50mL，取25mL人100mL鸡心瓶。鸡心瓶E于旋转蒸发器上(37C水浴)蒸发至除去乙脐(易起沫样品可加人4mL饱和1氧化纳I右;在)。7.2 净化立即向己除去乙肺的鸡心瓶中加入25mL磷股盐缓冲溶液(5.12)，月旋混匀1min，用0.1mol/L 氢氧化纳调节pH值为8.5，以1mL/min的速度通过经过预处理的固相萃取柱，先用2mL海股盐缓冲溶液(5.12)淋洗两次，再用1mL超纯水淋议。用3mL乙肪洗脱(速度控制在1mL/min)。将洗脱液于45C下氮气吹干，用0.025mol/L磷酸盐级冲溶液
10、(5.13)定容至1mL.过0.45m滤股后，供液相色i苦串联质i古测定。7.3 测定7.3. 1 液相色i昔条件7. 3. 1. 1 色i苦校，COS:vJOSILC8柱，250mmX4. 6 mm(内径)，粒度Em或相当者。7.3. 1. 2 流动相，A组分是0.01mol/L乙西金钱溶液(甲酸调pH=4.5);B组分是乙屑。梯皮洗脱程序见表1。7.3. 1. 3 流速，1.0 mL/min。7.3. 1. 4 进样盐100L。步骤时间/min1 0.00 2 3.00 3 5.00 4 15.00 5 20.00 7.3.2 质i昔条件7.3.2. 1 离子源:电喷雾离子源。7.3.2.
11、2 扫描方式z正离子扫描。7.3.2.3 检测方式=多反应监测。表1梯度洗脱程序流速/(mL/min)AI% B/% 1. 0 98.0 2.0 1. 0 98.0 2.0 1. 0 90.0 10.0 1. 0 70.0 30.0 1. 0 98.0 2.0 7.3.2.4 雾化气、气帘气、辅助气、碰撞气均为芮纯氮气;使用前应调节各参数佼质i苦灵敏度达到检测要求，参考条件参凡附录A.7.3.3 高效液相色谱串联质i茸测定根据试样中被测物的含量的况，选取响应值丰fI近的标准工作浪一起进行包1分析。标准工作液和f牙切l液中头抱氨书、头泡匹林和头泡吨琳的响应的均应在仪器线性响应范围内。对标准工作液
12、和样液等体积进行测定。在上述色谱条例下头抱氨节、头泡匹林和头抱略琳的参考保留时间分别约为11. 3 min、12.3min、13.1 min.标准溶液的选择性离子流图参见附录B中图B.1, 7.3.4 定性测定按照液相色i击-串联质i昔条件测定样品和标准工作溶液，如果检测的质量色谱曲量保留时间与标准品一致，定量测定时采用标准曲线法测定。定性时应当与浓度相当标准工作溶液的相对丰度一致，相对丰3 SN/T 1988-2007 度允许偏差不超过表2规定的范围，则可判断样品中存在对应的被测物。表2定性确证时相对离子车度的最大允许偏差相对离于丰度/%允许的相对偏差/%50 20-50 10-20 土20
13、士25士3010 土507.3.5 空白试验除不加试样外，均按上述操作步骤进行.8 结果计算和表述用色谱数据处理机或按式(1)计算试样中头抱氮节、头抱匹林和头抱瞠琳的残留含量，计算结果需扣除空白值3x = c_cV:Y2 z一狞t) l ( . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 9 1 一户/ j 见表30表3lf臼收率一咆添加浓度回肚率/%名称g/kg) 叭噶乒扩j猪肝/t50 :1: 20 20-50 10-20 ;:10 Permitted tolerances/ % 土25:1: 30 :1: 50 7. 3
14、. 5 Blank test - - 1 The operation of the blank test is t怡s8meas the described in the metflod of determination, but with 一一m一y/ 8 C叫 ,/ Calculation the content of macrolidEantibiotic residues in the test sample by LC-MS/MS data proces 阳oraccordi咱tothe fomu|a(1)!The bankvaM Should be subtdMfrom the础。
15、vere圳of-一-胃.-.甲一一一一_jcalculation. ) 1 ( 9 Limit of quantification (LOQ) and recovery 9. 1 Li mit of quantification The limit of cefalexin is 2 I,g/kg,cephapirin is 1 l日/kg，cefazolin is O. 5 l日/kg9. 2 Recovery According to the experimental data , the corresponding recoveries of fortifying concentrati
16、ons are in 13 SNjT 1988-2007 Table 3. Table 3-Recoveries spike! Recove叩/%compound (glkg) Musculature Liver Kidney Egg Milk 2 77.1-94.0 73.4-89.1 72.6-85.9 71.5-90.8 77.5-92.3 cefalexin 20 71. 5-91. 9 76.8-87.5 71.9-93.2 73.8-93.2 72.8-90.6 200 69.8-86.5 80.5-96.8 65.8-92.9 70.4-87.6 74.0-88.7 1 86.1
17、-92.7 69.2-78.5 69.2-90.6 75.3-91.1 73.3-90.0 cephapirin 10 62.2-80.6 62.8-71. 6 70.5-91.0 72.5-88.1 79.4-93.5 100 72.5-90.2 66.5-78.7 68.1-86.4 71.6-86.5 77.1-88.6 0.5 73.6-89.1 65.2-80.1 66.0-87.6 77.2-93.0 80.2-91. 3 cefazolin 5 79.1-88.0 67.4-79.0 70.5-92.9 70.9-87.3 70.0-87.6 50 75.3-82.5 77.2-
18、90.5 67.5-85.6 80.1.-89.5 73.9-96.0 14 Mass spect阳1acquisition, a) IS,5 500 V, b) GS1 ,70 Psi , c) CUR ,30 Psi , d) GS2 ,90Psi, e) TEM,700t , Annex A (informative annex) Reference S:-.I jT 1988-2007 f) Transitions for confirmation and quantification of seven macrolide antibiotics.DP.CE.CXP sees tabl
19、e A. 1. Table A. l-Transitions for confirmation and quantification of cefalexin. cephapirin and cefazolin DP ,CE ,CXP Transitions for Transitions for Compound confirmation quantifi臼tionDP/v CE/V CXP/v m/z m/z 348.2/158.1 40 14 10 cefalexin 348.2/158.1 348.2/174.。24 10 424.3/292.1 55 33 10 cephapirin
20、 424.3/152.。424.3/292.1 19 10 455.1/323.3 50 17 10 cefazolin 455.1/323.3 455.1/155.8 21 10 SN/T 1988-2007 1. 2fk l. (- 8 000.00 26 000. (1(1 三 4酬。2 000.00 。 5酬4 000 ;:; 3 000 z E 2附,00 Annex B (informative annex) Chromatograms 11. 3 飞.1.，.1.2e，丁、cet1e飞in(348.2/158.1)10 I1 12 13 !4 15 16 17 18州I/m!n_ 川、.L9 Ljh 12.3 四phnpiri时424.3/292. 1) 1( 11 12 n lt 15币1718 19 I/mm 、l，5 悦。叫、13.1 cetll.olmH55. 1/323. 3) 9 10 11 12 13 14 15 16 11 18 I/mlll Figure B. l-Selected ion chromatograms of cefalexin. cephapirin.cefazolin standardsCMRM) 书号:lG5066. 2-18273 定价12.00元
