1、G8/T 18204.7-2000 前为贯彻执行公共场所卫生管理条例和GB96639673-1996，GB 16153-1996(公共场所卫生标准儿加强对公共场所卫生监督管理，特制定本标准。本标准中的方法是与GB9663-9673-1996 , GB 16153-1996相配套的监测检验方法。本标准为首次发布。本标准由中华人民共和国卫生部提出。本标准起草单位z广东省卫生防疫站、江苏省卫生防疫站、中国预防医学科学院环挠卫生监测所、天捧市卫生防疫站、北京市卫生防疫站。本标准主要起草人蔡致、封幼玲、陈西平、张淑兰、高晖。23 1 范围中华人民共和国家标准理发用具微生物检验方法金黄色葡萄球菌测定Met
2、hods of microblological examination for barbers tools -Determination of Staphylococcus aureus 本标准规定了理发用具金黄色葡萄球菌的检验方法.GB/T 18204.7-2000 本标准适用于公共理发用具的金黄色葡萄球菌的检验，美容用具金黄色葡萄球菌检验可参照使用。2 引用标准下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文.本标准出版时，所示版本均为有效。所有标准都会被修汀，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。GB/T 18204.3-2000 公共场所茶具微生物检验方法大肠
3、菌群测定GB/T 18204.6-2000理发用具微生物检验方法大肠菌群测定3 定义本标准采用下列定义.金黄色葡萄球菌staphylococcus aureus 指在BaurdParker 培养基或血平板培养基上生长良好，分解甘露醉产酸，血浆凝固酶阳性的革兰氏阳性葡萄状球商.4 仪器4.1 显微镜.4.2 培养箱.4. 3 离心机.4.4 灭菌吸管.4.5 灭菌试管.4.6 载玻片。4.7 酒精灯.4.8 革兰民染色用有关器材.5 培养基和试剂5. 1 膜l!II陈大豆肉汤成分:J是路陈或腕蛋白陈)17 g 植物蛋白陈(或大豆蛋白陈)3g 国絮质量技术监督局2000-09-30批准2001-
4、01-01实施24 氯化纳磷酸氢二愣葡萄糖GB/T 16204.7- 2000 100 g 2.5 g 2.5 g 蒸馆水1000 mL M法=将上述成分混合后.:110热溶解，调pH为孔2-7.3.分装.121C 20 min高压灭菌.5.2 7.5%的氧化纳肉汤成分z蛋白陈牛肉膏氯化纳10 g 3 g 75 g 蒸f留水1 000 mL 制法z将上述成分加热溶解，调pH为7.4.分装.121C15 min高压灭茵.5. 3 Baird Parker平板成分2膜蛋白陈牛肉吾院母漫膏丙回酸创甘氨酸氯化惺(LiCl 6H,O) 琼脂蒸馆水10 g 5 g 1 g 10 g 12 g 5 g 20
5、 g 950 mL pH7.0士O.2 增菌剂的配制:30%卵黄盐水50mL与除菌过滤的1%亚硝酸梆溶液10mL混合，保存于冰箱内.制法s将各成分加到蒸馆水中，加热煮拂完全溶解，冷至25C校正pH.分每瓶95mL.121C高压灭菌15min，1自用时加热熔化琼脂.每95mL加入预热至50C的卵黄亚黯酸饵增菌liJ5mL.摇匀后倾注平板.培养基应是致密不透明的.使用前在冰箱储存，不得超过48h. 5.4 血琼脂培养基成分z营养琼il100 mL 脱纤维羊血(或兔血)10 mL 制法z将营养琼脂加热溶化，待冷至50C左右以无菌方法加人脱纤维羊血，摇匀，制成平板，置冰箱内备用.5.5 甘露醇发酵培养
6、基成分z蛋白陈氯化创甘露碎10 g 5 g 10 g 牛肉管5g 0.2%Jm香萃盼蓝溶液12 mL 蒸馆水1000 mL 制法g将蛋白Jlt.、氯化纳、牛肉吾加到蒸馆水中，加热溶解，调pH7.4.加入甘露喜事和指示剂，混匀后分装试管中.llSC20min高压灭茵备用.5.6 兔(人血浆制备取3.8%拧橡酸纳溶液.121C 30 min高压灭菌.1份加兔(人全血4份，混匀静置.2000-3000 r/min离心3.5min，血球下沉，取上面血浆.5.7 革兰氏染色液25 G/T 18204.7-2000 见GB/T18204.3-2000中第4章第4节。6 操作步骤6. 1 采样方法同GB/T
7、18204.6-2000.将大肠菌群检测后剩余的5mL待检样品，放人45mL7.5%的氯化纳肉汤或膜酶陈大豆肉汤培养基中.36C士lC培养24人6.2 从培养液中取12接种环，划线接种在BairdPairker氏培养基(或用血平皿).于36C土1C培养24 h.在BairdParker氏培养基上菌落为圆形，光滑，凸起湿润，颜色呈黑灰色，边缘整齐、周围混浊，外层有一透明带，在血平板上菌落呈圆形、金黄色、凸起、表面光滑、周围有溶血圆.6. 3 挑取典型商落作涂片染色镜检，为革兰氏阳性，成葡萄状排列。6. 4 甘露院发酵试验s取上述分纯茵落接种到甘露醇发酵培养基中，置36C土lC培养24h.金黄色葡
8、萄球菌应能发酵甘露醉产酸。6.5 血浆凝固酶试验6. 5. 1 玻片法:取清洁干燥玻片，一端滴加一滴生理盐水，另一端滴加滴血浆，用接种环挑取待检菌落，分别在生理盐水及血浆中充分研磨混合.血浆与茵苔混悬液在5min内出现团块或颗粒状凝块时，而盐水滴仍呈均匀混浊无凝固现象者为阳性，如两者均无凝固现象则为阴性，凡珑片试验主阴性反应或盐水滴与血浆均有凝固现象，再进行试管凝固试验.6. 5. 2 试管法z吸取1: 4新鲜血浆。.5mL放入灭菌小试管中，再加入待检菌24h肉汤培养物0.5 mL.混匀，放36C土lC温箱或水浴中，每30min观察一次.24h之内如呈现凝块即为阳性。同时以已知血浆凝固酶阳性和阴性菌株肉汤培养物及肉汤培养基各O.5 mL.分别加入灭商小试管内与0.5 mLl : 4血浆混匀，做为对照.7 结果报告凡在上述选择平板上有可疑茵落生长，经染色镜检，证明为革兰氏阳性葡萄球菌，并能发酵甘露醇产酸，血浆凝固酶试验阳性，可报告检出金黄色葡萄球菌。26
