1、lCS 65140B 47 圆园中华人民共和国国家标准GBT 243 1 320092009-09-30发布蜂蜡中石蜡的测定气相色谱一质谱法Determination of olefin in beeswax-Gas chromatographicmass spectrum method2009-12-0 1实施宰瞀髁鬻瓣訾瓣瞥星发布中国国家标准化管理委员会仪1”刖 昌GBT 243132009本标准的附录A、附录B、附录c和附录D为资料性附录。本标准由中华全国供销合作总社提出。本标准由全国蜂产品标准化工作组归口。本标准起草单位：中国农业科学院蜜蜂研究所、农业部蜂产品质量监督检验测试中心(北京
2、)。本标准主要起草人：陈芳、赵静、陈兰珍、薛晓峰、李熠、吴黎明、周金慧、张金振、王鹏、黄京平。蜂蜡中石蜡的测定气相色谱一质谱法GBT 2431320091范围本标准规定了蜂蜡中石蜡烃类物质的气相色谱一质谱(GC-MS)测定方法。本标准适用于中华蜜蜂(Apis ceTana)蜂蜡(以下简称中蜂蜡)、意大利蜜蜂(Apis mellifera ligustica)蜂蜡(以下简称意蜂蜡)中石蜡烃类物质的测定。本标准对蜂蜡中石蜡烃类物质的判别限为10。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，
3、然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GBT 63791 测量方法与结果的准确度(正确度与精密度) 第1部分：总则与定义(GBT 637912004，ISO 57251：1994，IDT)GBT 63792测量方法与结果的准确度(正确度与精密度) 第2部分：确定标准测量方法重复性与再现性的基本方法(GBT 63792 2004，ISO 5725 2：1994，IDT)3原理试样用石油醚提取，气相色谱一质谱仪检测，内标法定量，用统计学方法进行判别。4试剂和材料41石油醚：分析纯。42异三十烷：标准品，纯度99。43中蜂
4、蜡：取中华蜜蜂的赘脾蜡，以1 000 mL水100 g蜂蜡的比例加水煮沸，粗过滤去除大块杂质，待冷却后用刀片切除底部杂质，重复提纯一次。44意蜂蜡：取意大利蜜蜂的赘脾蜡，制备方法同43。45石蜡：市售纯石蜡。46添加不同比例石蜡的蜂蜡标准品制备：按石蜡与蜂蜡的质量比为1：9；2：8；3：7；4：6；5：5；6：4；7：3；8：2和9：1逐一称取所需的石蜡(45)和蜂蜡(43、44)标准品共18份，每份样品以1 000 mL水100 g蜂蜡的比例加水煮沸，使蜂蜡和石蜡充分熔融并搅匀，冷却后取出风干。获得的样品中添加石蜡的比例为10、20、30、40、50、60、70、80、90。47异三十烷烃标
5、准工作液(1 000 ragL)：准确称取500 mg异三十烷烃标准品(42)于50 mL容量瓶，用石油醚溶解并定容。-18冰箱中保存。5仪器51气相色谱一质谱仪。52分析天平：感量01 g和0000 1 g。53超声波仪。1GBT 24313200954涡旋混合器。55粉碎机。56电炉。57移液器：200 tLL，1 mL，5 mL。58安瓿瓶：1 mL。59烧杯：1 L。510容量瓶：10mL。511统计软件(MatLab)：具有判别分析功能。6试样制备与保存61试样的制备样品经冷冻后破碎至中等块状，粉碎机粉碎，混匀。62试样的保存于4冰箱中保存。7测定步骤71提取称取冷冻粉碎样品及各种标
6、准品500mg，置于10mL容量瓶中，用石油醚溶解并定容至刻度。分取1 mL于安瓿瓶(58)中，添加50 pL浓度为l 000 mgL的异三十烷烃标准工作液，用涡旋混合器混匀，供气相色谱一质谱测定。72气相色谱一质谱测定721气相色谱条件色谱柱：HP-5ms，30 mX025 minX025 Mm，或相当者。进样口温度：280。升温程序：初始炉温为50，持续1 rain；以20rain升温至180持续1 rain；以15rain升温至280持续20 rain。进样体积：1 pL，不分流进样。载气：高纯氦(99999)，流量为1 mLmin。722质谱条件传输管温度：280。离子源温度：250。
7、四极管温度：150。扫描模式：全扫描。扫描范围：50550。723定性测定在相同实验条件下进行样品测定时，如果检出的色谱峰的保留时间与标准样品相一致，并且在扣除背景后的样品质谱图中，所选择的离子均出现，而且所选择的离子丰度比与标准样品的离子丰度比相一致(相对丰度50，允许士20偏差；20相对丰度50，允许25偏差；lo相对车度20，允许+30偏差；相对丰度10，允许土50偏差)，则可判断样品中存在同一烃类或相关化学物质。724定量测定本标准中气相色谱一质谱采用内标法定量测定。保证所测样品中烃类物质及相关化学物质的响应2值均在仪器的线性范围内。纯蜂蜡、石蜡标准品及样品色谱图参见附录A。73平行试
8、验按以上步骤对同一试样进行平行试验。8结果计算蜂蜡中正构烷烃含量采用内标法定量，各组分含量按式(1)计算x。一m，五Ai式中：x。试样中被测组分含量，单位为毫克每升(mgL)；m，加入内标物的浓度，单位为毫克每升(mgL)；A组分i的峰面积；A。内标物的峰面积。注：测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留三位有效数字。9结果判定GBT 243132009通过质谱分析确定了17个主要的组分，组分表参见附录B。用统计软件对样品及添加不同比例石蜡的蜂蜡标准品的各组分进行判别分析，判别分析图参见附录c。当试样的结果最接近某一标准品时，即可以判定该物质与此类标准品为一类物质。10精密度本标准精密度数据是
9、按照GBT 63791和GBT 63792的规定确定的，获得重复性和再现性的值是以95的可信度来计算的。结果参见附录D。GBT 2431320094附录A(资料性附录)中蜂蜡、意蜂蜡及石蜡标准气相色谱-质谱图蜂蜡及石蜡图谱资料见图A1、图A2、图A3。相对丰度17 000 00016 000 00015 000 00014 000 00013 000 00012 000 000儿000 00010 000 0009 000 0008 000 0007 000 0006 000 0005 000 0004 000 0003 000 0002 000 000l 000 000相对丰度12 000
10、00011 500 00011 000 00010 500 00010 000 0009 500 0009 000 0008 500 0007 500 0007 000 0006 500 0006 000 0005 500 0005 000 0004 500 ooO4 000 0003 500 0003 000 0002 500 0002 000 0001 500 000l 000 000500 000相对丰度7 500 0007 000 0006 500 0006000 0005 500 0005 000 0004 500 0004 000 0003 500 0003 000 0002 50
11、0 0002 00001 50001 000 000500 000。TIcC2s午j异 ：十烷。r 。 图A1 中蜂蜡气相色谱一质谱图薛 十烷I c。cJ 上。l、jl i-IlI图A2意蜂蜡气相色谱一质谱图图A3石蜡气相色谱-质谱图附录B(资料性附录)中蜂蜡、意蜂蜡及石蜡中烷烃组分质谱确认表蜡样各烷烃质谱确认资料见表B1。表B1 蜂蜡样品各组分质谱确认表GBT 243132009保留时间 名称 分子式 匹配度 分子离子 定性离子1 定性离子2 定量离子11788 十九烷 Cl 9Ho 95 268 109 79 7212496 二十烷 c20Ht2 97 282 105 85 7813166
12、 二十一烷 C21H“ 99 296 144 92 8013798 二十二烷 cz2H 99 310 141 99 8014399 二十三烷 C23H 98 324 128 70 7914970 二十四烷 GH50 99 338 153 75 8115541 二十五烷 C2sH52 96 352 116 66 7616160 二十六烷 c26H5l 99 366 142 70 8016889 二十七烷 cz7H 99 380 138 72 8017697 二十八烷 岛8H 98 394 112 81 7918 707 二十九烷 C29H60 99 408 153 88 8119897 三十烷
13、C。H 99 422 145 86 8021393 三十一烷 C3lH6 95 437 98 76 7223198 三十二烷 c32H 99 45l 154 88 8025439 三十三烷 C”H 68 99 465 152 81 8128175 三十四烷 G4H70 87 479 123 99 5431561 三十五烷 c35H72 95 493 101 76 725GBT 2431320096判别分析图见图C1。附录C(资料性附录)中蜂蜡、意蜂蜡、石蜡殛添加蜂蜡的判别分析图l石蜡；210添加一定比例的中蜂蜡，添加比例依次为90石蜡，80石蜡，70“石螬，60石蜡，50石蜡，40石蜡，30石蜡，20石蜡，lo石蜡；11中蜂蜡；1220添加一定比例的意蜂蜡，添加比例同上；21意蜂蜡。图c1 中蜂蜡、意蜂蜡、石蜡及添加蜂蜡的判别分析图查询重复性及再现性见表D1。附录D(资料性附录)方法的重复性及再现性表D1 本方法的重复性和再现性GBT 243132009样品名称 重复性 标准差S， 再现性 标准差Sn石蜡 o162 o058 o299 o090中蜂蜡 o032 o011 o140 o049意蜂蜡 o070 o025 o114 o032
