1、量二ICS 65.020.01 B 16 道昌中华人民共和国国家标准GB/T 28979-2012 欧芹壳针子包检疫鉴定方法Detection and identification of Se ptoria petroselini 2012-12-31发布2013-06-01实施rf飞中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局也世卢黯吵中国国家标准化管理委员会。叩前言本标准按照GB/T1. 1-2009给出的规则起草。本标准由全国植物检疫标准化技术委员会(SAC/TC271)提出并归口。本标准起草单位z中华人民共和国厦门出人境检验检疫局检验检疫技术中心。本标准主要起草人E林石明、廖富荣、陈青、黄蓬
2、英、陈红运、王宏毅、吴嫂。GB/T 28979-2012 I GB/T 28979-2012 欧芹壳针抱检疫鉴定方法1 范围本标准规定了欧芹壳针抱的检测和鉴定方法。本标准适用于欧芹属种子、苗木及其产品中欧芹壳针抱的检测和鉴定。2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T 18085-2000植物检疫小麦矮化腥黑穗病菌检疫鉴定方法SN/T 1809 进出境植物种子检疫规程SN/T 2122 进出境植物及植物产品检疫抽样3 欧芹壳针强基本信息拉丁学名:Septor
3、ia petroselini (Libert) Desmazires 中文名称z欧芹壳针抱属真菌界(Fungi)，元性真菌门(Anamorphicfungi) ，未分目(曾归为球壳抱目Sphaeropsidales)，未分科(曾归为球壳抱科Sphaeropsidaceae)，壳针抱属(Storia)。至今尚未发现其有性阶段。欧芹壳针抱自然侵染欧芹(Petroselinum cris pum)和芫要(Coriandrumsativum)，引起欧芹壳针抱叶斑病。该病菌主要通过感染的种子进行远距离传播，种子是重要的初侵染源。欧芹壳针抱的其他相关信息参见附录A。4 方法原理本标准通过分离培养，根据菌落
4、形态特征，病原菌无性世代的分生抱子器、分生抱子梗和分生抱子的形态特征，结合病菌所引起的主要危害症状，对该病原进行鉴定。5 主要试剂、仪器设备和用具5. 1 主要试剂次氯酸锅，蕉糖，甘泊，琼脂，酒精等。5.2 仪器设备超净工作台，高压灭菌锅，光照培养箱，生物显微镜(20X400X)等。5.3 用具白瓷盘，培养皿，酒精灯，吸水纸，载玻片，盖玻片，刀片，手术剪，慑子，尖头慑子，刷子，pH计，血球GB/T 28979-2012 计数板，塑料袋，离心管等。6 抽样与检查按SN/T1809或SN/T2122规定的抽样方法进行抽样检查。检查种子、苗木及其产品是否有病斑、小黑点(分生抱子器)等(参见附录A)。
5、若有小黑点，直接切片在显微镜下检查。受感染的叶片初为黄色小斑，随后变成浅黄色至黄褐色，最后为褐色的病斑。病斑边缘颜色稍深，为坏死圈。病斑圆形至长圆球形，或不规则，平均3mm-8 mm，最大的直径约13mm , 边缘具窄的褐色的坏死线。在叶柄上为卵圆形、暗褐色的小病斑。叶面上病斑产生黑色小点(即分生抱子器。在种子表面具黑色小病斑或小黑点s飞二三7 病菌分离/ 8. 1 形态特征8. 1. 1 在PDA培养基上(见附录盼，菌落糠批状，呈暗褐色(参见图A.3)。从病组织或分离纯化所得的菌落挑取的分生抱子器，在立体显微镜下进行形态观察和切片(最好能够从孔口处切开)，根据分生抱子器、分生抱子梗和分生抱子
6、的形态特征进行鉴定。8. 1.2分生抱子器埋生于表皮下或稍微突出，单室，球形至近球形，有些较扁，黄色至黑褐色，直径55m-200m;具近圆形至椭圆形孔口，直径20m-40m。分生抱子器壁由多角形的厚壁细胞所组成，厚壁细胞直径为3m-5m，黄色至揭色。分生子包子梗短，瓶梗形，元色透明，从分生抱子器的内壁伸出，产抱方式为全壁芽生合轴式。分生抱子具0-4个真隔膜，一般为1-3个隔膜，未成熟的可能没有隔膜，无色透明，线状或近圆柱形，(1.0m-1.5m)X(22m-51m)，长宽比例大于10，通常稍微弯曲，基部钝圆而顶部渐尖。参见图A.4-图A.6. GB/T 28979-2012 8.2 致病性测定
7、8.2. 1 接种体制备刮取在PDA培养3d的可疑菌落的分生抱子，用无菌水配制成105CFU / mL 106 CFU / mL抱子悬津液。8.2.2 接种试验将欧芹种子播种于小盆钵中，每盆播种58粒种子，生长5周7周，备用。用刷子轻扫欧芹幼苗叶片进行创伤，将抱子悬浮液喷雾接种于欧芹的叶片上，每盆接种5株，重复二次。用无菌水作空白对照，如可能，采用欧芹壳针抱已知菌株作阳性对照。接种后用干净的塑料袋包扎封口，在饱和湿度，于200C下黑暗中培养48h后，去掉塑料袋，在65%70%的相对湿度下，移入培养箱，20oC25 oC下黑暗中培养;注意观察，一般在14d后就产生典型的症状。9 结果判定与样晶保
8、存9. 1 结果判定9. 1. 1 未分离到可疑菌落病菌分离培养7d后，仍未产生可疑菌落，则未检出。9. 1.2 分离到可疑菌落分离培养后的可疑菌落，其形态特征如果符合8.1描述的鉴定特征，经致病性接种试验又产生典型的症状，而空白对照没有表现症状，则判定为检出F可疑菌落没有产生典型的症状，则判定为未检出。9.2 记录及样晶保存检测报告应包含所采用的病菌分离方法，包括菌落形态特征、致病性测定所产生的症状照片等。供试样品和所分离到的菌种，应保存在低温冰箱中，以备复核。3 GB/T 28979-2012 附录(资料性附录欧芹壳针强相关信息A 病原菌的名称A.1 中文名称A. 1. 1 飞-_飞 /
9、/ VJ E QU r a p-J/4A /O /刚欧芹壳针抱英文名称A. 1.2 .lea leaf blight of par A. 1.3 在归为球壳抱目Sphaeropsidales), 至今尚未发现其有性阶段。/儿y/ / 同物A. 1.4 寄主植物A.3 自然寄主欧芹壳针抱只发现侵染欧芹(Petroselinumcrispum)和芫要(Coriandrumsativum L.).但不侵染芹菜(Apiumgraveolens)。与之类似的芹菜生壳针抱(Septoriaaiicola) 不会侵染欧芹。欧芹壳针抱引起欧芹叶斑病(亦称叶疫病)，严重影响产量，影响种子的萌发率。A.3.1 接
10、种寄主A.3.2 至今未发现有接种寄主.4 GB/T 28979-2012 A.4 传播途径种子是初侵染来源。病菌在干燥的病残体上可存活3年以上，种子中可存活2年以上，枯死叶片上也可存活几周。种子上可见分生抱子器。在大田，病菌通过雨水的飞溅、风和人工或机械传带而扩散。A.5 症状特征，告手回问、F 各H圄A.3在PDA培养基上的菌落(引自Hagner-Holler，2002)固A.4分生袍子器的孔口仿自Hagner-Holler, 2002) 5 GB/T 28979-2012 HD目圈A.5分生于自子器孔口仿自Ha伊er-Holler，2002) 固A.6产抱细胞和分生于包子仿自J.A. C
11、ooper) A.7 与芹菜生壳针础的区别欧芹壳针抱与芹菜生壳针抱容易混淆，区别见表A.l.表A.1欧芹壳针强与芹菜生壳针抱区别特征形态特征芹菜生壳针抱欧芹壳针抱分生袍子器叶面两面生或茎上生，散生或聚生，球形或扇球形至近球形，有些较扁，黄色至黑褐色，直径球形，直径70m-100m55m-200m;具近圆形至椭圆形孔口，直径20m-40m分生抱子元色，针形，基部钝圆，1-6个隔膜，多数3-4元色透明，线状或近困柱形，0-4个真隔膜，一般为个，(2.5m-5.0m)X (5m-lOm) 1-3个，(1.0m-1.5m)X (22m-51m)，长宽比例大于10产抱方式内壁芽生瓶梗式(eb-ph)全壁
12、芽生合轴式(hb-sym)A.8 地理分布美洲z美国(夏威夷、佛罗里达等)、加拿大E亚7JH:土耳其等z欧洲z德国、英国、法国、荷兰、意大利、罗马尼亚、乌克兰、波兰、希腊、保加利亚、匈牙利、瑞士等F大洋洲z澳大利亚、新西兰等。6 GB/l 28979-2012 附录B(规范性附录)PDA培养基的配制B.1 培养基配方马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂20g，纯净水1000mL. / / / 飞飞i11 / / / 、气、气、飞飞、飞 7 GB/T 28979-2012 参考文献lJ 白金铠.2003.中国真菌志.第十七卷球壳抱目亮二胞属壳针抱属.北京z科学出版社.2J Agriculture
13、and Horticulture Development Board (UK) , 2010. Outdoor herbs: Integrated management of pars1ey septoria and coriander bacteria1 blight, Fina1 Report 2010 , P13. 3 J Best-practice guidelines for protected herbs, Septoria 1eaf spot, http:/www. protectedherbs. org. uk. 4J Cerkauskas R. F. and Uyenaka
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