1、ICS 65. 100 G 25 蜀中华人民共和国国家标准GB/T 29566-2013 蚊类对杀虫剂抗药性的生物学测定方法The bioassay methods for mosquitoes resistance to insecticides 2013-07-19发布fO叫j飞L34在何如?坷，.时时L中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会2013-12-06实施发布前本标准按照GB/T1. 1-2009给出的规则起草。本标准由中国国家标准化管理委员会提出。本标准由中国检验检疫科学研究院归口。GB/T 29566-2013 本标准起草单位z中国检验检疫科学研究院、
2、军事医学科学院疾病预防控制所、中华人民共和国辽宁出人境检验检疫局。本标准主要起草人z张顺合、杨振洲、慈颖、张乐、石华、王林、史慧勤、张晓龙。I GB/T 29566-2013 蚊类对杀虫剂抗药性的生物学测定方法1 范围本标准规定了蚊类对杀虫剂抗药性的成蚊接触法、幼虫浸液法和区分剂量法三种生物学测定方法。本标准适用于蚊类对杀虫剂的抗药性监测和群体抗药性程度的测定。2 术语和定义2. 1 2.2 2.3 2.4 下列术语和定义适用于本文件。抗药性resistance to insecticid臼蚊种的某些群体对某种杀虫剂的耐受量较该蚊种的敏感群体明显增高的能力。半数致死剂量median letha
3、l dosage LDso 杀死测试蚊群体中50%的个体所需要的杀虫剂剂量。半数致死浓度median lethal concentration LCso 杀死测试蚊群体中50%的个体所需要的杀虫剂浓度。抗性系数r四istantindex 抗性群体的半数致死剂量或半数致死浓度的值(R)与敏感群体的半数致死剂量或半数致死浓度的值(S)二者之比值(R/白。2.5 成敢接触法contact method 蚊在接触不同剂量杀虫剂处理的表面后，发生中毒或死亡，依据剂量与效应关系得出抗性系数，用以判断成蚊对杀虫剂的抗药性。2.6 幼虫浸液法immersion method 将蚊幼虫浸人含有不同浓度杀虫剂的水
4、榕液中，蚊幼虫出现中毒或死亡，依据剂量与效应关系得出抗性系数，用以判断蚊幼虫对杀虫剂的抗药性。2. 7 区分剂量法diagnostic dosage method 鉴别剂量法以99.9%敏感群体的致死剂量LD99.9或致死浓度LC999测试该歧种的其他群体对杀虫剂耐受能力的方法，宜用于蚊虫抗性的初步测定。1 GB/T 29566-2013 3 测定方法3. 1 成蚊接触法3. 1. 1 试虫3. 1. 1. 1 测试蚊野外采集幼虫，经实验室养殖一代，选择羽化后4d未吸血的雌蚊作为测试对象E将野外捕捉到的雌蚊分成2组，分别饲喂小白鼠血和5%葡萄糖水，以胃血消化处于谢拉氏ill凹期(参见附录A)或
5、喂糖水饲养12h后的蚊作为测试对象。3. 1. 1. 2 敏感蚊实验室常规养殖啄未接触过杀虫剂的蚊虫。根据测试蚊的吸血情况，相应选择饲喂小白鼠血后胃血消化处于谢拉氏ill-凹期参见附录A)雌蚊或羽化后4d未吸血的雄蚊作为对照。3. 1. 1.3 雌蚊胃血消化期判断参见附录A。3. 1.2 养殖制测试环境条件温度(26士1)C;相对湿度(60士10)%;光照周期L:D=14 h: 10 h. 3. 1.3 器具测定过程所需器具主要为=a) 接触筒(WHO标准筒见图1); a) 立式圄说明zC D A E B b) 侧视剖面A一一-有机玻璃测定筒，筒长125mm，内径50mm，近隔板端有外螺纹FB
6、一一有机玻璃恢复筒，规格同A，C一一尼龙纱封口sD一一有机玻璃拍板，长110mm，开有直径35mm的圆孔z单位为毫米E一一白色不透明的有机玻璃方隔板，由上、下两块合并而成。每块隔板长、宽均为70mm，厚5mm，中间有直径50 mm的困i孔和高10mm的边圈有内螺纹)。圄1接触筒装置2 GB/T 29566-2013 b) 新华1号滤纸，长160mm，宽125mm; c) 白纸，长140mm，宽80mm; d) 天平(感量为0.0001 g); e) 50 mL具备瓶塞的锥形瓶，100mL量筒，100mL刻度烧杯，0.1mL, l mL、2mL、5mL分度移液管zf) 吸蚊管zg) 定时器Fh)
7、 计数器。3. 1.4 试剂和杀虫剂5%葡萄糖水z自油(医用级);乙醒(分析纯);丙酣(分析纯h测试杀虫剂标准品或经标定的原药。3. 1.5 测定步骤3. 1.5. 1 药纸制备的方法用白油和乙酷按1: 2比例混合制备溶剂，按需要量溶解杀虫剂标准品或经标定的原药，配制成不同浓度的溶液(见附录囚。分别吸取2.14mL的榕液，均匀滴于不同的滤纸上，制备成接触滤纸，做好杀虫剂及其浓度标记。用溶剂制备对照滤纸。制备成的接触滤纸室温下放置2h后即可应用，应在6h内使用完。3. 1. 5. 2 试虫与药纸的接触方法用白纸衬贴于恢复筒内壁上1/22/3，然后将恢复筒与方隔板连接s用吸蚊管捕捉25只试虫，吹人
8、筒内，关闭隔板z将接触滤纸平展衬贴在接触筒内壁，然后与恢复筒连接F把隔板抽开，将恢复筒内蚊轻吹入接触筒，迅速关闭隔板，将筒平放，开始计算接触时间F接触60min后，再抽开隔板，将蚊虫吹回恢复筒，关闭隔板，取下接触筒F将恢复筒直立，用浸有5%葡萄糖水的棉花团置于恢复筒一端的尼龙纱网上。3. 1. 5. 3 恢复观察接触试验完成后24h计数对照组和各浓度组的试虫死亡数。凡腹部上翻，6足抽擂，用昆虫针触之不能翻身或爬行者判定为死亡。3. 1. 5. 4 重复试验试验重复3次并设对照组。3. 1.6 结果统计3. 1. 6. 1 测试组有效死亡率范围死亡率最低浓度组应在5%至20%之间，最高浓度组应该
9、在80%至95%之间。3. 1.6.2 死亡率校正若对照组死亡率大于20%，应重新测试E若对照组死亡率在5%至20%之间，测试组死亡率用Abbott公式校正，计算按照式(1)进行。必fA-B% =一X100%. ( 1 ) 3 GB/T 29566-2013 式中zM一一校正死亡率，%;A一一对照组试虫存活百分率，%;B一一处理组试虫存活百分率，%。3. 1.6.3 统计方法将3次的实验数据进行2检验，差异不显著时将3次的实验数据取合并值，接机值分析法计算LDso年g/虫或LCso(%)值、毒力回归线及其95%可信限。差异显著时(P建座座b1期拥圈睦f1喇通噩B如喇通号主P唰碍EEJ1唰廷在自
10、如7期说明21期(谢拉氏I期一一饥饿雌蚊，胃空，卵巢未发育52期(谢拉氏E期一一腹部充满血，红色，卵巢未发育z3期(谢拉氏皿期一一胃血暗红色，后面有2-2.5节腹板和4-5节背板元血，为卵巢所占部分E4期(谢拉氏N期一一胃血变黑，后面有2.5-3节腹板和5-6节背板元血p5期(谢拉氏V期)一一胃血黑色，后面有2.5-3.5节腹板和6.5-7.5节背板元血56期(器时拉氏VI期)-一血黑色，仅在腹侧面有少量血z7期谢拉氏w期)一一血全部消化，卵巢发育成熟。圄A.1雌蚊胃血消化期示意圄GB/T 29566-2013 附录B规范性附录)成敏测定用药纸的剂量换算成蚊测定用药纸的百分浓度和剂量之间的换算
11、见表B.1。表B.1滤纸上两种药剂剂量标准对比自汹浓度自汹-乙谜混合液浓度剂量% % g/mZ 0.125 0.041 25 0.044 0.25 0.082 5 0.089 0.5 O. 165 0.178 1 0.33 0.357 9 G/T 29566-2013 附录C(资料性附录)般类对部分杀虫剂抗药性暂定区分剂量/浓度一些蚊种对部分杀虫剂抗药性暂定区分剂量/浓度见表C.l。表C.1蚊类对部分杀虫剂抗药性暂定区分剂量/j在度蚊种氯菊醋澳氨菊醋中华按蚊成虫0.2% O.OI%b 嗜人按蚊(成虫)淡色库蚊幼虫)O. 01 mg/L O. 001 mg/U 致倦库蚊幼虫)三带暖库蚊(幼虫0.
12、01 mg/L 0.001 mg/L 自纹伊蚊(幼虫)O. 01 mg/L 0.001 mg/U 埃及伊蚊(幼虫)0.01 mg/L O. 001 mg/L 注2成虫的区分浓度是指杀虫剂在白泊中的百分浓度，幼虫的区分剂量是指杀虫剂在水中的剂量。a接触时间为1h. b接触时间为30min. c为WHO所定区分剂量，其余为我国修订补充.10 的-ON|NH阁。华人民共和国家标准蚊类对杀虫剂抗药性的生物学测定方法GB/T 29566-2013 国由s* 中国标准出版社出版发行北京市朝阳区和平墨西街甲2号(100013)北京市西城区三里河北街16号(10004日网址总编室，(010)64275323发行中心，(010)51780235读者服务部，(010)68523946中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷各地新华书店经销* 开本880X12301/16 印张1字数22千字2013年9月第一版2013年9月第一次印刷* 18.00元如有印装差错由本社发行中心调换版权专有侵权必究举报电话，(010)68510107书号:155066 1-47400定价G8/T 29566-2013 打印H期:2013年10月10RF002
