1、ICS 65.020.01 B 16 望中华人民共和国国家标准GB/T 29584-2013 黄瓜黑星病菌检疫鉴定方法Detection and identification of Clados porium cucumerinum EII. et Arthur 2013-07-19发布2013-12-06实施kf飞中华人民共和国国家质量监督检验检捷总局串舍lf伍中国国家标准化管理委员会GB/T 29584-2013 前本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。本标准由全国植物检疫标准化技术委员会(SAC/TC271)提出并归口。本标准起草单位z中华人民共和国内蒙古出人境检验检疫局、中
2、华人民共和国厦门出人境检验检疫局、中华人民共和国湖北出入境检验检疫局。本标准主要起草人z杨永生、罗志挥、吕国忠、陈青、敖威华、郭铁筝、尹凤民、张永宏、朱子平、白桦、李刚。I GB/T 29584-2013 黄瓜黑星病菌检疫鉴定方法1 范围本标准规定了黄瓜黑星病菌Cladosoriumcucumerinum Ell. et Arthur以植株症状、病原菌形态特征为依据的检疫鉴定方法。本标准适用于黄瓜及其他葫芦科植物的种子、秧苗上黄瓜黑星病菌的检疫和鉴定。2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注目期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本包括
3、所有的修改单)适用于本文件。SN/T 1157 进出境植物苗木检疫规程SN/T 1809 进出境植物种子检疫规程3 黄瓜黑星病菌基本信息中文名称=黄瓜黑星病菌。学名:Cladosporiumcucumerinum Ell. et Arthur 1889. 异名:Scolecotrichum melohthorum Prill. &. Delacr 1891, Macnosporium melophthorum Postrup 1893; Cladosorium cucumeris Frank 1893; Cladosporium.scabies Cooke 1903。病害英文名:cucumbe
4、rscab. 属于真菌界Fungi，有丝分裂抱子真菌Mitosporicfungi.该病菌的有性型为子囊菌门球腔菌科Mycosphaerellaceae、球腔菌属MycosphaerellaJohanson.在传统分类上，该菌属于半知菌亚门Deuteromycotina、丝抱纲Hyphomycetes、丝抱目Hyphomycetales、暗色抱科Dematiaceae、枝抱属Clados-porium. 黄瓜黑星病菌的其他信息参见附录A.4 方法原理通过现场检查植株症状、实验室检验，利用病原菌在寄主植株上的症状、病原菌的形态学特征、致病性测定等依据进行鉴定。5 仪器及用具5. 1 体视解剖镜。
5、5.2 生物显微镜。5.3 高压灭菌锅。1 GB/T 29584-2013 5.4 生物培养箱。5.5 超净工作台。5.6 pH计。5. 7 电子天平。5.8 冰箱。5.9 培养皿、慑子、解剖刀、载玻片、盖玻片、酒精灯。6 试剂和培养基6. 1 次氯酸铀。6.2 葡萄糖。6.3 琼脂，6.4 酒精。6.5 PDA培养基z马铃薯200g，葡萄糖.20g，琼脂17g-20gQ马铃薯切块煮沸10min，纱布过滤，加人葡萄糖、琼脂，pH值至i-8，加水定容至1000 mL. 121 c高压灭菌20min.分装各用。7 现场检测7. 1 现场植株症状检查按照SN/T1157规定执行。现场检查中根据黄瓜黑
6、星病在秧苗、瓜条下的症状，将具有典型症状及疑似症状的叶片、茎蔓、果实用塑料袋装好，加贴标识后送实验室进行病原菌分离和鉴定，7.2 种子抽样按照SN/T1809规定执行。8 实验室检测8. 1 植株病组织检测从现场检疫中采集的感病植物组织上挑取灰黑绿色霉层或用刀片于叶背病斑处刮取病菌子实体，移于载玻片中央的水滴中，盖上盖玻片，进行显微镜栓观察。8.2 种子栓测8.2.1 PDA培养基培养法取试验样品种子400粒，经3%-5%次氯酸铀消毒5min - 15 min.将以上处理的种子按每皿10粒-15粒摆放于PDA平板上，置于20c - 22 c恒温箱中培养7d-ll d，待长出菌落后，挑选典型菌株
7、，接种在PDA培养基上进行纯化培养，待形成子实体后进行显微镜检观察。8.2.2 致病性测定选用黄瓜感病品种(如津杂2号)在温室培养至长出两片真叶的幼苗，将待测菌株制备成抱子悬浮2 、电A GB/T 29584-2013 液(浓度为2X106个抱子/mL)，采用喷雾接种法接种黄瓜幼苗，罩上塑料袋保湿过夜，在20.C22 c 条件下孵育7d14 d，进行症状检查，并对病原菌进行显微镜检观察。9 鉴定特征9. 1 植株症状特征9. 1. 1 叶片症状叶片受害初期为近圆形褪绿色小斑点，后扩展成直径2mm3 mm黄白色圆形病斑，后期病斑易呈星状开裂穿孔，孔洞边缘锯齿状，周围叶组织扭皱z病斑具黄白色晕圈，
8、后期不明显。叶脉上病斑一般为长纺锤形，后形成木栓化组织龟裂。9. 1. 2 茎、叶柄、果柄、卷须症状茎、叶柄、果柄处初呈水浸状暗绿色梭形病斑，大小不等，最长可达4cm左右，泼黄褐色，中间开裂下陷、龟裂，少数病斑开裂深度可达2mm3 mm。发病初期，病斑处有透明分泌物，后变为琼瑶色肢状物，胶状物脱落后，病斑龟裂成疮躏状。空气湿度大时，病斑长出灰黑绿色霉层。卷须顶端及中间易被侵染，病斑长梭形，受害部分变为褐色或黑揭色，呈成段萎焉，直至整个卷须干枯，失去功能。9. 1. 3 果实症状瓜条被害病斑龟裂成疮蹦状，果实畸形，病斑凹陷一般深2mm3 mm，最深可达5mm，病瓜一般不腐烂。病斑处溢出半透明胶状
9、物，后变为就瑞色。空气湿度大时，病斑上长出灰黑绿色霉层。参见附录B中的图B.。9.2 病原菌特征9.2. 1 培养性状PDA培养基上菌落为圆形、平展、绒状、灰黑绿色。菌丝白色至灰色，具分隔，具分枝。菌丝白色至灰色、有时卷曲。菌落背面为绿黑色。9.2.2 形态特征分生殖子梗细长，单生或丛生，淡褐色至褐色，基部常膨大，顶部或近顶部有少量分枝，大小平均为(76m380m) X (3.2m5m)。分生抱子芽殖，串生，形成分枝的长链，谈褐色至褐色，椭圆形或拧攘形，多数单胞、少数具一隔，分隔处略锺缩。光滑或具微刺，大小差异很大，单胞抱子大小平均为(3.8m23. 5m)X(2.5m6m);双胞抱子大小平均
10、为(4m25m)X(2m6m)(参见附录B中的图B.2)。10 结果判定植株症状符合9.1的特征，其染病组织上分离的病原菌形态特征符合9.2中的描述F种子在PDA培养基上培养的病原菌特征符合9.2中的描述，经致病性测定植株表现症状符合9.1的病原菌均可判定为黄瓜黑星病菌(黄瓜黑星病菌及近似种类的分类检索表参见附录C、形态特征图参见附录D)。3 GB/T 29584-2013 11 菌种保藏分离并鉴定的菌株需转接在PDA培养基的斜面上，待斜面表面布满菌丝后，置于4C冰箱保存。有条件可进行冷冻干燥保藏菌种。保存期满后灭活处理。4 民GB/T 29584-2013 附录A(资料性附录)黄瓜黑星病菌其
11、他信息A.1 分布亚洲z日本、中国、土库曼斯坦、巴基斯坦、吉尔吉斯斯坦、泰国、印度、柬埔寨、哈萨克斯坦、塞浦路斯、格鲁吉亚、阿塞拜疆、乌兹别克斯坦。欧洲z丹麦、西班牙、荷兰、意大利、德国、捷克、斯洛伐克、奥地利、瑞士、瑞典、罗马尼亚、法国、波兰、爱尔兰、英国、比利时、前南斯拉夫、卢森堡、俄罗斯、匈牙利、芬兰、爱沙尼亚、拉脱维亚、乌克兰、立陶宛、挪威、保加利亚。美洲z哥斯达黎加、巴拿马、萨尔瓦多、危地马拉、加拿大、墨西哥、美国、阿根廷、哥伦比亚。大津洲z澳大利亚、新西兰、新喀里多尼亚。非洲z南非、摩洛哥、毛里求斯、津巴布韦、青尼亚、马拉维。A.2 寄主黄瓜Cucumissati四uL.、笋瓜Cu
12、cumismaxima Duch.、葫芦Lagenariasiceraria (Molina) Standl、丝瓜Luffacylindrica(L. )Roem、苦瓜Momordicacharantia L.和其他葫芦科植物。5 GB/T 29584-2013 附录B(资料性附录)黄瓜黑星病植株症状照片及病原菌形态特征圄黄瓜黑星病植株症状照片及病原菌形态特征见图B.l、图B.2.弩噩噩黯主运翠也ji;，N气罩噩噩鹦蠢f7Y每圄B.1 黄瓜果星病植株症状照片圄B.2黄瓜黑星病病原菌形态特征固。1)寻|自EllisM. B. 1971. 6 GB/T 29584-2013 附录C(资料性附录)黄
13、瓜黑星病菌及近似种类的分类检索囊2】1.分生抱子痕明显.2 1.分生抱子痕不明显.Amorphotheca resinae 2.分生抱子梗的柄坚硬，具黑团抱霉属(Periconia)状抱子头.Cladosporium chlorocehalum 2.分生抱子梗其他特征.，.3 3.分生抱子多数40m.，50mX12m.，15户m，具小剌. . . Mycosphaerella dianthi 3.分生抱子多数40m.-.60mX17m.，22m，具小剌.Mycoshaerellamacrospora 3.分生抱子较小，光滑或具小疵.叫.，.4 4.分生子包子梗常具有末端和中间膨大(节状). 4
14、.分生抱子梗不呈节状.9 5.分生抱子多数宽3m6严m，分生抱子梗常长500mh.Cladosrium oxysorum 5.分生抱子多数宽6m戚更宽，分生抱子梗短小，.6 6.分生抱子多数宽6m.，8m.7 6.分生强子多数宽7m.，10m，.，.、.8 1分抱子光滑，常在隔膜处维缩. . . . . . . . . Cladosporium colocasiae 7.分生抱子密被疵. . . . .,. . . Cladosporium herbarum 8.气生菌丝呈螺旋状缠绕.Clados如riumvariabile 8.气生菌丝不呈螺旋状.Cladosoriurn.macrocarp
15、um 9.分生抱子多数呈球形或近球形，直径3m4.5mCladsoriumsphaeros旷mum9.分生抱子不呈球形或近球形.，Ao.10 10.分生抱予常具3个厚和暗色横隔膜.C?adosorium songiosum 10.分生抱于有隔膜时也不呈明显厚和暗色.1111.寄生在李属Prunus植物上.川V怡entu盯n臼acar咱o呻hil缸a 1口1.寄生在芭蕉属Mus.(2植物上.川. .川. . .川. .川. .川. .川. .川. .川.H. .川.Ct缸ad白os咱07叫ummusaee 1口1.寄生在香瓜属Cucumi岳和其他葫芦科植物上. ., Cladosporium c
16、ucumerinum 11.腐生，有些菌株为寄生. Cladosporium cladosporioides 2)弓|自EllisM. B. 1971. 7 GB/T 29584-2013 附录D(资料性附录黄瓜黑星病菌近似种类形态特征圄黄瓜黑星病菌近似种类形态特征见图D.l图D.6.a) Amorphothec resine b) Cldosporium chlorocephlum a) Mycospherell dinthi b) Mycospherell mcrospor 圄D.1 Amorphotheca resinae、伽dosporium chlorocephalum形态特征圄圄D
17、.2 Mycos phaerella diant.挝、Mycosphael甘a) Cldosporium oxysporum 向国vtenu -扩这ALVb) Cldosporium colocsie 圄D.3Cladosponum oxysporum、Cladosponum colocasiae形态特征圄8 GB/T 29584-2013 a) Cladosporillm herbarllm b) Cladosporillm variabile c) Cladosporium macrocarpum 图D.4Cladosporium herbarum、Cladosporiumvariabil
18、e和Clados porium macrocarpum形态特征图a) Cladosporium sphaerospermum b)adosporium spongiosum c) Venturia carpophila 圄D.5Cladosporium sphaerospel唰um、Cladosporiumspongiosum和Venturia car po phila形态特征圄9 GB/T 29584-2013 10 a)ados porium musae b) Cladosporium cucumerinum c) Cladosporium cladosporioides 圈D.6Clad
19、osporium musae、Cladosporium cucumerinum和Clados porium clados porioides形态特征圄EON-叮白白NH阁。华人民共和国家标准黄瓜果星病菌栓在鉴定方法GB/T 29584-2013 国中* 中国标准出版社出版发行北京市朝阳区和平里西街甲2号(100013)北京市西城区三里河北街16号(10004日网址总编室:(010)64275323发行中心:(010)51780235读者服务部:(010)68523946中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷各地新华书店经销* 开本880X 1230 1/16 印张1字数22千字2013年10月第一版2013年10月第一次印刷善18.00元如有印装差错由本社发行中心调换版权专有侵权必究举报电话:(010)68510107书号:155066. 1-47528定价打印日期:2013年10月30日F002
