1、G8/T 5413. 1-1997 前言本标准仅对GB5413-85中A.3章半微量凯氏定氮法的文本格式进行了修改，内容未做改动。本系列标准从实施之日起，代替GB5413-850 本标准由中国轻工总会提出。本标准由全国乳晶标准化中心归口。本标准负责起草单位z国家乳制品质量监督检验中心。本标准参加起草单位a卫生部食品卫生监督检验所、浙江省轻工业研究所、哈尔滨森永乳品有限公司、雀巢中国投资服务有限公司。本标准主要起草人z王芸、黄敏、李玉贤. ZZI 中华人民共和国国家标准婴幼儿配方食品和乳粉蛋白质的测定Mllk powder and formula foods for infant and you
2、ng children -Det田mlnatlonof protein 1 范自本标准规定了蛋白质的测定方法.本标准适用于婴幼儿配方食品和乳粉中蛋白质的测定e2 方法提要GB/T 5413.1-1997 代替GB5413-85在加热时，硫醺分解成亚硫酸醉、水和氧。有机物被氧化为二氧化碳和水，而蛋白质的氨态氮与过量硫酸反应转变为硫酸镀，硫酸镀在碱性溶液中进行蒸馆。将蒸馆出来的氨用翻酸吸收，再用酸标准溶液滴定。3 试剂所有试剂，如未注明规格，均指分析纯，所有实验用水，如未注明其他要求，均指三级水。3. 1 浓硫酸。3.2 硫酸御。3.3 硫酸铜.3. 4 过氧化氢溶液z体积分数为30%。3.5棚酸
3、溶液叫H，BO，)为3口g/L。取30g棚酸，溶解在1L水中。3.6 甲基红-澳甲盼绿混合指示剂s用体积分数为95%的乙醇，将澳甲J绿及甲基红分别配成19/L的乙醇溶液，使用时按19/L澳甲盼绿.19/L甲基红为5 1的比例混合。3.7硫酸标准溶液.c(H+)为0.0500mol!L。取3mL浓硫酸加到15mL水中，冷却后洗入1000mL容量瓶中，定容。3.8 氢氧化纳溶液，质量比为400/1000。称取400g氢氧化俐，用1000mL水溶解，待冷却后移入试剂瓶中.4 仪器常用实验室仪器及g4. 1 凯氏烧瓶.500mL或250mL。4.2 定氮蒸汽蒸馆器.4.3 滴定管.25mL。44 三角
4、烧瓶，250mL。国京技术监督局1997-05-28批准222 1998-09-01实施GB/T 541 3. 1-1997 5 操作步骤5. 1 样品的和j备将样品全部移入约两倍于祥晶体积的洁净干燥容器中，立即盖紧容器，反复旋转振荡，使佯品彻底混合均匀。5.2 测定5.2.1 称取样品钮，精确至0.2mg.放入凯氏烧瓶(4.1)中，加入10g硫酸饵(3.2)和19硫酸铜(3. 3) .量取20mL浓硫酸(3.1) .徐徐加入凯氏烧瓶中，混合。注1 加入样品及试剂时，避免粘附在瓶颈上.2 加入梳理童僻的作用.提高硫酸的沸点(338C).增进反应速度.lOg硫酸饵将沸点提高到400C.但过多的硫
5、酸饵会造成沸点太高，生成的硫酸氢镀在513C会分解.3 加入硫酸铜的作用，作催化剂，使氧化作用加速。5.2.2 凯氏烧瓶的瓶口放一小漏斗，用微火加热(小心瓶内泡沫冲出而影响结果).当瓶内发泡停止，稍加大火力。同时，可分数次加入10mL过氧化氢溶液(3.4)(但必须将烧瓶冷却数分钟以后加入)。当烧瓶内容物的颜色逐渐转化成透明的淡绿色时，继续消化O.5lh(若凯氏烧瓶壁粘有碳化粒时，进行摇动或待瓶中内容物冷却数分钟后，用过氧化氢溶液冲下，继续消化至呈透明为止)。然后取下并使之冷却。5.2.3 将澄清的消化液小心移入100mL容量瓶中，以水洗三次凯氏烧瓶，洗涤液并入上述容量瓶中，冷却后稀释至JLt并
6、摇匀。5.2.4 吸取25mL消化液于定氮蒸馆器中，在冷凝器的下端放置一个盛有50mL棚酸溶液(3.5)、3滴甲基红漠甲盼绿混合指示剂(3.的的250咽L锥形瓶，使冷凝器下端的玻璃管在液面以下。将25mL氢氧化纳溶液慢慢地加入蒸馆瓶中(溶液应呈强碱性).迅速将塞予塞好，然后通入蒸汽进行蒸锢，蒸至液面达150mL时，提出冷凝器下端的玻璃管，用蒸馆水冲洗冷凝管下端，将洗液-并聚集于翻酸溶液中，让玻璃管靠在锥形瓶的瓶壁，出液口在200mL刻度线以上，继续蒸锢，蒸至液位达200mL。注z燕馆时要注意蒸馆情况，避免瓶中的液体发泡冲出，进入接受瓶.火力太弱，蒸馆瓶内压力减低.贝IJ接受规内液体会倒流，造成
7、实验失败.5.2.5 用硫酸标准溶液(3.7)滴定至溶液出现酒红色为止，记录所用硫酸标准溶液的体积。同时进行空白试验，并在结果中加以校正。6 分析结果的寝述( V - V ,) X c(H+) X 2 X 0.014 X F 样品中蛋白质含量组/100g)= . . V- ， ， n，. v. V.L X 100.( 1 ) 25 式中:V一一滴定时消耗硫酸标准溶液的体积，mL;V，-空白试验消耗硫酸标准溶液的体积，mLzc(H勺一硫酸标准溶液中H+的浓度.moI/L，m-一样品的质量，g;0.014一一氮原子的摩尔质量.kg/moI，刑只一一-. 100 F一氮换算为蛋白质的系数。乳粉为6.38.纯谷物类配方食品为5.90.含乳婴幼儿谷物(配方)食品为6.25。注g空白实验仅不加入样品，操作步骤与样品相同。223 G8/T 5413. 1-1997 7 允许缝同一样品的两次测定值之差不得超过平均值的1.5%。224
