1、GB/T 5413.10一1997前言在婴幼儿配方食品和乳粉中维生素凡的含量较低，且在碱性条件下易分解.本标准给出的反相高压液相色谱法，是在参考了大量国内外文献的基础上，经过反复实验而确定的，解决了上述问题，方法快速、准确.本系列标准从实施之日起，代替GB5413-850 本标准由中国轻工总会提出.本标准由全国乳品标准化中心归口.本标准负责起草单位s国家乳制品质量监督检验中心。本标准参加起草单位g卫生部食品卫生监督检验所、浙江省轻工业研究所、哈尔滨森永乳品有限公司、雀巢中国投资服务有限公司.本标准主要起草人z杨金宝、王芸、王心祥。259 中华人民共和家标准婴幼儿配方食品和乳粉维生素品的测定Ml
2、lk powder and formula foods for infant and young cbildren -Determll)ation of vltamln K, content 1 范围本标准规定了用液相色谱法测定维生素凡的方法。本标准适用于婴幼儿配方食品和乳粉中维生素凡的测定。2 方法提要GB/T 5413.10-1997 代替GB5413-85 样品经酶水解后，用石油隧萃取，蒸发溶剂，浓缩后的样品进行高压液相色谱测定，以乙腊甲醇水为流动相，UV检测器，于270nm波长下，定量维生素丸。3试lIIJJ 所有试剂，如未注明规格，均指分析纯g所有实验用水，如未注明其他要求，均指三级
3、水。3. 1 高峰氏淀粉酶(Taka-Dias tase)。3. 2 磷酸缓冲榕液，pH=7.80 溶解2.78g磷酸二氢销和25.6g磷酸氮二纳在lL水中。3.3脂酶z每毫克蛋白不得少于2300单位。3.4 氢氧化纳溶液:c(NaH)为10mol/Lo溶解400g氢氧化纳颗粒在lL水中。3.5 氯化销溶液z饱和.3. 6 乙醇z体积分数为95%。3. 7 石油酷。3.8 无水硫酸纳.3.9 正己烧g色谱纯3. 10 乙腑g色谱纯。3. 11 甲醇g色谱纯。3.12 水g色谱纯.3. 13 标准溶液3. 13. 1 标准贮备液g浓度为2.5mg/mL.准确地称取25mg维生素K，于10mL容量
4、瓶中，用正己烧定容。3. 13. 2 标准工作溶液，浓度为0.25mg/mL。吸取lmL标准贮备液于10mL容量瓶中，用正己烧定容。国.技术监督局1997-05-28批准260 1998-09-01实施4 仪器常用实验室仪器及24. 1 分液漏斗:500mLo4.2 旋转蒸发器，4.3 恒温水浴振荡器。4.4 高压液相色谱仪.带紫外检测器。GB/T 5413.10-1997 4.5 色谱柱:25cmX4.6mm.C或具同等性能的色谱柱。5 操作步骤5. 1 样品处理5. 1. 1 含淀粉的祥品 准确称取lOg样品，放入500mL平底烧瓶中，加入19Taka淀粉酶(3.1) .再加入50mL45
5、50C的蒸馆水.混合均匀后，用氯气排除瓶中空气，盖上瓶塞，置45C烘箱内30mino5.1.2 不含淀粉的样品准确称取10g样品于500mL三角瓶中，如入75mL水，均质g5.2 测定液的制备5. 2. 1 于上述处理过的样品溶液中加入50mL磷酸缓冲溶液(3.2)和1.52.0g脂酶(3.3) .于37C水浴上连续振荡lho5.2.2 取出，加入5mL氢氧化纳溶液(3.4)。5.2.3 定量地转移上述溶液于一个500mL分液漏斗中，加入25mL饱和氯化制榕液(3.5)和50mL乙醇(3.6) .充分混合。5.2.4 加入100mL石油酶(3.7).加塞振摇2mino小心地去掉塞子，加入另外5
6、0mL乙醇(3.们，静置分层，上层为有机相，中层为脂肪酸层，下层为水相。5.2.5 放出水桶和脂肪酸层于另一个500mL分液漏斗中。再次用lOOmL石油磁(3.7)萃取，静置分层，弃去水相，合并黯相.5.2.6 用蒸锢水洗涤石油磁相，直到践相为中性。5.2.7 将石油隧通过无水硫酸销(3.8)进入到一个500mL平底烧瓶中，在旋转蒸发器上50C下蒸发石袖酷至近干。5. 2. 8 用石油酶(3.7)转移残留物到一个lOmL试管中，用氯气吹子。准确加入lmL正己饶，充分振荡溶解残留物，得到待测溶液.注1 样品中的脂肪小于句时，用此量腊酶，如大于钮，可多加一些脂酶，以使脂肪水解完全.2 最后制备的样
7、品必须放在冰箱中冷却，以析出脂肪酸.3 在分层后，必须小心地放出水相及脂肪酸层，否则会增加样品的干扰物质.5. 3 色谱分析条件流动相z乙脯g甲醇，水=70 : 22 : 80 流速:2.0mL/min。校温:40C 0 检测器波长:270nm。记录纸速度，O.5cm/mino进样体积:25L。261 GB/T 5413.10-1997 6 分析结果的寝述(Hs/HB) X C 样品中维生素K，含量(mg/100g)= 一-T旱?一式中.Hs一一样品中维生素K，峰高，H B 标准工作液中维生素K，峰高，CB-一标准工作液维生素凡的质量浓度.mg/mL，Vs一一样晶体积，mL;ms一-样品的质量.g。7 允许差两次测得结果的最大偏差不得超过含量的10%。262 . . ( 1 )
